本发明专利技术公开了一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法。涉及植物分子遗传育种技术领域。包括提取植株基因组DNA，进行PCR扩增；若扩增得到任一目标片段，则具有中间偃麦草4St染色体基因。本发明专利技术发现的分子标记可用于小麦与中间偃麦草远缘杂交过程中中间偃麦草染色体工程系(染色体附加系、代换系、易位系和双二倍体)中4St染色体或4St染色体片段的快速检测。本发明专利技术对于小麦遗传育种的理论研究和实际应用均有重要价值。
【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法
本专利技术涉及植物分子遗传育种
，更具体的说是涉及一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法。
技术介绍
自20世纪90年代起，世界小麦单产开始出现徘徊不前的局面，其主要原因是在小麦育种中长期使用少数主栽品种作为亲本，导致遗传基础越来越狭窄，在单产潜力提高有限的情况下，品种的抗病、抗逆、抗虫等能力逐渐下降，使现有品种抵抗灾害风险的能力降低。种质资源作为基因的重要载体，被称为农业领域的“芯片”，随着各国基因资源争夺日益白热化，种质资源短缺已成为制约种业发展和作物品种实现重大突破的主要技术瓶颈。通过远缘杂交转移偃麦草属植物的优异基因进入小麦，是增加小麦变异类型、拓宽小麦遗传背景、夯实小麦育种基础的重要途径之一。在小麦遗传改良中，偃麦草属的中间偃麦草(Thinopyrumintermedium,2n＝6x＝42,JJsS)是利用最为成功的多年生野生近缘植物，蕴含许多能够增强小麦抗性、改善小麦品质的有益基因，是小麦遗传改良的重要基因资源之一。自从20世纪20年代Dr.N.V.Tsitsin等首次将小麦与偃麦草属植物杂交成功以来，国内外学者通过远缘杂交和染色体工程的方法，诱导偃麦草的外源基因渗入小麦遗传背景中，先后创制了大量包括双二倍体或部分双二倍体、附加系、代换系和易位系等在内的小麦-中间偃麦草和小麦-长穗偃麦草的异源染色体系，并通过回交、辐射等手段，成功培育出许多抗病、优质、高产的小麦新品种，例如小偃6号、小偃503、小偃22、西农509、西农511、西农529等，在小麦生产及抗病、抗逆研究中被广泛应用。这些含小麦近缘植物血缘的异染色体系是研究物种染色体行为与进化、基因定位与克隆的重要素材，也是拓宽小麦遗传基础、抵御小麦重要病虫害、增加小麦产量和提升小麦品质的重要物质基础。外源染色体的准确鉴定是研究与利用中间偃麦草的重要前提，长期以来，中间偃麦草外源染色体鉴定一直以细胞学手段包括C-带、N-带、GISH、FISH为主，分子标记技术的发展为其分子鉴定提供了新的发展方向。但迄今为止，识别度有限。因此，如何提供一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，包括：1)提取植株基因组DNA，进行PCR扩增；2)若扩增得到下列任一目标片段，则具有中间偃麦草4St染色体基因；目标片段包括如SEQIDNO.1～SEQIDNO.6的核苷酸序列。优选的：PCR扩增引物对包括如SEQIDNO.7、SEQIDNO.8的引物序列，或如SEQIDNO.9、SEQIDNO.10的引物序列，或如SEQIDNO.11、SEQIDNO.12的引物序列，或如SEQIDNO.13、SEQIDNO.14的引物序列，或如SEQIDNO.15、SEQIDNO.16的引物序列，或如SEQIDNO.17、SEQIDNO.18的引物序列中的一对或多对。优选的：PCR扩增体系：2×TaqPCRMix预混液5μL，50ng/μL的上游引物1μL，50ng/μL的下游引物1μL，50～100ng/μL的模板DNA为1.5μL，1.5μL无菌去离子水，反应体系总体积为10μL。优选的：PCR扩增程序：94℃预变性5分钟；94℃变性30秒，58℃退火45秒，72℃延伸30秒，运行35个循环；最后72℃延伸10分钟，PCR扩增产物在4℃保存。本专利技术还提供了一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的试剂盒，包括上述的任一扩增引物对。本专利技术还提供了上述方法或上述的试剂盒在小麦遗传育种中的应用。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，相较于现有技术，新发现的分子标记可用于小麦与中间偃麦草远缘杂交过程中中间偃麦草染色体工程系(染色体附加系、代换系、易位系和双二倍体)中4St染色体或4St染色体片段的快速检测。本专利技术对于小麦遗传育种的理论研究和实际应用均有重要价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1附图为本专利技术提供的分子标记sacThiC11-05引物在不同待测植物材料间的扩增结果，各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指104bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。图2附图为本专利技术提供的分子标记sacThiC11-15引物在不同待测植物材料间的扩增结果；图2中，各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指165bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。图3附图为本专利技术提供的分子标记sacThiC11-25引物在不同待测植物材料间的扩增结果；各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指155bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。图4附图为本专利技术提供的分子标记sacThiC11-59引物在不同待测植物材料间的扩增结果；各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指194bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。图5附图为本专利技术提供的分子标记sacThiC11-93引物在不同待测植物材料间的扩增结果；各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI499493(含St染色体)；7为中间偃麦草Z1141；箭头所指103bp条带表示含有4St染色体或4St染色体片段。图6附图为本专利技术提供的分子标记sacThiC11-108引物在不同待测植物材料间的扩增结果；各泳道从左至右依次是：1为指示条带；2为小麦-中间偃麦草4St附加系L4；3为普通小麦中国春；4为普通小麦上林小麦；5为普通小麦墨脱小麦；6为拟鹅冠草PI4本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，其特征在于，包括：/n1)提取植株基因组DNA，进行PCR扩增；/n2)若扩增得到下列任一目标片段，则具有中间偃麦草4St染色体基因；/n所述目标片段包括如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6的核苷酸序列。/n
【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，其特征在于，包括：
1)提取植株基因组DNA，进行PCR扩增；
2)若扩增得到下列任一目标片段，则具有中间偃麦草4St染色体基因；
所述目标片段包括如SEQIDNO.1～SEQIDNO.6的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的一种快速鉴定中间偃麦草4St染色体的方法，其特征在于，所述PCR扩增引物对包括如SEQIDNO.7、SEQIDNO.8的引物序列，或如SEQIDNO.9、SEQIDNO.10的引物序列，或如SEQIDNO.11、SEQIDNO.12的引物序列，或如SEQIDNO.13、SEQIDNO.14的引物序列，或如SEQIDNO.15、SEQIDNO.16的引物序列，或如SEQIDNO.17、SEQIDNO.18的引物序列中的一对或多对。
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【专利技术属性】
技术研发人员：张晓军，乔麟轶，李欣，贾举庆，郭慧娟，张树伟，常利芳，陈芳，畅志坚，
申请(专利权)人：山西农业大学，
类型：发明
国别省市：山西;14
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