一种游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂制造技术

本发明专利技术提供了一种新的游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂，通过采用特定分子量和含量的高聚物脲醛树脂，配制得到的样本垫处理液，可以使待测样本中的游离甲状腺素被完全分离，经其处理的样本垫，并进一步制得的游离甲状腺素检测试剂条，用于竞争法检测游离甲状腺素，可使游离甲状腺素被充分捕捉，充分反应，大幅提高游离甲状腺素的检测灵敏度，检测灵敏度达到10pg/ml，满足临床检测需求。同时还提供了脲醛树脂用于制备游离甲状腺素检测试剂条或游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂的用途。

【技术实现步骤摘要】
一种游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂
本专利技术属于生物检测
，涉及一种免疫层析检测试剂条，尤其涉及一种游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂。
技术介绍
荧光免疫层析技术作为一种最常用的POCT技术，具有操作简便，反应速度快，仪器需求小等特点，一般的，检测试剂条由样品垫，结合垫(含标记抗体)，NC膜(含包被抗体/抗原的T线和C线)，吸水垫等组成。测试时，样品加入样品垫中，流入结合垫，水化结合垫的标记抗体，然后在NC膜上流动至检测线T线和C线，根据T/C的信号值来计算样本中被测物的浓度，一般来说C线信号是趋于稳定的，作为控制措施降低试剂条之间的差异，在进行检测试剂条评估时，一般用T线的信号值作为判断依据。游离甲状腺素(简称游离T4，或FT4)作为一种检测甲状腺功能的标志物，当前主要使用化学发光检测(如CN102095881A、CN101551389A等)，市面上没有使用荧光免疫层析技术进行游离甲状腺素检测的产品，主要原因是游离T4在荧光免疫层析的过程中无法充分被捕捉，造成反应不充分，进而导致灵敏度低。一般的，检测试剂条的样品垫与结合垫都需要预处理，但是使用常规处理样品垫的试剂处理的样品垫，仅可以检测100pg/mL的游离T4，而游离T4作为甲状腺功能检测的重要指标，正常值范围在8-15pg/mL，所以100pg/mL的检测灵敏度，无法满足目前的需求，检测时必须考虑更高的灵敏度。因此急需开发更适用于游离甲状腺素检测的荧光免疫层析技术，并提高其检测灵敏度，从而实现更简便快捷、高准确性的游离甲状腺素的现场快速检测。
技术实现思路
为弥补已有技术的缺陷，本专利技术提供了一种新的游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂，通过采用特定分子量和含量的高聚物脲醛树脂，配制得到的样本垫处理液，可以使待测样本中的游离甲状腺素被更好地分离，经其处理的样本垫，并进一步制得的游离甲状腺素检测试剂条，用于竞争法检测游离甲状腺素，可使游离甲状腺素被充分捕捉，充分反应，大幅提高游离甲状腺素的检测灵敏度，满足临床检测需求。一方面，本专利技术提供了一种游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂，所述试剂含有脲醛树脂。在免疫层析检测装置中，常规的样品垫处理液一般包括体系缓冲液、蛋白质、高聚物、盐离子和表面活性剂，其中的高聚物大多采用PVP-k30等非离子型高分子化合物，但其用于游离甲状腺素检测时，并不能使游离甲状腺素与待测血液样本中的其他杂质很好地分离，从而难以实现准确检测。本研究小组经过大量实验，令人惊喜地发现，采用脲醛树脂作为高聚物配制的样本垫处理试剂，从而制得的试剂条，能大幅提升游离甲状腺素的检测灵敏度。这可能是因为脲醛树脂的加入使液体粘度变大，样品在样本垫上层析速度变慢，游离甲状腺素被更好地分离，使抗体更容易捕捉到游离甲状腺素，使游离甲状腺素更容易被结合，抗原抗体反应更加充分。进一步地，所述脲醛树脂的分子量为10000-20000。进一步地，所述脲醛树脂的含量为1％～2％。研究证明，脲醛树脂浓度越大，分子量越大，液体越粘稠，但过于黏稠的溶液在检测时层析速度过慢，会使检测时间过长，反而影响检测灵敏度。因此必须选择合适的分子量和浓度。通过筛选选择了分子量10000和20000两种分子量的脲醛树脂，浓度分别为1％和2％。进一步地，所述样本垫处理试剂还包括体系缓冲液、蛋白质、盐离子和表面活性剂。进一步地，所述体系缓冲液为50mM硼酸缓冲液，所述蛋白质为1％的BSA，所述盐离子为0.1M的NaCl，所述表面活性剂为1％表面活性剂S9；所述样本垫处理试剂的pH为8.2。另一方面，本专利技术提供了一种游离甲状腺素检测试剂条，所述检测试剂条的样本垫采用如上所述的样本垫处理试剂进行处理。进一步地，所述试剂条包括样本垫、结合垫、NC膜、吸水纸和底板，其中所述的结合垫上固定有T4抗体-微球标记物，NC膜上固定有BSA-T4抗原复合物。所述T4抗体可以与人体内的游离甲状腺素结合，可用于检测人体内的游离甲状腺素。本专利技术中游离甲状腺素的测试采用竞争法，样品中被测物浓度与信号值成反比。再一方面，本专利技术提供了一种如上所述的游离甲状腺素检测试剂条的制备方法，包括以下步骤：步骤一、样品垫制备1)配置硼酸缓冲液，并将PH调节至8.2；2)配制含有50mM硼酸缓冲液、1％的BSA、0.1MNaCl、1％表面活性剂S9、1％～2％分子量为10000-20000的脲醛树脂的样品垫处理液；3)取混匀后的样品垫处理液均匀分散在玻纤上，每张玻纤均匀吸收50mL处理液；4)置于烘箱中37℃干燥12小时；步骤二：结合垫制备1)将荧光微球溶液与EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,用于活化微球的羧基，使微球能够偶联抗体)，T4抗体混匀反应，得到T4抗体-微球标记物，储存在pH8.050mMTris缓冲液中作为标记备用液，标记备用液微球含量为0.5％；2)将标记备用液稀释10倍后喷膜；3)结合垫为玻纤；4)喷膜后45℃过夜干燥；步骤三：NC膜制备1)将BSA-T4抗原复合物稀释至1mg/mL；2)按照10μL/cm的速度使用划膜仪划到NC膜；3)划膜后，45摄氏度过夜烘干；步骤四：试剂条装配1)将步骤一处理好的样本垫切成17mm宽的长条，步骤二得到的结合垫切成10mm宽的长条，步骤三处理好的NC膜切成30mm宽的长条，吸水纸裁切成17mm宽的长条，依次黏在底板上，每层之间搭牢1-2mm，获得大卡；3)将大卡用斩切机斩切成4mm宽测试卡，装进卡壳中，形成检测试剂条；3)装入铝箔袋中密封保存待测。再一方面，本专利技术提供了一种游离甲状腺素的检测方法，包括以下步骤：1)取出如权利要求6-7任一项所述的试剂条，在15-30℃复温；2)取60微升待测样品加入试剂条中，室温放置在水平桌面上反应，15分钟后通过荧光免疫分析仪读取测试结果，重复5次。再一方面，本专利技术提供了脲醛树脂用于制备游离甲状腺素检测试剂条或游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂的用途，所述脲醛树脂的分子量为10000-20000进一步地，所述脲醛树脂的含量为1％～2％。本专利技术的有益效果为：1、提供了一种新的游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂，通过采用特定分子量和含量的高聚物脲醛树脂，配制得到的样本垫处理液，可以使待测样本中的游离甲状腺素被完全分离获取，检测灵敏度从100pg/ml提高至10pg/ml；2、提供了一种新的游离甲状腺素检测试剂条，用于竞争法检测游离甲状腺素，试剂条的样本垫采用含有采用特定分子量和含量的脲醛树脂的样本垫处理试剂进行处理，可使游离甲状腺素被充分捕捉，充分反应，大幅提高游离甲状腺素的检测灵敏度，检测灵敏度达到10pg/ml，满足临床检测需求。3、提供了脲醛树脂用于制备游离甲状腺素检测试剂条或本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂，其特征在于，含有脲醛树脂。/n

【技术特征摘要】
1.一种游离甲状腺素检测试剂条的样本垫处理试剂，其特征在于，含有脲醛树脂。


2.如权利要求1所述的样本垫处理试剂，其特征在于，所述脲醛树脂的分子量为10000-20000。


3.如权利要求1或2所述的样本垫处理试剂，其特征在于，所述脲醛树脂的含量为1％～2％。


4.如权利要求3所述的样本垫处理试剂，其特征在于，所述样本垫处理试剂还包括体系缓冲液、蛋白质、盐离子和表面活性剂。


5.如权利要求4所述的样本垫处理试剂，其特征在于，所述体系缓冲液为50mM硼酸缓冲液，所述蛋白质为1％的BSA，所述盐离子为0.1M的NaCl，所述表面活性剂为1％表面活性剂S9；所述样本垫处理试剂的pH为8.2。


6.一种游离甲状腺素检测试剂条，其特征在于，所述检测试剂条的样本垫采用如权利要求1-5任一项所述的样本垫处理试剂进行处理。


7.如权利要求6所述的试剂条，其特征在于，所述试剂条包括样本垫、结合垫、NC膜、吸水纸和底板，其中所述的结合垫上固定有T4抗体-微球标记物，NC膜上固定有BSA-T4抗原复合物。


8.一种如权利要求6-7任一项所述的试剂条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、样品垫制备
1)配置硼酸缓冲液，并将PH调节至8.2；
2)配制含有50mM硼酸缓冲液、1％的BSA、0.1MNaCl、1％表面活性剂S9、1％～2％分子量为10000-20000的脲醛树脂的样品垫处理液；
3)取混匀后...

【专利技术属性】
技术研发人员：王森，杨蓉，杨清刚，
申请(专利权)人：杭州微策生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33