人肠癌原代细胞及其培养方法、应用技术

本公开提供了人肠癌原代细胞及其培养方法和应用，该人肠癌原代细胞命名为人肠癌细胞HCOC‑883，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21096。

【技术实现步骤摘要】
人肠癌原代细胞及其培养方法、应用
本专利技术涉及生物
，特别涉及人肠癌原代细胞及其培养方法、应用。
技术介绍
肠癌是消化系统肿瘤中常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类健康。目前，为研究其发病机制和治疗方案，大多以商品化的细胞株为材料。但细胞株经长期培养，其生物学特性易发生变异而不利于发病机制和治疗方案的研究。肿瘤原代细胞培养是指从肿瘤患者体内通过手术切除肿瘤组织，获得肿瘤细胞，并在体外进行短期培养的过程。与细胞株不同，原代培养的肿瘤细胞由于组织刚刚离体，其生物学特性未发生很大变化，仍保留原遗传特性，其性状与体内相似，适用于生化分子、药物敏感性及机制探究相关实验，其数据更具有说服力。可见，人肠癌原代细胞的培养尤为必要。
技术实现思路
本专利技术实施例提供了人肠癌原代细胞及其培养方法、应用。为了达到上述目的，本专利技术是通过如下技术方案实现的：第一方面，本专利技术提供了一种人肠癌原代细胞，命名为人肠癌细胞HCOC-883，已于2020年12月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter，CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码为100101，保藏编号为CGMCCNO.21096。第二方面，本专利技术提供了培养上述第一方面所述的人肠癌原代细胞的方法，包括：步骤1，用样本保存液保存收集的新鲜人肠癌组织；>其中，所述样本保存液包括胎牛血清、抗生素和DF培养基，所述抗生素包括青霉素、硫酸卡那霉素、两性霉素B和万古霉素；步骤2，用清洗液清洗步骤1保存的肠癌组织；其中，所述清洗液包括含所述抗生素的生理盐水；步骤3，取步骤2清洗处理后的肠癌组织，用含血清培养基进行原代分离培养；其中，所述含血清培养基包括胎牛血清、所述抗生素和DF培养基；步骤4，取步骤3原代分离培养出的细胞，用无血清培养基进行纯化及传代培养，得到人肠癌原代细胞；其中，所述无血清培养基包括添加物、所述抗生素和DF培养基；所述添加物包括谷氨酰胺、胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、表皮生长因子(EpidermalGrowthFactor，EGF)、烟酰胺Nicotinamide和B27。详细地，DF培养基为本领域常见的DME/F-121:1培养基(美国HyClone)。B27为无血清液体添加剂。优选地，所述无血清培养基包括：1-5mM谷氨酰胺、5-30mg/L胰岛素、5-20mg/L转铁蛋白、5-20μg/L亚硒酸钠、5-20μg/LEGF、5-30mMNicotinamide、0.5-5％B27、10-60μg/mL青霉素、10-60μg/mL硫酸卡那霉素、0.15-0.5μg/mL两性霉素B、0.5-5μg/mL万古霉素。优选地，所述含血清培养基包括：10-60μg/mL青霉素、10-60μg/mL硫酸卡那霉素、0.15-0.5μg/mL两性霉素B、0.5-5μg/mL万古霉素。优选地，所述清洗液包括：0.1-0.8mg/mL青霉素、0.1-0.8mg/mL硫酸卡那霉素、1.5-5μg/mL两性霉素B、1-5μg/mL万古霉素。第三方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的人肠癌原代细胞在药物敏感性研究及检测中的应用。第四方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的人肠癌原代细胞在构建肠癌动物模型中的应用。第五方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的人肠癌原代细胞在开发抑制肠癌药物中的应用。第六方面，本专利技术提供了上述第一方面所述的人肠癌原代细胞在肠癌体外研究中的应用。需要说明的是，本专利技术提供的人肠癌原代细胞的应用，为非疾病的诊断与治疗目的。本专利技术提供的人肠癌细胞HCOC-883至少具有以下特征：特征1：原代分离培养自中国人的肠癌组织，该细胞未导入任何外源基因。特征2：显微镜下观察人肠癌细胞HCOC-883，上皮样细胞形态，癌细胞增殖较快，细胞大小、形态不等，细胞界限清晰，呈不规则形或多边形，失去极性，排列紊乱，无接触抑制，铺路石样生长，其具有恶性肿瘤细胞的形态特征。特征3：人肠癌细胞HCOC-883的细胞群体倍增时间为41小时，细胞增殖速度快，细胞生长活跃，细胞活性状态佳，细胞培养稳定性高，体外培养具有稳定的细胞生长特性。特征4：人肠癌细胞HCOC-883经免疫荧光鉴定为上皮来源的肿瘤细胞标记物CK(cytokeratin，细胞角蛋白)强表达、肿瘤细胞增殖标记物Ki67强表达。特征5：人肠癌细胞HCOC-883经核型分析鉴定为癌细胞异型核型，细胞的染色体结构和数目均表现异常，细胞的染色体数目为75条，属于超三倍体核型，符合人源恶性肿瘤的遗传特性。特征6：人肠癌细胞HCOC-883经STR(ShortTandemRepeat，短串联重复序列)基因分型鉴定，其为单一人类来源且无交叉污染的细胞，是一株新获得的肠癌原代细胞。特征7：人肠癌细胞HCOC-883，可用于药物敏感性研究及检测、构建肠癌动物模型、开发抑制肠癌药物、肠癌体外研究的用途。细胞保藏信息本专利技术所涉及的人肠癌细胞HCOC-883，已于2020年12月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter，CGMCC)，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码为100101，保藏编号为CGMCCNO.21096。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术一实施例提供的人肠癌细胞HCOC-883的细胞形态图；图2是本专利技术一实施例提供的人肠癌细胞HCOC-883的生长曲线图；图3是本专利技术一实施例提供的人肠癌细胞HCOC-883的免疫荧光鉴定结果图；图4是本专利技术一实施例提供的人肠癌细胞HCOC-883的染色体核型分析图；图5是本专利技术一实施例提供的人肠癌细胞HCOC-883的STR基因分型图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本专利技术实施例提供了一种人肠癌原代细胞，命名为人肠癌细胞HCOC-883，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人肠癌原代细胞，其特征在于，命名为人肠癌细胞HCOC-883，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.21096。/n

【技术特征摘要】
1.人肠癌原代细胞，其特征在于，命名为人肠癌细胞HCOC-883，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.21096。


2.培养权利要求1所述人肠癌原代细胞的方法，其特征在于，包括：
步骤1，用样本保存液保存收集的新鲜人肠癌组织；
其中，所述样本保存液包括胎牛血清、抗生素和DF培养基，所述抗生素包括青霉素、硫酸卡那霉素、两性霉素B和万古霉素；
步骤2，用清洗液清洗步骤1保存的肠癌组织；
其中，所述清洗液包括含所述抗生素的生理盐水；
步骤3，取步骤2清洗处理后的肠癌组织，用含血清培养基进行原代分离培养；
其中，所述含血清培养基包括胎牛血清、所述抗生素和DF培养基；
步骤4，取步骤3原代分离培养出的细胞，用无血清培养基进行纯化及传代培养，得到人肠癌原代细胞；
其中，所述无血清培养基包括添加物、所述抗生素和DF培养基；
所述添加物包括谷氨酰胺、胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸钠、表皮生长因子EGF、烟酰胺Nicotinamide和B27。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，
所述无血清培养基包括：1-5mM谷氨酰胺、5-3...

【专利技术属性】
技术研发人员：李春凤，智慧芳，倪君君，
申请(专利权)人：北京和合医学诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11