一种用于培养甲状腺癌类器官的培养基和培养方法技术

本发明专利技术提供一种甲状腺癌类器官的培养基及其培养方法。所述培养基含基础培养基、B27、p38MAPK抑制剂和促甲状腺激素；且所述培养基不含Wnt3a、R‑spondin‑1、头蛋白、成纤维细胞生长因子和A83‑01中的至少一种。采用所述培养基进行类器官培养，其成本低、操作难度低、培养成功率高，传代次数多。

【技术实现步骤摘要】
一种用于培养甲状腺癌类器官的培养基和培养方法
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种用于培养甲状腺癌类器官的培养基和培养方法。
技术介绍
甲状腺癌是一种起源于甲状腺滤泡上皮或滤泡旁上皮细胞的恶性肿瘤，是头颈部常见的恶性肿瘤，对患者的身体健康和生活质量造成了严重威胁。根据肿瘤起源及分化差异，可把甲状腺癌分为：甲状腺乳头状癌(PTC)、甲状腺滤泡状癌(FTC)、甲状腺髓样癌(MTC)和甲状腺未分化癌(ATC)。PTC和FTC合称为分化型甲状腺癌，其中PTC约占全部甲状腺癌的85％～90％。虽然大部分分化型甲状腺癌经手术、术后放射性碘-131以及甲状腺激素抑制治疗可达到缓解，但部分患者在其自然病程或经过治疗后呈现放射性碘难治性状态。放射性碘难治性、转移性或晚期甲状腺癌患者生存率明显下降，是目前甲状腺癌临床诊治的难点和热点。癌症治疗已转变为基于肿瘤突变图谱的靶向个体化精准医疗。临床试验和Meta分析表明，分子靶向药物对难治性甲状腺癌的疗效显示出广阔的前景。目前肿瘤的个体化精准医疗缺乏合适的临床前评价模型。传统2D培养的细胞系操作简单、适用于高通量抗肿瘤药物筛选，但缺乏细胞与细胞、细胞与细胞基质间的相互作用，不能重现肿瘤的多样性特征。此外，细胞系在体外长期培养的过程中丧失了肿瘤异质性，不能代表亲本肿瘤的基因型和病理特征，无法模拟患者体内肿瘤的复杂结构和细胞间的信号通路。源自患者的异种移植模型虽然能够模拟亲本肿瘤的特征，维持肿瘤异质性和基因组稳定性，但其构建效率低、耗时长、费用昂贵、存在种属差异、不适合高通量药物筛选。近年来，类器官(organoid)培养技术的出现与发展，为我们带来了全新的肿瘤模型。类器官是在体外用3D培养技术对干细胞或器官祖细胞进行诱导分化形成的在结构和功能上都类似目标器官或组织的三维细胞复合体,其具有稳定的表型和遗传学特征,能够在体外长期培养。相比于传统的2D细胞培养和动物模型，这种具有3D结构的体外模型不仅能展现其来源器官的细胞结构和行为，保持基因表达的稳定性，还能精确地预测患者对抗肿瘤药物的反应，是人体病变组织的潜在“替身”。2009年，HansClevers团队首先开发出类器官的通用培养条件，即向培养基中加入表皮生长因子、Wnt信号激动剂R-spondin-1和骨形成蛋白信号抑制剂Noggin，这一培养体系也制备出了首个类器官模型—小肠类器官(Satoetal.,Nature,2009,459(7244):262-265)，由此开启了类器官领域的研究。2011年，HansClevers团队发展了类器官的培养体系，通过引入烟酰胺、p38MAPK抑制剂、胃泌素、A83-01、成纤维细胞生长因子等组分成功培养出能够在体外长期生长的小肠和结肠的多种类器官疾病模型(Satoetal.,Gastroenterology,2011,141(5):1762-1772)。近几年来，国内外多个团队相继报道了各种类型肿瘤的类器官模型，但这些肿瘤类器官培养基的添加因子大部分是基于HansClevers团队最初设计的培养基组分。目前国内外仅有1项报道甲状腺癌类器官的研究(Sondorpetal.,Cancers(Basel),2020,12(11):3212)，该研究的培养基成分为肿瘤类器官培养的常规组分。这种培养基添加因子多、培养基成本高，而且难以在体外获得长期稳定传代培养的甲状腺癌类器官模型。因此，亟需开发一种低成本的、高效获得甲状腺癌类器官的培养基和培养方法。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种甲状腺癌类器官的培养基、培养方法和所述培养基的应用。第一方面，本专利技术提供一种甲状腺癌类器官的培养基。一种甲状腺癌类器官的培养基，所述培养基含基础培养基、B27、p38MAPK抑制剂和促甲状腺激素。所述培养基可以不含Wnt3a、R-spondin-1、头蛋白、成纤维细胞生长因子和A83-01中的至少一种。在一些实施例中，所述培养基不含Wnt3a、R-spondin-1、头蛋白、成纤维细胞生长因子和A83-01中的任意一种。所述p38MAPK抑制剂可以包括选自SB202190、SB203580和Doramapimod中的至少一种；或者所述p38MAPK抑制剂为Doramapimod。所述基础培养基可以为AdvancedDMEM/F12培养基。所述培养基还可以包含表皮细胞生长因子。在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述p38MAPK抑制剂的浓度可以为1-20μM。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述p38MAPK抑制剂的浓度为5-15μM。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述p38MAPK抑制剂的浓度为8-12μM。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述p38MAPK抑制剂的浓度为10μM。在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述B27的体积百分浓度可以为1％-5％。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述B27的体积百分浓度为2％-4％。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述B27的体积百分浓度为2％。所述B27可以为B27补充剂50×。在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述促甲状腺激素的浓度可以为1-50ng/mL。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述促甲状腺激素的浓度为10-40ng/mL。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述促甲状腺激素的浓度为20-30ng/mL。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述促甲状腺激素的浓度为20ng/mL。在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述表皮细胞生长因子的浓度可以为1-100ng/mL。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述表皮细胞生长因子的浓度为20-80ng/mL。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述表皮细胞生长因子的浓度为30-70ng/mL。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述表皮细胞生长因子的浓度为40-60ng/mL。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述表皮细胞生长因子的浓度为50ng/mL。所述培养基还可以包含N-乙酰半胱氨酸和烟酰胺中的至少一种。在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述N-乙酰半胱氨酸的浓度为1-5mM。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述N-乙酰半胱氨酸的浓度为1-4mM。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述N-乙酰半胱氨酸的浓度为2-3mM。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述N-乙酰半胱氨酸的浓度为2mM。在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述烟酰胺的浓度为1-20mM。在一些实施例中，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述烟酰胺的浓度为5-20mM。在一些实施例中，在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甲状腺癌类器官的培养基，所述培养基含基础培养基、B27、p38 MAPK抑制剂和促甲状腺激素；且所述培养基不含Wnt3a、R-spondin-1、头蛋白、成纤维细胞生长因子和A83-01中的至少一种。/n

【技术特征摘要】
1.一种甲状腺癌类器官的培养基，所述培养基含基础培养基、B27、p38MAPK抑制剂和促甲状腺激素；且所述培养基不含Wnt3a、R-spondin-1、头蛋白、成纤维细胞生长因子和A83-01中的至少一种。


2.根据权利要求1所述的培养基，所述p38MAPK抑制剂包括选自SB202190、SB203580和Doramapimod中的至少一种；或者所述p38MAPK抑制剂为Doramapimod。


3.根据权利要求1-2任一项所述的培养基，所述培养基还包含表皮细胞生长因子。


4.根据权利要求1-3任一项所述的培养基，在所述培养基中，以所述培养基总体积计，所述p38MAPK抑制剂的浓度为1-20μM；和/或所述B27的体积百分浓度为1％-5％；和/或所述促甲状腺激素的浓度为1-50ng/mL；和/或所述表皮细胞生长因子的浓度为1-100ng/mL。


5.根据权利要求1-4任一项所述的培养基，所述培养基还包含N-乙酰半胱氨酸和烟酰胺中的至...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄卫人，陈栋，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院深圳市转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44