嵌合抗原受体(CARs)组合物及使用方法技术

本发明专利技术提供了工程细胞，其具有至少一种嵌合抗原受体多肽，以及任选地细胞因子和趋化因子中的至少一种。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合抗原受体(CARs)组合物及使用方法相关申请案之交叉引用本申请根据2018年10月12日先前的美国临时申请第62/745120号和2019年2月9日先前提交的美国临时申请第62/803462号，所有这些都通过引用并入本文。
技术介绍
T细胞，淋巴细胞的一种，在细胞介导之免疫性中起重要作用。其与其他淋巴细胞(诸如B细胞及自然杀伤细胞(NK细胞))之区别在于细胞表面上存在T细胞受体(TCR)。T辅助细胞，亦称为CD4+T或CD4T细胞，在其表面上表达CD4糖蛋白。辅助T细胞在暴露于由MHC(主要组织相容复合体)II类分子呈递之肽抗原时活化。一旦活化，此等细胞快速增殖且分泌可调节免疫反应之细胞因子。细胞毒性T细胞，亦称为CD8+T细胞或CD8T细胞，在细胞表面上表达CD8糖蛋白。CD8+T细胞在暴露于由MHCI类分子呈递之肽抗原时活化。记忆T细胞，一种T细胞亚群，长期留存并回应于其等同源抗原，因此向免疫系统提供针对过去感染及/或肿瘤细胞之“记忆”。经基因改造后，T细胞可于其表面产生特殊受体，称为嵌合抗原受体(CAR)。CART细胞识别肿瘤细胞上的特定蛋白(抗原)。此等经工程改造的CART细胞接着在实验室中生长直至其数目达到十亿。接着将扩增的CART细胞群输注至患者中。迄今为止，临床试验已证实嵌合抗原受体(CAR)T细胞在对标准化学疗法具有抗性的血液科恶性疾病中具有巨大前景。最值得注意的是，特定的CD19CAR(CD19CAR)T细胞疗法具有显著效果，包括B细胞恶性肿瘤的长期缓解(Kochenderfer,Wilson等人2010，Kalos,Levine等人2011，Porter,Levine等人2011，Davila,Riviere等人2013，Grupp,Frey等人2013，Grupp,Kalos等人2013，Kalos,Nazimuddin等人2013，Kochenderfer,Dudley等人2013，Kochenderfer,Dudley等人2013，Lee,Shah等人2013，Park,Riviere等人2013，Maude,Frey等人2014)。尽管CAR疗法在B细胞白血病及淋巴瘤中取得成功，但尚未有明确之CAR疗法应用于软组织肿瘤。鉴于恶性软组织肿瘤之疗法比B细胞恶性肿瘤之疗法具有明显更差之效果(Abramson,Feldman等人2014)，因此CAR疗法具有进一步解决巨大临床需求之潜力。现时存在一些阻碍CAR治疗性方法之更广泛应用之障碍。其中最常见挑战为：(1)抗原标靶及嵌合抗原受体之选择；(2)CAR设计；(3)肿瘤异质性，尤其肿瘤抗原之表面表达之差异。靶向单一抗原具有免疫逃逸之风险，此可由靶向多个所需抗原来解决。大部分CAR嵌合抗原受体为来源于单株抗体之scFv且部分此等单株抗体已用于临床试验或疾病治疗。然而，单株抗体具有有限功效，表明需要替代的及更强效的靶向方法，诸如CAR。靶点发现和选择是第一步，因为没有通用规则来确保或指导CAR设计的有效性。scFvs为CAR之最常用的嵌合抗原受体。然而，抗原上所识别之抗原决定基之CAR亲和结合及位置可影响功能。此外，T细胞或NK细胞之表面CAR表达量受适合的前导序列及启动子影响。然而，过表达之CAR蛋白可对细胞具有毒性。因此，现时仍然需要经改良之基于嵌合抗原受体之疗法，其可慮及T细胞相关恶性肿瘤之更有效、安全及有效靶向。此外，CAR靶向神经母细胞瘤由于存在异质性肿瘤群体以及肿瘤微环境抑制而具有相当的挑战性。长期以来针对神经母细胞瘤的抗原特异性免疫治疗一直致力于改善患者的治疗效果，但迄今为止成功率有限，因为许多此类治疗要么在临床上无效，要么对患者的治疗效果产生不确定的影响。神经母细胞瘤或其他软组织肿瘤(如肉瘤)，抗原多样性很强的疾病的理想靶点目前尚未确定。确定合适的靶点是CAR设计的重要步骤，CAR设计需要解决肿瘤异质性、CAR持续性和肿瘤微环境抑制等问题。CAR设计的有效性和安全性没有一般规律可循。因此，仍然需要改进以嵌合抗原受体为基础的治疗方法，使软组织肿瘤的靶向性更加有效、安全和高效。
技术实现思路
在一个实施例中，本公开提供了一种工程细胞，其含有的第一抗原受体多肽包含第一抗原识别结构域，包括第一信号肽，第一铰链区，第一跨膜结构域，第一共刺激结构域和第一信令域；和第二嵌合抗原受体多肽包含第二抗原识别结构域，第二信号肽，第二铰链区，第二跨膜结构域，第二共刺激结构域和第二信号传导结构域；其中第一抗原识别结构域不同于第二抗原识别结构域，并且第一抗原识别结构域和第二抗原排斥结构域选自白介素6受体，NY-ESO-1，甲胎蛋白(AFP)，甘氨吡啶-3(GPC3)，BAFF-R，BAFF，APRIL，BCMA，TACI，LeY，CD5，CD13，CD14，CD15CD19，CD20，CD22，CD33，CD30，CD41，CD45CD61，CD64，CD68，CD117，CD123，CD138，CD267，BCMA(CD269)，CD38，MMG49表位,Flt3受体，CD4，CLL-1和CS1(SLAMF7)。在另一实施例中，本专利技术提供一种工程多肽，包括嵌合抗原受体和增强子。在另一实施例中，本专利技术提供一种减少靶细胞数量的方法，其步骤包括(i)将所述靶细胞与有效量的具有至少一种嵌合抗原受体多肽的工程细胞接触，对于具有多个嵌合抗原受体多肽的工程细胞，每个嵌合抗原受体多肽是独立的；并且(ii)可选地，检测所述细胞数量的减少。靶细胞包括至少一种细胞表面抗原，选自GD2、GD3、ROR1、PSMA、PSCA(前列腺干细胞抗原)、MAGEA3、糖脂、glypican3、F77、GD-2、WT1、CEA、HER-2/neu、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、甲胎蛋白、CA19-9、CA72-4、NY-ESO、FAP、ErbB、c-Met、MART-1、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4，MUC5、CD30、MMG49表位、EGFRvIII、CD33、CD123、CLL-1、免疫球蛋白kappa和lambda、CD38、CD52、CD47、CD200、CD70、CD19、CD20、CD22、CD38、BCMA、CS1、NKG2D受体、April受体、BAFF受体、TACI、CD3、CD4、CD8、CD5、CD7、CD2和CD138。靶抗原还可以包括病毒或真菌抗原，例如来自人乳头瘤病毒(HPV)或EBV(ebstein-Barr病毒)抗原的E6和E7。在另一实施例中，本专利技术提供了治疗B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性髓性白血病、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合征、慢性骨髓增生性肿瘤、B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和细胞增殖性疾病，即向有需要的患者施用上述任何工程细胞。在另一个实施例中，本公开提供了一种治疗自身免疫疾病的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用本文所述的工程细胞；其中所述自身免疫性疾病或紊乱包括系统性红斑狼疮(SLE)，多本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种工程细胞，包括：/n(i)第一嵌合抗原受体多肽，其包含对选自靶点的CD38，GD2，CD123，CLL-1，，CD33，BCMA，CS1，CD4，CD5，CD7和CD20的第一抗原识别域；第一信号肽；第一铰链区；第一跨膜结构域；第一共刺激域；第一信令域；/n(ii)至少一种选自IL-2，IL-4，IL-7，IL-10，IL-12，IL-15，IL-15/IL-15sushi，IL-15/IL-15sushi锚，IL-18，IL-21，GM-CSF和TGF-的细胞因子；和/n(iii)选自CCL2，CCL3，CCL4，CCL5，CCL7，CCL8，CCL19，CXCL1，CXCL2，CXCL9，CXCL10，CCL21和CXCL12的至少一种趋化因子。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181012 US 62/745,120;20190209 US 62/803,4621.一种工程细胞，包括：
(i)第一嵌合抗原受体多肽，其包含对选自靶点的CD38，GD2，CD123，CLL-1，，CD33，BCMA，CS1，CD4，CD5，CD7和CD20的第一抗原识别域；第一信号肽；第一铰链区；第一跨膜结构域；第一共刺激域；第一信令域；
(ii)至少一种选自IL-2，IL-4，IL-7，IL-10，IL-12，IL-15，IL-15/IL-15sushi，IL-15/IL-15sushi锚，IL-18，IL-21，GM-CSF和TGF-的细胞因子；和
(iii)选自CCL2，CCL3，CCL4，CCL5，CCL7，CCL8，CCL19，CXCL1，CXCL2，CXCL9，CXCL10，CCL21和CXCL12的至少一种趋化因子。


2.根据权利要求1所述的工程细胞，当细胞因子是IL-7时，趋化因子不能是CCL19；而当细胞因子是IL-7时，趋化因子不能是CCL19；当趋化因子为CCL19时，细胞因子不能为IL-7。


3.根据权利要求1-2中任一项所述的工程细胞，其中所述抗原识别结构域对CD19，CD20，CD4或CD38具有选择性。


4.根据权利要求1-2中任一项所述的工程细胞，其中所述抗原识别结构域对CD33，CLL-1BCMA，CS1，CD4，CD5，GD2或CD7具有选择性。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的工程细胞，其中所述至少一种细胞因子包含至少两种细胞因子。


6.根据权利要求1-5中任一项所述的工程细胞，其中所述细胞因子是IL-15/IL-15sushi或IL-15/IL-15sushi锚，趋化因子是CCL2，CCL3，CCL4，CCL5，CCL7，CCL8，CCL19，CXCL1，CXCL2，CXCL9，CXCL10，CCL21或CXCL12。


7.根据权利要求1-6中任一项所述的工程细胞，其中所述趋化因子是CCL19或CCL21。


8.根据权利要求1至7中任一项所述的工程细胞，其中所述细胞因子是IL-15/IL-15sushi，趋化因子为CCL19或CCL21。


9.根据权利要求1至8中任一项所述的工程细胞，其中所述细胞因子和趋化因子均由所述工程细胞分泌。


10.根据权利要求1-9中任一项所述的工程细胞，其中所述抗原识别结构域对CD19具有选择性，所述细胞因子是IL-15/IL-15sushi锚和IL-12，并且所述趋化因子是CCL19。


11.根据权利要求1-10中任一项所述的工程细胞，其中所述工程细胞是T细胞，NKT细胞，天然杀伤细胞或NK92细胞。


12.根据权利要求1-11中任一项所述的工程细胞，其中所述细胞因子和趋化因子是异源表达的。


13.根据权利要求1至12中任一项所述的工程细胞，其中所述细胞因子由所述工程细胞分泌。


14.根据权利要求1-13中任一项所述的工程细胞，其中所述趋化因子由所述工程细胞分泌。


15.一种治疗细胞增殖...

【专利技术属性】
技术研发人员：马钰波，凯文·平茨，蒋迅，雅之·瓦达，陈凯文，
申请(专利权)人：美商生物细胞基因治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US