新一代可调节的促进融合的溶瘤单纯疱疹病毒1型病毒及使用方法技术

对常规疗法具有抗性的恶性肿瘤代表了显著的治疗挑战。本发明专利技术的实施方案提供了新一代可调节的促进融合的溶瘤单纯疱疹病毒‑1，其在选择性杀伤靶细胞(例如肿瘤细胞)方面更有效。在本文呈现的各种实施方案中，本文描述的溶瘤病毒适于治疗实体瘤以及其它癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新一代可调节的促进融合的溶瘤单纯疱疹病毒1型病毒及使用方法相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2018年11月28日提交的美国临时申请第62/772,293号的权益，所述美国临时申请的内容通过引用以其整体并入本文。序列表本申请含有已经以ASCII格式以电子方式提交并且在此通过引用以其整体并入的序列表。在2019年11月8日创建的所述ASCII拷贝被命名为043214-090140WOPT_SL.txt，大小为204,542字节。专利
本专利技术涉及使用可调节的促进融合的溶瘤单纯疱疹病毒1(HSV-1)病毒治疗癌症的组合物和方法。背景溶瘤病毒治疗需要利用病毒在人细胞中繁殖和裂解人细胞的能力，并且这种病毒复制依赖性裂解优先针对癌细胞。癌症生物学的进展以及对宿主因子和病毒编码的基因产物在控制感染细胞中的病毒产生中的作用的详细理解，已经促进了一些病毒作为抗癌的潜在治疗剂的使用(Aghi和Martuza,2005；Parato等人,2005)。单纯疱疹病毒(HSV)具有作为溶瘤剂的几种独特性质(Aghi和Martuza,2005)。它可以感染广泛的细胞类型，导致新病毒的复制和细胞死亡。HSV具有短的复制周期(9至18h)并且编码许多非必需基因，当被缺失时，这些基因极大地限制了病毒在非分裂正常细胞中复制的能力。由于其庞大的基因组，可以将多个治疗基因包装到溶瘤重组体的基因组中。HSV-1的复制条件性毒株作为溶瘤剂的用途被首先报道用于治疗恶性胶质瘤(Martuza等人,1991)。从那时起，人们进行了各种努力以试图扩大其治疗功效和提高病毒在肿瘤细胞中的复制特异性。然而，不足为奇的是，损害正常细胞中病毒复制的基因缺失也导致靶向肿瘤细胞的病毒溶瘤活性显著降低(Advani等人,1998；Chung等人,1999)。目前，还没有能够仅杀伤肿瘤细胞而保留正常细胞完整的溶瘤病毒。因此，现有溶瘤病毒的治疗剂量受到显著限制(Aghi和Martuza,2005)。可以严格控制和药理学调整溶瘤病毒复制的溶瘤病毒的可用性将提供极大增加的安全性和治疗功效。这种可调节的溶瘤病毒将在肿瘤被消除后在邻近和远处组织中使不需要的复制以及在靶区域中不希望的子代病毒超载量最小化。该调节特征还允许在检测到不良反应时迅速关闭病毒的溶瘤活性(Aghi和Martuza,2005；Shen和Nemunaitis,2005)。本文描述的工作呈现了溶瘤HSV的新一代可调节的促进融合的变体，其在杀伤癌细胞方面明显比其它溶瘤HSV病毒更有效。专利技术概述本文描述的本专利技术是一种新型的基于四环素可调节的HSV-1ICP0无效突变体的促进融合的溶瘤病毒QREO5-F，其在人癌细胞中超过正常细胞的优先复制能力通过病毒在人癌细胞系中的系列繁殖而进一步增强。本文显示，用QREO5-F感染包括乳腺癌、肝癌、黑色素瘤、胰腺癌、卵巢癌和几种不同的非小细胞肺癌细胞的多种人癌细胞类型导致36,000-至5x107倍的四环素依赖性子代病毒产生，同时在感染的生长以及生长停滞的正常人成纤维细胞中观察到很少的病毒复制和病毒相关的细胞毒性。因此，QREO5-F是存在四环素/多西环素的情况下具有复制能力的溶瘤病毒，并且是不存在四环素/多西环素的情况下具有复制缺陷的病毒。重要的是，QREO5-F针对在免疫活性小鼠中预先建立的CT26.WT结肠癌肿瘤是高度有效的。QREO5-F病毒治疗导致诱导有效的肿瘤特异性免疫，其可以在用相同类型的肿瘤细胞再次激发后防止肿瘤生长。总之，QREO5-F是具有适于临床开发的功效和安全性特征的极好候选者。因此，本文描述的一个方面提供了包含重组DNA的溶瘤单纯疱疹病毒(HSV)，其中所述重组DNA包含：含有5’非翻译区和HSV-1或HSV-2的基因，即VP5基因，其与包含TATA元件的VP5启动子可操作地连接；定位在所述TATA元件3’端的6至24个核苷酸之间的四环素操纵子序列，其中所述VP5基因位于所述四环素操纵子序列的3’端；编码与HSV立即早期启动子可操作地连接的四环素阻遏物的基因序列，其中所述基因序列位于ICP0基因座处；与野生型相比增加合胞体形成的变异基因，其中HSV-1或HSV-2变异基因选自：糖蛋白K(gK)变体、糖蛋白B(gB)变体、UL24变体和UL20基因变体；以及编码功能性ICP34.5蛋白的基因序列，其中所述溶瘤HSV不编码功能性ICP0，并且不含有位于VP5的所述5’非翻译区中的核酶序列。在任何方面的一个实施方案中，所述变异基因是编码选自以下的氨基酸取代的gK变异基因：对应于SEQIDNO:2的氨基酸40的Ala至Thr的氨基酸取代；对应于SEQIDNO:2的氨基酸40的Ala至“x”的氨基酸取代，其中“x”是任意氨基酸；对应于SEQIDNO:2的氨基酸99的Asp至Asn的氨基酸取代；对应于SEQIDNO:2的氨基酸304的Leu至Pro的氨基酸取代；以及对应于SEQIDNO:2的氨基酸310的Arg至Leu的氨基酸取代。在任何方面的一个实施方案中，四环素操纵子序列包括两个Op2阻遏物结合位点。在任何方面的一个实施方案中，VP5启动子是HSV-1或HSV-2VP5启动子。在任何方面的一个实施方案中，HSV立即早期启动子是HSV-1或HSV-2立即早期启动子或者HCMV立即早期启动子。在任何方面的一个实施方案中，HSV立即早期启动子选自：ICP0启动子、ICP4启动子、ICP27启动子和ICP22启动子。在任何方面的一个实施方案中，重组DNA是HSV-1基因组的一部分。在任何方面的一个实施方案中，重组DNA是HSV-2基因组的一部分。在任何方面的一个实施方案中，本文描述的溶瘤HSV还包含药学上可接受的载体。在任何方面的一个实施方案中，本文描述的溶瘤HSV还编码至少一种多肽，其能够增加所述溶瘤HSV诱导抗肿瘤特异性免疫的功效。在一个实施方案中，至少一种多肽编码选自以下的产物：白细胞介素2(IL2)、白细胞介素12(IL12)、白细胞介素15(IL15)、抗PD-1抗体或抗体试剂、抗PD-L1抗体或抗体试剂、抗OX40抗体或抗体试剂、CTLA-4抗体或抗体试剂、TIM-3抗体或抗体试剂、TIGIT抗体或抗体试剂、可溶性白细胞介素10受体(IL10R)、可溶性IL10R与IgG-Fc结构域之间的融合多肽、可溶性TGFβII型受体(TGFBRII)、可溶性TGFBRII与IgG-Fc结构域之间的融合多肽、抗IL10R抗体或抗体试剂、抗IL10抗体或抗体试剂、抗TGF-β1抗体或抗体试剂以及抗TGFBRII抗体或抗体试剂。在任何方面的一个实施方案中，本文描述的溶瘤HSV还编码促进融合的活性。本文描述的另一方面提供了包含本文描述的溶瘤HSV中的任一种的组合物。在一个实施方案中，所述组合物还包含药学上可接受的载体。本文描述的另一方面提供了用于治疗癌症的方法，其包括将本文描述的溶瘤HSV中的任一种或其组合物施用至患有癌症的对象。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.包含重组DNA的溶瘤单纯疱疹病毒(HSV)，其中所述重组DNA包含：/na)含有5’非翻译区和HSV-1或HSV-2的基因，即VP5基因，其与包含TATA元件的VP5启动子可操作地连接；/nb)定位在所述TATA元件3’端的6至24个核苷酸之间的四环素操纵子序列，其中所述VP5基因位于所述四环素操纵子序列的3’端；/nc)编码与HSV立即早期启动子可操作地连接的四环素阻遏物的基因序列，其中所述基因序列位于ICP0基因座处；/nd)与野生型相比增加合胞体形成的变异基因，其中所述HSV-1或HSV-2变异基因选自：糖蛋白K(gK)变体；糖蛋白B(gB)变体；UL24变体；和UL20基因变体；以及/ne)编码功能性ICP34.5蛋白的基因序列；/n其中所述溶瘤HSV不编码功能性ICP0并且不含有位于VP5的所述5’非翻译区中的核序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181128 US 62/772,2931.包含重组DNA的溶瘤单纯疱疹病毒(HSV)，其中所述重组DNA包含：
a)含有5’非翻译区和HSV-1或HSV-2的基因，即VP5基因，其与包含TATA元件的VP5启动子可操作地连接；
b)定位在所述TATA元件3’端的6至24个核苷酸之间的四环素操纵子序列，其中所述VP5基因位于所述四环素操纵子序列的3’端；
c)编码与HSV立即早期启动子可操作地连接的四环素阻遏物的基因序列，其中所述基因序列位于ICP0基因座处；
d)与野生型相比增加合胞体形成的变异基因，其中所述HSV-1或HSV-2变异基因选自：糖蛋白K(gK)变体；糖蛋白B(gB)变体；UL24变体；和UL20基因变体；以及
e)编码功能性ICP34.5蛋白的基因序列；
其中所述溶瘤HSV不编码功能性ICP0并且不含有位于VP5的所述5’非翻译区中的核序列。


2.根据权利要求1所述的溶瘤HSV，其中所述变异基因是编码选自以下的氨基酸取代的gK变异基因：对应于SEQIDNO:2的氨基酸40的Ala至Thr的氨基酸取代，对应于SEQIDNO:2的氨基酸40的Ala至“x”的氨基酸取代；其中“x”是任意氨基酸；对应于SEQIDNO:2的氨基酸99的Asp至Asn的氨基酸取代；对应于SEQIDNO:2的氨基酸304的Leu至Pro的氨基酸取代；以及对应于SEQIDNO:2的氨基酸310的Arg至Leu的氨基酸取代。


3.根据权利要求1-2中任一项所述的溶瘤HSV，其中所述四环素操纵子序列包括两个Op2阻遏物结合位点。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的溶瘤HSV，其中所述VP5启动子是HSV-1或HSV-2VP5启动子。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的溶瘤HSV，其中所述立即早期启动子是HSV-1或HSV-2立即早期启动子。


6.根据权利要求1-5中任一项所述的溶瘤HSV，其中所述HSV立即早期启动子选自：ICP0启动子和ICP4启动子。


7.根据权利要求1-6中任一项所述的溶瘤HSV，其中所述重组DNA是HSV-1基因组的一部分。


8.根据权利要求1-6中任一项所述的溶瘤HSV，其中所述重组DNA是HSV-2基因组的一部分。


9.根据权利要求1-8中任一项所述的溶瘤HSV，其还包含药学上可接受的载体。


10.根据权利要求1-9中任一项所述的溶瘤HSV，其还编码至少一种多肽，所述多肽能够增加所述溶瘤HSV诱导抗肿瘤特异性免疫的功效。


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【专利技术属性】
技术研发人员：姚丰，
申请(专利权)人：布里格姆及妇女医院股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US