一种与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc及其应用，属于农业生物技术领域，该分子标记AhyRscc的特异性引物对包括：核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物；本发明专利技术的分子标记可以有效的鉴定花生的深红色种皮颜色，一方面有助于基因的精细定位、分离与克隆，另一方面对于花生的分子育种和品质改良都具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc及其应用
本专利技术涉及农业生物
，特别是涉及一种与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc及其应用。
技术介绍
花生是我国重要的油料和经济作物，年种植面积7000万亩左右，产量约1700万吨。花生富含脂肪酸、蛋白质、维生素E和钙、铁、锌、硒等微量元素，还富含白藜芦醇等功能活性物质，具有重要的保健作用，民间称为“长生果”。花生种皮，特别是深红色的花生种皮，富含天然色素，特别是花青素，花青素具有抑制自由基、抗氧化等多种生物学功效(张瑜芳，2003)。另外，花生种皮也被称为花生红衣，是一味传统中药，具有止血、治疗血友病的作用，花生红衣色素为纯天然的色素，无毒安全，是市场上难得的抗氧化天然色素。花生红衣色素作为抗衰老保健品功效性材料，具有诱人的市场应用前景。然而，现有的花生品种以粉红色的为主，深红色的花生品种较少，而且和常规品种相比产量偏低，难以大面积推广(孙奇泽，2015；李朝霞等，2016)。因此，提高深红色花生品种的产量是满足市场需求的根本途径。花生的种皮也是由珠被发育而来的，和其他性状相比，种皮颜色要隔代才能显现，这一特性使得传统育种手段培育深红色种皮花生品种受到了很大的限制。分子标记辅助育种以基因型鉴定为主，对于深红色种皮性状来说，通过切去种子的部分子叶，检测子叶的基因型可以提前确定下一代收获材料的种皮颜色，能够加速深红色花生新品种培育的进程，提高育种效率。然而，目前尚未有关于花生深红色种皮相关基因及分子标记的报道。专利
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，该分子标记可用于花生分子育种及其品质改良，有利于快速得到新的种质资源。为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：本专利技术提供一种与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc，所述分子标记AhyRscc的特异性引物对包括：核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的引物；核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的引物。SEQIDNo.1：5'-GGTAATATAATGTTAACGGCC-3'；SEQIDNo.2：5'-GAAAAAGCAAAGTTGAAGGAA-3'。本专利技术还提供利用上述的与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc鉴定花生种皮颜色的方法，包括以下步骤：(1)提取花生种子或者叶片DNA；(2)采用上述的特异性引物对对所提取的DNA进行PCR扩增；(3)经步骤(2)得到的扩增产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若出现271bp大小的特征条带，则判定待测花生材料下代种子为深红色种皮。进一步地，在步骤(2)中，所述PCR扩增总体积25uL：DNA模板20-30ng/uL1uL，特异性引物对0.5pmol/uL各0.5uL，10mMdNTPmix0.5uL，10×TaqBuffer2.5uL，25mMMgCl22.0uL，Taq酶5U/uL0.25uL，加水至25uL。进一步地，在步骤(2)中，所述PCR扩增反应条件：预变性95℃4min；94℃30s，58℃30s，72℃25s，35个循环；72℃延伸5min。进一步地，在步骤(3)中，采用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。本专利技术还提供一种如上述的与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc的应用，进一步地，所述分子标记AhyRscc位于12号染色体117.03-117.56Mb的区域内，所述分子标记AhyRscc用于花生育种和/或花生品质改良中。进一步地，用于鉴定深红色种皮花生。本专利技术公开了以下技术效果：本专利技术公开了一种与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc，可以用于鉴定深红色种皮的花生，花生的种皮由珠被发育而来，相比其他性状，种皮颜色要在隔代才能显现，例如，粉红种皮做母本与深红色花生父本进行杂交，F1种皮是粉红色(母本)的，F2种皮是浅红色(双亲中间型)的，F3种皮才出现性状分离。因此通过肉眼筛选和培育深红色花生存在很大的盲目性。利用本专利技术提供的标记，可以通过检测花生的DNA提前确定下一代收获材料的种皮颜色，提高育种效率。此外，花生是异源四倍体，A和B亚基因组等位基因高度同源，很多标记难以有效的区分A和B亚基因组，而本专利技术的分子标记是通过多次科学的实验和摸索后筛选出来的，结果可靠，可信度高。本专利技术的分子标记是简单的PCR标记，技术要求简单，与CAPS分子标记相比，不需要经过酶切、纯化、回收等步骤，直接通过PCR扩增和电泳即可实现鉴定，对仪器操作要求也比较低，采用常规实验的常规仪器均可操作，更加容易被人们接受。本专利技术的分子标记可以有效的鉴定花生的深红色种皮颜色，一方面有助于基因的精细定位、分离与克隆，另一方面对于花生的分子育种和品质改良都具有重要的应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为通过全基因组重测序结合集群分离分析法对控制花生红色种皮颜色的基因进行初定位；其中，A：利用分离群体构建极端池进行BSA-seq分析，B：与深红色种皮连锁标记在花生基因组上的分布，C：与深红色种皮紧密连锁标记在花生12号染色体上的分布；图2为利用BSR验证深红色种皮性状连锁区域；其中，A：控制花生深红色基因的精细定位和紧密连锁分子标记AhyRscc的开发，B：分子标记AhyRscc在不同颜色花生材料中的验证结果；图3为花生种子的取样，及取样后花生种子的发芽试验；其中，A：完整种子对照，B：切割子叶后的种子，C：未切子叶的发芽情况，D：切去子叶后的发芽情况；图4为分子标记辅助轮回选择的育种方案快速培育高产深红色花生品种；其中，A：分子标记辅助选择的流程，B：通过分子标记筛选获得的部分深红色花生新品系。具体实施方式现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc，其特征在于，所述分子标记AhyRscc的特异性引物对包括：/n核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的引物；/n核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的引物。/n

【技术特征摘要】
1.一种与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc，其特征在于，所述分子标记AhyRscc的特异性引物对包括：
核苷酸序列如SEQIDNo.1所示的引物；
核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的引物。


2.利用权利要求1所述的与花生深红色种皮紧密连锁的分子标记AhyRscc鉴定花生种皮颜色的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取花生种子或者叶片DNA；
(2)采用权利要求1中所述的特异性引物对对所提取的DNA进行PCR扩增；
(3)经步骤(2)得到的扩增产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，若出现271bp大小的特征条带，则判定待测花生材料下代种子为深红色种皮。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述PCR扩增总体积25uL：DNA模板20-30ng/uL1uL，特异性引物对0.5pmol/uL各0.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵传志，王兴军，袁美，张鲲，侯蕾，厉广辉，田锐铮，夏晗，李膨呈，赵术珍，李长生，李爱芹，潘教文，
申请(专利权)人：山东省农业科学院，
类型：发明
国别省市：山东;37