一种超级增强子相关的长链非编码RNA及其在治疗肝癌中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种长链非编码RNAs为HSAL3，其核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，或其DNA全长序列如SEQ ID NO:2所示。并通过实验证明该基因在肝细胞癌中与肝细胞癌的恶性程度有关，该基因具有肝细胞癌基因治疗的用途。本发明专利技术还提供了该基因的siRNA靶序列，具有抑制该基因表达的作用，具有肝细胞癌的基因治疗的用途。此外，使用脂质纳米材料包裹所述siRNA可作为治疗肝细胞癌的一种新的治疗药物。

【技术实现步骤摘要】
一种超级增强子相关的长链非编码RNA及其在治疗肝癌中的用途
本专利技术属于肿瘤分子生物学与纳米领域，具体涉及一种超级增强子相关的长链非编码RNA及其在治疗肝癌中的用途。
技术介绍
根据GLOBOCAN对全球185个国家36种癌症的统计发现，全球在2020年肝癌的发病率位居全球第六(830,180；8.3％)，死亡率位居第三(905,677；4.7％)。而中国的2018年统计数据显示，肝癌的发病率位居第四(392,868例；9.2％)，癌症相关死亡位居第三(368,960例；12.9％)。肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)约占肝癌病例的90％，是肝癌最常见的形式。目前，HCC的治疗方法包括切除、局部消融治疗、肝移植、经肝动脉化疗栓塞(transhepaticarterialchemoembolization，TACE)、肝动脉灌注化疗(hepaticarteryinfusionchemotherapy，HAIC)和全身疗法。得益于治疗技术的巨大进步，HCC患者的总体生存率和生活质量显着提高。但HCC患者的临床预后仍然很差。因此，进一步探索HCC新的治疗方法并阐述其分子机制迫在眉睫。超级增强子(Super-enhancers，SEs)是来源于基因组DNA的顺式作用元件，由一系列活性调节性增强子组成。超级增强子通过控制细胞/组织类型特异性基因调控，在识别细胞身份和命运方面起着至关重要的作用，从而加速疾病的进展和严重程度。据报道，编码基因表达的上调经常与超级增强子有关。先前的研究已鉴定出HCC中超级增强子的特征，并将编码基因SPHK1鉴定为与超级增强子相关的编码癌基因。然而，对于肝细胞癌中超级增强子相关的长链非编码RNAs(longnon-codingRNAs，lncRNAs)鲜少报道。在本专利技术中，我们鉴定了肝细胞癌特异性超级增强子相关致癌新lncRNA，我们将其命名为HSAL3(英文全称是HCC-specificSE-associatedoncogeniclncRNARP13-890H12.2，中文全称是肝细胞癌特异性超级增强子相关lncRNA3)，目前尚无关于该lncRNA的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种长链非编码RNAs，所述长链非编码RNAs为肝细胞癌特异性超级增强子相关促癌性lncRNA，我们将其命名为HSAL3，(即HCC-specificSE-associatedoncogeniclncRNARP13-890H12.2，也称肝细胞癌特异性超级增强子相关lncRNA3)具有一定促进癌症的功能，超级增强子可通过转录驱动HSAL3的表达，从而促进肝细胞癌细胞的增殖和迁移。本专利技术使用以下技术方案实现本专利技术的目的：第一个方面提供一种长链非编码RNAs，所述长链非编码RNAs为HSAL3，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。本专利技术人发现HSAL3(HCC-specificSE-associatedoncogeniclncRNARP13-890H12.2，肝细胞癌特异性超级增强子相关促癌性lncRNA3)具有一定促进癌症的作用，超级增强子通过转录驱动HSAL3的表达，从而促进肝细胞癌细胞的增殖和迁移，加速癌症的进展和严重程度。第二个方面提供检测如上所述的长链非编码RNAs表达量的试剂在制备肝癌诊断试剂中的应用。由于HSAL3在肝癌细胞中高表达，在正常组织中低表达。因此，可通过检测其表达含量从而诊断检测对象是否患有肝癌。优选地，所述检测表达量的试剂包括扩增引物，所述引物序列如SEQIDNO：9～10所示。可通过引物检测PCR扩增产物检测出HSAL3的表达量。第三个方面提供了抑制HSAL3的表达量的试剂在制备肝癌治疗试剂或药物中的应用。经试验证实通过抑制肝癌细胞中HSAL3的表达量可抑制肝癌细胞HepG2、LM3的生长、增殖和迁移，以及加速肝癌细胞的凋亡。因此，抑制HSAL3的表达量的试剂有望治疗肝癌。优选地，所述抑制HSAL3表达量的试剂为抑制HSAL3的siRNA，所述siRNA的核心序列如SEQIDNO：4或SEQIDNO：5所示。优选地，所述siRNA的核心序列如SEQIDNO：7或SEQIDNO：8所示的siRNA。通过本专利技术针对HSAL3设计的siRNA能沉默HSAL3的表达，从而降低HSAL3的表达量。进一步地，为了增加其稳定性，在SEQIDNO：4或SEQIDNO：5所示的siRNA加了TT。第四个方面提供了一种用于治疗肝癌的药物，所述药物包含抑制肝癌细胞中HSAL3表达量的活性成分。由于抑制HSAL3的表达能够抑制肝癌细胞HepG2、LM3的生长、增殖和迁移，以及加速肝癌细胞的凋亡，因此，能够成功抑制HSAL3表达的活性成分有望成为治疗癌症的新药物。优选地，所述活性成分为抑制HSAL3表达的siRNA，所述siRNA的序列如SEQIDNO：4或SEQIDNO：5或SEQIDNO：7或SEQIDNO：8所示。本专利技术针对HSAL3设计的siRNA能成功抑制HSAL3的表达，因此，这些siRNA可作为治疗肝癌药物的活性成分。优选地，所述药物为纳米颗粒，所述纳米颗粒包含序列如SEQIDNO：4或SEQIDNO：5或SEQIDNO：7或SEQIDNO：8所示的siRNA。使用纳米颗粒包裹所述siRNA，可以有效地进入肿瘤部分，进而发挥对肿瘤发挥作用。优选地，所述纳米颗粒为脂质纳米颗粒(货号：RNA-1002，广州科蓝生物科技有限公司)。脂质纳米颗粒(LNP)模拟细胞膜形成细胞，直径不到100纳米，LNP和肝细胞表面受体结合后被内吞释放siRNA，起到靶向肝细胞HSAL3的目的。本专利技术的有益效果为：本专利技术首次发现了一个超级增强子相关的长链非编码RNA基因，HSAL3，并通过实验证明该基因在肝细胞癌中与肝细胞癌的恶性程度有关，该基因具有肝细胞癌基因治疗的用途。本专利技术还提供了该基因的siRNA靶序列，具有抑制该基因表达的能力，具有肝细胞癌的基因治疗的用途。此外，使用脂质纳米材料包裹所述siRNA可作为治疗肝细胞癌的一种新的治疗药物。附图说明图1为鉴定HSAL3作为一个新的超级增强子的驱动lncRNA示意图；图1A：HepG2细胞中HCFC1、HSF1、pol2、组蛋白H3K4me1、H3K4me3及H3K27ac的ChIP-seq图谱。将超增强子区域从左往右三个峰分别划分成三个组成性增强子(E1-E3)，分别将其克隆到荧光素酶报告载体pGL3-promoter上。图1B：ChIA-PET数据显示了在HepG2细胞中HSAL3启动子与超级增强子之间的空间相互作用。图1A和图1B是根据来自Encode项目(https://www.encodeproject.org/)HepG2细胞的ChIP-seq和ChIA-PET数据重新分析的结果。图1C：双荧光素酶报告基因试验检测HepG2中的这三个增强子元件的荧光素酶活性。图1D：双荧光素酶报告基因试验检测LM3中的这三个增强子元本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种长链非编码RNAs，其特征在于，所述长链非编码RNAs为HSAL3，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，或其DNA全长序列如SEQ ID NO:2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种长链非编码RNAs，其特征在于，所述长链非编码RNAs为HSAL3，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，或其DNA全长序列如SEQIDNO:2所示。


2.检测如权利要求1所述的长链非编码RNAs表达量的试剂在制备肝癌诊断试剂中的应用。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测HSAL3表达量的试剂包括扩增引物，所述引物序列如SEQIDNO：9～10所示。


4.抑制如权利要求1所述的长链非编码RNAs表达量的试剂在制备肝癌治疗试剂或药物中的应用。


5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述抑制HSAL3表达量的试剂为抑制HSAL3的siRNA，所述siRNA的核心序列如SEQIDNO：4或SEQIDNO：5。


6.如权利要求4所述的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭丽，袁小青，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，
类型：发明
国别省市：广东;44