一种鱼用疫苗联合免疫接种方法技术

本发明专利技术提供了一种鱼用疫苗联合免疫接种方法；第一种方式：采用迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株和大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株的抗原浓度以1:10进行疫苗配制注射接种大菱鲆；第二种方式：选取幼苗期大菱鲆进行浸泡接种迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株，长至幼鱼期时采取注射接种大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株。本发明专利技术以冷水性鲆鲽类养殖品种为免疫靶动物，探索了上述两种疫苗的联合接种策略，通过评价该策略对实际生产中鲆鲽类的饲料转化率、死淘率等关键生产性能的影响，确定联合接种策略的可行性和有效性，最终建立起以联合免疫接种为核心的新型鲆鲽类健康养殖生产体系，实现对多病原混合感染的联防联控效果。

【技术实现步骤摘要】
一种鱼用疫苗联合免疫接种方法
本专利技术涉及鱼用疫苗领域；尤其涉及一种鱼用疫苗联合免疫接种方法。
技术介绍
由于水生养殖环境复杂，养殖过程中普遍存在多种病原混合感染风险。目前，我国已获批新兽药注册证的鱼用疫苗仅7种：草鱼出血病灭活疫苗、草鱼出血病活疫苗(GCHV-892株)、嗜水气单胞菌败血症灭活疫苗、牙鲆鱼溶藻弧菌、鳗弧菌、迟缓爱德华氏菌多联抗独特型抗体疫苗、大菱鲆迟纯爱德华氏菌活疫苗(EIBAV1株)、大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗(MVAV6203株)、鳜传染性脾肾坏死病灭活疫苗(NH0618株)，上述疫苗基本为针对单一病原的单效价疫苗产品，故用于预防多病原混合感染导致的养殖病害存在严重局限性。针对多病原混合感染，从技术上可采取两种免疫防控策略：1)一种疫苗自身表达含有两种及以上抗原，形成多效价免疫能力；2)两种以上单一效价疫苗混合配制形成联合疫苗产品，或采用优化的联合接种方式进行多种疫苗接种。第一策略多以一种疫苗株(或载体菌株)为主体出发株，通过基因重组技术构建形成可表达两种及以上外源抗原的重组疫苗株，从而具备针对两种以上病原的多价免疫应答效力。这种产品形式是目前国内外的一个热点研究开发领域，但由于属于遗传改造生物(geneticallymodifiedorganisms,GMO)，存在天然的潜在转基因生物安全问题，因此，在世界范围内各国的行政许可监管程序更加苛刻，极大增加了疫苗产品的研发周期，在国内外水产疫苗领域鲜有该类产品商业化。同时，该类产品形式无法精准控制各抗原的含量与占比，存在针对某一病原的免疫剂量不足或过量的缺陷，可导致多价免疫效力无法达到预期或过剂量接种安全隐患。鉴于上述病害防控需求和不同疫苗免疫策略技术特点，开发兼具效力和安全性的联合免疫策略成为目前国内外水产疫苗商业化的主要技术形式。大菱鲆(又名多宝鱼)是我国北方重要的海水经济养殖鱼种，2019年养殖量达约8万吨，但近年来病害频发导致的经济损失制约了大菱鲆养殖产业的健康可持续发展。迟纯爱德华氏菌和鳗弧菌是大菱鲆养殖过程中的两大重要细菌性病原，前者可引起腹水病，后者可引起出血性败血症。针对上述两种病原，华东理工大学开发了迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株和大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株，并均获批农业转基因生物安全证书(证书号：农基安(2013)第267号和农基安(2011)第065号)。两种疫苗单独注射接种大菱鲆可有效激发鱼体免疫应答，并获得良好免疫保护效果，相对免疫保护力(RPS)均超过70％。但是两种疫苗能否联合应用、联合应用时是否存在抗原竞争、以何种接种策略联合应用可确保接种安全并使疫苗发挥最佳免疫效力，对养殖生产中多病害混合发生起到联防作用未知。Bao等考察了迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株与大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203同时注射接种大菱鲆的免疫效力。实验中两种疫苗以等体积混合后注射接种大菱鲆，抗原含量均为1×106CFU/尾。结果表明，两种疫苗同时接种较单独接种时对爱德华氏菌的相对免疫保护力维持不变(RPS均为70％)，对鳗弧菌的相对免疫保护力由77.7％提高至83.3％。但是该研究未对联合接种实施中两种抗原的含量、配比、接种顺序等进行考察。另一方面，在养殖生产中，大菱鲆幼苗期更容易受感染爱德华氏菌感染，而此阶段(＜120日龄，＜50g)不适宜采用大规模注射接种方式进行免疫，只能采取浸泡免疫接种方式进行病害防控。这就使得在大菱鲆疫苗免疫策略实施中产生了防控漏洞，如何建立大菱鲆养殖全周期的免疫策略，实现养殖全程多病原防控成为一个亟需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是可实现两种鱼用疫苗联合免疫实施的接种策略，用于预防由迟纯爱德华氏菌和鳗弧菌感染导致的养殖病害问题；提供了一种鱼用疫苗联合免疫接种方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术涉及一种鱼用疫苗联合免疫接种方法，所述方法包括：第一种方式：采用迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株和大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉大学，该菌株的分类命名为：Vibrioanguillarum，保藏号：CCTCCNO:M204066；该菌株的抗原浓度以1:10进行疫苗配制注射接种大菱鲆；第一种联合接种策略可实现两种疫苗同时接种，减少鱼体因注射接种操作导致的机械损伤。同时，以抗原浓度为1:10进行疫苗配制后接种大菱鲆，疫苗安全性佳，未对大菱鲆生长产生抑制作用，同时较正常饲养组的饵料系数和死淘率均有降低，用迟纯爱德华氏菌和鳗弧菌野生毒株进行攻毒挑战，较单联疫苗的相对免疫保护力有所提高。第二种方式：选取幼苗期大菱鲆进行浸泡接种迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株，长至幼鱼期时采取注射接种大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株。第二种联合接种策略可实现对不同养成阶段的易感病原进行分阶段预防，两种接种方式有利于局部黏膜免疫应答和全身系统免疫应答的激发，同时，首次免疫有助于鱼体免疫系统对二次接种抗原的识别过程。该接种策略安全性佳，未对大菱鲆生长产生抑制作用，同时较正常饲养组的饵料系数和死淘率均有降低，用迟纯爱德华氏菌和鳗弧菌野生毒株进行攻毒挑战，较单联疫苗的相对免疫保护力有所提高。优选地，所述第一种方式中，所述迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株的推荐抗原含量为1×105CFU/尾，所述大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株的推荐抗原含量为1×106CFU/尾。优选地，第一种方式中，所述大菱鲆的体重约为80～85g。优选地，第二种方式中，以浸泡和注射方式先后接种大菱鲆，选取幼苗期大菱鲆进行浸泡接种迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株，抗原浓度为1×107CFU/ml，长至幼鱼期时采取注射接种大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株，抗原浓度为1×106CFU/尾。优选地，第二种方式中，所述幼苗期大菱鲆体重约为3～5g，所述幼鱼期大菱鲆体重约为30～50g。本专利技术以迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株(该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉大学，该菌株的分类命名为：Edwardsiellatarda，保藏号：CCTCCNO:M2010278)和大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株(该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉大学，该菌株的分类命名为：Vibrioanguillarum，保藏号：CCTCCNO:M204066)为产品基础，以冷水性鲆鲽类养殖品种为免疫靶动物，探索了上述两种疫苗的联合接种策略，通过评价该策略对实际生产中鲆鲽类的饲料转化率、死淘率等关键生产性能的影响，确定联合接种策略的可行性和有效性，最终建立起以联合免疫接种为核心的新型鲆鲽类健康养殖生产体系，实现对多病原混合感染的联防联控效果。本专利技术具有以下优点：(1)本专利技术所涉及的联合免疫接种策略可有效激发鱼体免疫应答，较单联疫苗预防迟纯爱德华氏菌和鳗弧菌的相对免疫保护力有显著提升。(2)本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鱼用疫苗联合免疫接种方法，其特征在于，所述方法包括：/n第一种方式：采用迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株和大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株的抗原浓度以1:10进行疫苗配制注射接种大菱鲆；/n第二种方式：选取幼苗期大菱鲆进行浸泡接种迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株，长至幼鱼期时采取注射接种大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株。/n

【技术特征摘要】
20200910 CN 20201094393971.一种鱼用疫苗联合免疫接种方法，其特征在于，所述方法包括：
第一种方式：采用迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株和大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株的抗原浓度以1:10进行疫苗配制注射接种大菱鲆；
第二种方式：选取幼苗期大菱鲆进行浸泡接种迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株，长至幼鱼期时采取注射接种大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗MVAV6203株。


2.如权利要求1所述的鱼用疫苗联合免疫接种方法，其特征在于，所述第一种方式中，所述迟纯爱德华氏菌减毒候选疫苗株WED株的推荐抗原含量为1×105CFU/尾，所述大菱鲆鳗弧菌基因工程活疫苗M...

【专利技术属性】
技术研发人员：王启要，刘晓红，徐荣静，马悦，张琛，曲江波，王田田，
申请(专利权)人：烟台开发区天源水产有限公司，华东理工大学，
类型：发明
国别省市：山东;37