一种准确、快速测定黄芩药材及其制品中总黄酮含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种准确、快速测定黄芩药材及其制品中总黄酮含量的方法，该方法能够在快速测定黄芩总黄酮的同时，有效降低杂质组分的干扰，使得测定结果更加准确。具体的方法是向黄芩提取物中加入铝盐溶液，在酸性条件下，Al

【技术实现步骤摘要】
一种准确、快速测定黄芩药材及其制品中总黄酮含量的方法
本专利技术涉及测定黄芩总黄酮含量的方法。
技术介绍
黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)为唇形科植物，其干燥根为我国传统中药，具有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎等功效。黄酮类化合物为黄芩中的主要活性成分，主要包括苷类(黄芩苷、汉黄芩苷)和苷元类(黄芩素、汉黄芩素)。其中黄芩苷是黄芩中含量最高的黄酮类成分，约占黄芩药材重量的9％以上。目前，已经报道了许多关于黄芩中黄酮类化合物测定方法的研究，涉及的方法主要有液相色谱法、近红外光谱法、分光光度法等。下面对这三种方法的研究现状及优缺点进行概述：1、液相色谱法：液相色谱法是黄芩黄酮分析的经典方法之一，《中国药典》2015版第一部中将液相色谱法作为黄芩苷含量检测的标准方法，即：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)为流动相，检测波长为280nm。另外有许多科研人员对检测条件进行了研究，形成了许多利用液相色谱技术检测黄芩有效成分的方法。如《滨州医学院学报》2020年2月第43卷第一期文章“同时测定黄芩提取液中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素含量的高效液相色谱方法的建立”，使用C18色谱柱，流动相为乙腈：含0.05％磷酸水溶液(25:75)，流速1mL/min，检测波长275nm，在该检测条件下，黄芩中的这三种成分分离良好，取得了较好的检测结果。专利“CN201210150241-一种从黄芩根中提取黄芩苷和黄芩素的方法”、专利“CN200910075407-黄芩中黄芩苷及黄芩总苷元同时提取分离工艺”等专利中同样采用高效液相色谱法检测黄芩中的黄酮类化合物。液相色谱法在诸多方法中相对准确，具有更高的灵敏度，且通过对复杂组分进行分离，能够精确测定某单一组分的含量。但液相色谱法需要复杂昂贵的仪器，在使用过程中需要消耗大量有毒有害的有机溶剂。仪器在进样前需要长时间排气泡、走平基线，在分析完毕后还需长时间的冲洗色谱柱，所以现在的液相色谱技术还存在耗时长的缺点。2、近红外光谱法：近红外光谱是介于可见光和中红外之间的电磁辐射波，通过扫描样品的近红外光谱，可以得到样品中有机分子含氢基团的特征信息，是一种快速、无损的检测手段，在食品、药品等领域具有广泛的应用前景。专利“CN201610462580-一种黄芩颗粒及其中药制剂”中使用近红外光谱法对黄芩颗粒的质量进行控制，首先采集大量的样品原始吸收光谱图，然后对这些样品中的有效成分进行测定得到实测值，接着采用一系列的化学计量学方法对原始光谱图进行处理，最后构建出近红外光谱数据与实测值之间的定量模型。该专利中所构建的定量模型预测值与实测值之间的偏差较小，取得了比较好的结果。但精密的近红外光谱仪价格昂贵，便宜的便携式光谱仪往往达不到好的预测结果，而且该方法需要经过复杂的数学运算，对使用人员有严苛的知识要求，使得该方法的普及难以实现。3、分光光度法：分光光度法是在植物总黄酮含量分析中使用最广泛的一种方法，《中国药典》2015版第一部中将其作为许多药材总黄酮含量测定的标准方法，如山楂叶、沙棘、半枝莲等药材，大多采用以芦丁为对照品、以亚硝酸钠、硝酸铝与氢氧化钠为显色剂显色后在500nm处测定吸光度值，其原理是芦丁遇到上述显色剂后形成红色络合物，溶液变为红色，在500nm附近有最大吸收值。而黄芩中的主要黄酮类化合物为黄芩苷，遇到该显色剂时并不显红色，不宜采用该方法。内蒙古大学2011年生物工程学科一篇名为“黄芩总黄酮的超声提取工艺及其抗氧化活性研究”的硕士论文就采用了该检测方法，结果黄芩总黄酮含量测定最高值仅为2.88％，远低于药典中规定的黄芩中黄芩苷不得少于9％的质量要求。另外一些研究，如《广州中医药大学学报》2020年4月第37卷第4期“黄芩原药材、药渣的黄芩苷含量测定及体外抗菌活性研究”、《化学分析计量》2008年第17卷第5期“紫外分光光度法测定黄芩中黄芩苷含量”、《安徽农学通报》2021年第18卷第19期“不同型号大孔树脂对黄芩苷纯化工艺的研究”等文章中使用黄芩苷为对照品，直接在黄芩苷的最大吸收波长278nm附近测定吸光度值。但是，黄芩提取物成分复杂，直接在278nm处测定，受杂质组分干扰较大，这种方法往往会得到偏大的结果。还有一些研究人员使用铝盐络合法测定黄芩总黄酮含量，如《中成药》杂志2006年11月第28卷第11期“黄芩总黄酮提取及纯化工艺的研究”一文中，使用三氯化铝溶液显色，在290nm处测定吸光度值；《安徽农业科学》杂志2008年第36卷11期“黄芩总黄酮·黄芩苷提取及纯化工艺研究”一文，使用三氯化铝溶液显色，在283nm处测定吸光度值。这些研究所使用的检测方法虽然使用铝盐络合显色，但选择的测定波长与278nm较为接近，依然无法摆脱杂质干扰的命运。即便分光光度法受其他组分干扰的可能较大，但其仪器价格便宜、操作简单、使用过程中能够尽量避免使用有毒的有机试剂，通过合适的方法也能够尽可能消除杂质组分的干扰，这些优点使得分光光度法在黄芩总黄酮含量测定中依然占有重要地位。本专利就旨在降低杂质组分的干扰，建立一种准确、快速的测定黄芩总黄酮含量的分光光度法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的问题是，针对上述现有技术中的缺点，提出创新方案，尤其是一种能够有效降低杂质组分的干扰，准确、快速的测定黄芩总黄酮含量的分光光度法的方案。为解决上述问题，本专利技术采用的方案如下：一种准确、快速测定黄芩药材及其制品中总黄酮含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)黄芩提取液制备：准确称取黄芩粉m(g)，然后加入乙醇水溶液提取，提取结束后过滤，滤渣重复提取0～2次，合并所有滤液并定容至V0(mL)备用；(2)黄芩苷标准溶液配制：准确称取m1(mg)黄芩苷标准品，使用乙醇水溶液溶解并定容至V1(mL)，制得浓度为m1/V1(mg/mL)的黄芩苷标准品溶液；(3)黄芩苷标准曲线建立：移取V2、V3···Vx(mL)的黄芩苷标准品溶液于Vy(mL)容量瓶中，x为2、3、4、5···，分别加入等量的弱酸性铝盐溶后，使用乙醇溶液稀释定容，形成一系列浓度梯度的黄芩苷标准品溶液，摇匀避光放置20～60min后，以试剂为空白，经紫外可见分光光度计测定吸光度值，最后以黄芩苷标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制出标准曲线Y＝aX+b，其中，Y为吸光度值，X为黄芩苷标准品浓度：X＝(1000Vx(m1/V1))/Vy，(μg/mL)，a为系数，b为截距；(4)样品总黄酮含量测定：移取Vz(mL)的黄芩提取液于Vy(mL)容量瓶中，按步骤(3)中方法显色并测定吸光度值A，最后按下列公式计算黄芩总黄酮含量：式中：A为黄芩提取液的吸光度值；b为黄芩苷标准曲线截距；n为稀释倍数，n＝V0/Vz；V为显色的溶液体积，即Vy(mL)；a为黄芩标准曲线系数；m为步骤(1)中称取黄芩粉质量g。进一步，一种准确、快速测定黄芩药材及其制品中总黄酮含量的方法，其特征在于，所述弱酸性铝盐本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种准确、快速测定黄芩药材及其制品中总黄酮含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)黄芩提取液制备：准确称取黄芩粉m(g)，然后加入乙醇水溶液提取，提取结束后过滤，滤渣重复提取0～2次，合并所有滤液并定容至V

【技术特征摘要】
1.一种准确、快速测定黄芩药材及其制品中总黄酮含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)黄芩提取液制备：准确称取黄芩粉m(g)，然后加入乙醇水溶液提取，提取结束后过滤，滤渣重复提取0～2次，合并所有滤液并定容至V0(mL)备用；
(2)黄芩苷标准溶液配制：准确称取m1(mg)黄芩苷标准品，使用乙醇水溶液溶解并定容至V1(mL)，制得浓度为m1/V1(mg/mL)的黄芩苷标准品溶液；
(3)黄芩苷标准曲线建立：移取V2、V3···Vx(mL)的黄芩苷标准品溶液于Vy(mL)容量瓶中，x为2、3、4、5···，分别加入等量的弱酸性铝盐溶后，使用乙醇溶液稀释定容，形成一系列浓度梯度的黄芩苷标准品溶液，摇匀避光放置20～60min后，以试剂为空白，经紫外-可见分光光度计测定吸光度值，最后以黄芩苷标准品浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制出标准曲线Y＝aX+b，其中，Y为吸光度值，X为黄芩苷标准品浓度：X＝(1000Vx(m1/V1))/Vy(μg/mL)，a为系数，b为截距；
(4)样品总黄酮含量测定：移取Vz(mL)的黄...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵振，安庆莲，马烨，王哲，
申请(专利权)人：南京益唯森生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32