小柴胡制剂的薄层鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种小柴胡制剂的薄层鉴别方法，属于中药制剂检测技术领域。该鉴别方法包括以下步骤：供试品制备：取小柴胡制剂供试品，加水溶解后上样至C18固相萃取小柱，经萃取得供试品溶液，备用；对照品制备：分别取甘草、黄芩、人参和柴胡对照药材，加入水作为溶剂提取，并将提取液上样至C18固相萃取小柱，经萃取得对照药材溶液，备用；薄层展开：分别吸取上述供试品溶液和对照药材溶液，点于硅胶薄层板上，以展开剂展开；显色检视：将上述薄层板晾干，进行显色并检视，将供试品斑点与对照药材斑点进行对比鉴别。该方法用一板多测的方法对小柴胡颗粒中的黄芩、甘草、人参和柴胡进行薄层鉴别，且重现性好，可以作为该品种的鉴别方法。

【技术实现步骤摘要】
小柴胡制剂的薄层鉴别方法
本专利技术涉及中药制剂检测
，特别是涉及一种小柴胡制剂的薄层鉴别方法。
技术介绍
小柴胡汤是东汉张仲景所著《伤寒杂病论》中的千古名方，是和解少阳方中的代表，该方由柴胡、黄芩、人参、炙甘草、姜半夏、生姜和大枣组成，具有解表散热、舒肝和胃的功能。《中国药典》2020版一部收载了由小柴胡汤运用现在制药技术研制的小柴胡片、小柴胡泡腾片、小柴胡胶囊和小柴胡颗粒，其中使用最多的是小柴胡颗粒。小柴胡颗粒鉴别项下分别采用了三种TLC的方法分别对黄芩、甘草和柴胡进行定性鉴别，然而，三个鉴别项的前处理方法均较复杂，同时也需要用到大量的有机溶剂，存在一定的不足。在中药分析中，由于含量低且共存成分负责，供试液分离纯化有很大的难度，严重制约了分析的专属性和重现性。固相萃取法(SolidPhaseExtraction，SPE)，是指通过样品中的待测成分及杂质在液相与固定相之间相互作用的不同而达到分离的方法。其作用机理是色谱分离的过程，但却是一种特殊的“开关式”色谱，即可以选择性地“关闭”某些成分，同时对另外的一些组分则完全开通，并因此而去除干扰物，纯化、浓缩所需要的组分。然而，目前还没有研究者将固相萃取方法成功应用于小柴胡品种的鉴定中。
技术实现思路
基于此，有必要针对上述问题，提供一种小柴胡制剂的薄层鉴别方法，采用C18SPE小柱对样品进行纯化，用一板多测的方法对小柴胡制剂(颗粒)中的黄芩、甘草、人参和柴胡进行薄层鉴别，优化了小柴胡制剂的薄层鉴别方法。一种小柴胡制剂的薄层鉴别方法，包括以下步骤：供试品制备：取小柴胡制剂供试品，加水溶解后上样至C18固相萃取小柱，以水洗脱，弃去洗脱液，再以梯度浓度的乙醇水溶液洗脱，分别收集洗脱液，回收溶剂后得残渣，所得残渣以有机溶剂溶解，得供试品溶液，备用；对照品制备：分别取甘草、黄芩、人参和柴胡对照药材，加入水作为溶剂提取，并将提取液上样至C18固相萃取小柱，以水洗脱，弃去洗脱液，再以预定浓度的乙醇水溶液洗脱，分别收集洗脱液，回收溶剂后得残渣，所得残渣分别以有机溶剂溶解，得甘草对照药材溶液，黄芩对照药材溶液、人参对照药材溶液和柴胡对照药材溶液，备用；薄层展开：分别吸取上述供试品溶液和对照药材溶液，点于硅胶薄层板上，以展开剂展开，所述展开剂为三氯甲烷-甲醇-水的混合溶剂，所述三氯甲烷-甲醇-水的体积比为13±1：6±0.5：1±0.2；显色检视：将上述薄层板晾干，进行显色并检视，将供试品斑点与对照药材斑点进行对比鉴别。本专利技术的小柴胡制剂的薄层鉴别方法，使用固相萃取法对小柴胡制剂(颗粒)进行分离纯化，然后用一个薄层色谱条件同时对其中的柴胡、人参、甘草、黄芩进行鉴别研究，简化了实验方法，减少有机溶剂的使用量。在其中一个实施例中，所述供试品制备步骤中：所述C18固相萃取小柱预先用0.5-1柱体积的甲醇活化，再用1-2柱体积的水平衡；所得残渣以乙醇溶解。预先对C18固相萃取小柱进行活化平衡，可保证分离纯化的效果。在其中一个实施例中，所述供试品制备步骤中，所述梯度浓度的乙醇水溶液分别为20±5％乙醇、30±5％乙醇和95±5％乙醇，分别得到供试品溶液一、供试品溶液二和供试品溶液三。以上述特定体积百分比，浓度的乙醇水溶液洗脱，可分别获得针对不同药材的特征性成分，以便在后续薄层色谱中展开，针对不同药材进行鉴别。在其中一个实施例中，所述供试品制备步骤中，先以4.2±1个柱体积的水洗脱，再分别以20±5％乙醇洗脱4.2±1个柱体积、以30±5％乙醇洗脱4.2±1个柱体积、以95±5％乙醇洗脱4.2±1个柱体积。在其中一个实施例中，所述对照品制备步骤中，按照下述方法分别制备对照药材溶液：甘草对照药材溶液的制备：取甘草对照药材，加水回流提取，离心，取上清液加入C18固相萃取小柱中，用水洗脱，弃去洗脱液，然后用20±5％乙醇水溶液洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用醇溶解，即得甘草对照药材溶液；黄芩对照药材溶液的制备：取黄芩对照药材，加水回流提取，离心，取上清液加入C18固相萃取小柱中，用水洗脱，弃去洗脱液，然后用20±5％乙醇水溶液洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用醇溶解，即得黄芩对照药材溶液；人参对照药材溶液的制备：取人参对照药材，加水回流提取，离心，取上清液加入C18固相萃取小柱中，分别用水和20±5％乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液，然后用30±5％乙醇水溶液洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用醇溶解，即得人参对照药材溶液；柴胡对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材，加水回流提取，离心，取上清液加入C18固相萃取小柱中，分别用水、20±5％乙醇水溶液和30±5％乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液，然后用95±5％乙醇水溶液洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用醇溶解，即得柴胡对照药材溶液。以上述方法对对照药材进行提取分离纯化，可将各药材中与小柴胡制剂相对应的特征成分提取，能够全面准确表征、评价和鉴别小柴胡制剂中相应药味。在其中一个实施例中，所述对照品制备步骤中，按照下述方法分别制备对照药材溶液：甘草对照药材溶液的制备：取甘草对照药材1g，加水20ml回流提取1小时，离心，取上清液10ml加入柱体积为6ml的C18固相萃取小柱中，用25ml水洗脱，弃去洗脱液，然后用25ml20％乙醇水溶液洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用1ml乙醇溶解，即得甘草对照药材溶液；黄芩对照药材溶液的制备：取黄芩对照药材1g，加水20ml回流提取1小时，离心，取上清液10ml加入柱体积为6ml的C18固相萃取小柱中，用25ml水洗脱，弃去洗脱液，然后用25ml20％乙醇水溶液洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用1ml乙醇溶解，即得黄芩对照药材溶液；人参对照药材溶液的制备：取人参对照药材1g，加水20ml回流提取1小时，离心，取上清液10ml加入柱体积为6ml的C18固相萃取小柱中，分别用水和20％乙醇水溶液各25ml洗脱，弃去洗脱液，然后用25ml30％乙醇水溶液洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用1ml乙醇溶解，即得人参对照药材溶液；柴胡对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材2g，加水20ml回流提取1小时，离心，取上清液10ml加入柱体积为6ml的C18固相萃取小柱中，分别用水、20％乙醇水溶液和30％乙醇水溶液各25ml洗脱，弃去洗脱液，然后用25ml95％乙醇洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用1ml乙醇溶解，即得柴胡对照药材溶液。在其中一个实施例中，所述薄层展开步骤中，以展开剂展开8±1cm。经过试验筛选，将薄层色谱展开至8±1的展距，具有斑点清晰，分离度佳，鉴别效果好的优势。在其中一个实施例中，所述显色检视步骤中，按照以下方法进行：1)取薄层板，置紫外光灯下检视，将供试品溶液一斑点与黄芩对照药材溶液斑点进行对比；2)对薄层板喷以对苯二甲氨基苯甲醛的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，将供试品溶液一斑点与甘草对照药材溶液斑点进行对比；将供试品溶液二斑点与人本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小柴胡制剂的薄层鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：/n供试品制备：取小柴胡制剂供试品，加水溶解后上样至C18固相萃取小柱，以水洗脱，弃去洗脱液，再以梯度浓度的乙醇水溶液洗脱，分别收集洗脱液，回收溶剂后得残渣，所得残渣以有机溶剂溶解，得供试品溶液，备用；/n对照品制备：分别取甘草、黄芩、人参和柴胡对照药材，加入水作为溶剂提取，并将提取液上样至C18固相萃取小柱，以水洗脱，弃去洗脱液，再以预定浓度的乙醇水溶液洗脱，分别收集洗脱液，回收溶剂后得残渣，所得残渣分别以有机溶剂溶解，得甘草对照药材溶液，黄芩对照药材溶液、人参对照药材溶液和柴胡对照药材溶液，备用；/n薄层展开：分别吸取上述供试品溶液和对照药材溶液，点于硅胶薄层板上，以展开剂展开，所述展开剂为三氯甲烷-甲醇-水的混合溶剂，所述三氯甲烷-甲醇-水的体积比为13±1：6±0.5：1±0.2；/n显色检视：将上述薄层板晾干，进行显色并检视，将供试品斑点与对照药材斑点进行对比鉴别。/n

【技术特征摘要】
1.一种小柴胡制剂的薄层鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：
供试品制备：取小柴胡制剂供试品，加水溶解后上样至C18固相萃取小柱，以水洗脱，弃去洗脱液，再以梯度浓度的乙醇水溶液洗脱，分别收集洗脱液，回收溶剂后得残渣，所得残渣以有机溶剂溶解，得供试品溶液，备用；
对照品制备：分别取甘草、黄芩、人参和柴胡对照药材，加入水作为溶剂提取，并将提取液上样至C18固相萃取小柱，以水洗脱，弃去洗脱液，再以预定浓度的乙醇水溶液洗脱，分别收集洗脱液，回收溶剂后得残渣，所得残渣分别以有机溶剂溶解，得甘草对照药材溶液，黄芩对照药材溶液、人参对照药材溶液和柴胡对照药材溶液，备用；
薄层展开：分别吸取上述供试品溶液和对照药材溶液，点于硅胶薄层板上，以展开剂展开，所述展开剂为三氯甲烷-甲醇-水的混合溶剂，所述三氯甲烷-甲醇-水的体积比为13±1：6±0.5：1±0.2；
显色检视：将上述薄层板晾干，进行显色并检视，将供试品斑点与对照药材斑点进行对比鉴别。


2.根据权利要求1所述的小柴胡制剂的薄层鉴别方法，其特征在于，所述供试品制备步骤中：
所述C18固相萃取小柱预先用0.5-1柱体积的甲醇活化，再用1-2柱体积的水平衡；
所得残渣以乙醇溶解。


3.根据权利要求1所述的小柴胡制剂的薄层鉴别方法，其特征在于，所述供试品制备步骤中，所述梯度浓度的乙醇水溶液分别为20±5％乙醇、30±5％乙醇和95±5％乙醇，分别得到供试品溶液一、供试品溶液二和供试品溶液三。


4.根据权利要求3所述的小柴胡制剂的薄层鉴别方法，其特征在于，所述供试品制备步骤中，先以4.2±1个柱体积的水洗脱，再分别以20±5％乙醇洗脱4.2±1个柱体积、以30±5％乙醇洗脱4.2±1个柱体积、以95±5％乙醇洗脱4.2±1个柱体积。


5.根据权利要求3所述的小柴胡制剂的薄层鉴别方法，其特征在于，所述对照品制备步骤中，按照下述方法分别制备对照药材溶液：
甘草对照药材溶液的制备：取甘草对照药材，加水回流提取，离心，取上清液加入C18固相萃取小柱中，用水洗脱，弃去洗脱液，然后用20±5％乙醇水溶液洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用醇溶解，即得甘草对照药材溶液；
黄芩对照药材溶液的制备：取黄芩对照药材，加水回流提取，离心，取上清液加入C18固相萃取小柱中，用水洗脱，弃去洗脱液，然后用20±5％乙醇水溶液洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用醇溶解，即得黄芩对照药材溶液；
人参对照药材溶液的制备：取人参对照药材，加水回流提取，离心，取上清液加入C18固相萃取小柱中，分别用水和20±5％乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液，然后用30±5％乙醇水溶液洗脱，洗脱液蒸干后，残渣用醇溶解，即得人参对照药材溶液；
柴胡对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材，加水回流提取，离心，取上清液加入C18固相萃取小柱中，分别用水、2...

【专利技术属性】
技术研发人员：龙飞，杨亮，
申请(专利权)人：广东志道医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44