【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD33免疫细胞癌症疗法相关申请的交叉引用本申请要求享有2018年11月7日提交的美国临时申请号62/756,718、2018年11月14日提交的美国临时申请号62/767,388、2018年11月14日提交的美国临时申请号62/767,395、2019年3月29日提交的美国临时申请号62/826,643和2019年3月29日提交的美国临时申请号62/826,648的提交日期的权益。将每个先前申请的全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法使用经基因修饰的T细胞来更特异性和有效地靶向和杀伤癌细胞。从血液中收集T细胞后，对细胞进行工程化，使其表面上包含CAR。可以使用CRISPR/Cas9基因编辑技术将CAR引入T细胞。将这些同种异体CART细胞注射入患者体内时，受体使T细胞能够杀伤癌细胞。
技术实现思路
急性髓细胞性白血病(AML)是一种由髓系祖细胞中积累的突变引起的血液肿瘤，可造成过度增殖和分化受阻，从而导致髓系母细胞在造血组织中积累。尽管最初对标准诱导化疗的反应很高，但大多数AML患者的复发较常见且预后较差(Talati和Sweet，2018)。近年来，很少有用于AML的新疗法获得批准。CD33(也称为Siglec3、唾液酸结合Ig样凝集素3、gp67或p67)是治疗AML和其他白血病(例如T细胞白血病)的吸引关注的靶标。它在发病和复发时都在大多数AML母细胞和亚群(免疫表型定义的白血病干细胞)上表达(Haubner等人，2018)。据认为其表达仅限于正常单核细胞、粒细...
【技术保护点】
1.一种工程化T细胞，该工程化T细胞包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，其中该CAR包含特异性结合CD33的胞外结构域。/n
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
【国外来华专利技术】20181107 US 62/756,718;20181114 US 62/767,395;20181.一种工程化T细胞，该工程化T细胞包含编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，其中该CAR包含特异性结合CD33的胞外结构域。
2.如权利要求1所述的工程化T细胞，该工程化T细胞进一步包含被破坏的T细胞受体α链恒定区(TRAC)基因。
3.如权利要求2所述的工程化T细胞，其中将编码该CAR的核酸插入该TRAC基因中。
4.如权利要求1-3中任一项所述的工程化T细胞，该工程化T细胞进一步包含被破坏的β-2-微球蛋白(β2M)基因。
5.如权利要求1-4中任一项所述的工程化T细胞，其中该CAR的胞外结构域包含抗CD33抗体。
6.如权利要求5所述的工程化T细胞，其中该抗CD33抗体是抗CD33单链可变片段(scFv)。
7.如权利要求6所述的工程化T细胞，其中该抗CD33scFv包含与参考抗体相同的重链可变结构域(VH)互补决定区(CDR)和相同的轻链可变结构域(VL)CDR，其中该参考抗体包含：
(i)SEQIDNO:65所示的VH和SEQIDNO:66所示的VL，
(ii)SEQIDNO:77所示的VH和SEQIDNO:78所示的VL，或
(iii)SEQIDNO:89所示的VH和SEQIDNO:90所示的VL。
8.如权利要求7所述的工程化T细胞，其中该抗CD33scFv包含与该参考抗体相同的VH和VL链。
9.如权利要求7所述的工程化T细胞，其中该抗CD33scFv包含SEQIDNO:73、75、85、87、97或99中任一项的氨基酸序列。
10.如权利要求1-9中任一项所述的工程化T细胞，其中该CAR进一步包含CD28共刺激结构域或41BB共刺激结构域。
11.如权利要求10所述的工程化T细胞，其中该CAR进一步包含CD3ζ细胞质信号传导结构域。
12.如权利要求3-11中任一项所述的工程化T细胞，其中该TRAC基因包含SEQIDNO:49、51、53、55、57、59、61、63、109、112、115或118中任一项的核苷酸序列，和/或其中该CAR由SEQIDNO:50、52、54、56、58、60、62、64、110、113、116或119中任一项的核苷酸序列编码。
13.如权利要求4-12中任一项所述的工程化T细胞，其中该被破坏的β2M基因包含至少一个选自SEQIDNO:9-14中任一项的核苷酸序列。
14.如权利要求1-13中任一项所述的工程化T细胞，其中这些T细胞包含野生型CD33基因。
15.如权利要求1-13中任一项所述的工程化T细胞，其中这些T细胞进一步包含被破坏的CD33基因。
16.如权利要求15所述的工程化T细胞，其中该被破坏的CD33基因包含AGTTCATGGTACTGGTTCC(SEQIDNO:187)、AGTTCATGGTTCC(SEQIDNO:188)、AGTTCATGTACTGGTTCC(SEQIDNO:189)、AGTTCATGGTTTACTGGTTCC(SEQIDNO:190)、AGTTCC、AGTACTGGTTCC(SEQIDNO:191)、AGTTCATACTGGTTCC(SEQIDNO:192)、AGTTCATGGTATACTGGTTCC(SEQIDNO:193)和/或AGTTACTGGTTCC(SEQIDNO:194)的核苷酸序列。
17.如权利要求15或16所述的工程化T细胞，其中该被破坏的CD33基因缺少包含AGTTCATGGTTACTGGTTCC(SEQIDNO:186)的片段。
18.如权利要求15所述的工程化T细胞，其中该被破坏的CD33基因包含AAATCCTGGCACT(SEQIDNO:300)、AAATCCCTGGCACT(SEQIDNO:301)、AAATCCTCATTCCCTGGCACT(SEQIDNO:302)、AAATCCTCACCCTGGCACT(SEQIDNO:304)、AAATCCTCCCCTGGCACT(SEQIDNO:305)、AAATCCTCCCTGGCACT(SEQIDNO:306)、AAATCCCCTGGCACT(SEQIDNO:307)、ACATCCTCATTCCCTGGCACT(SEQIDNO:308)、ACATCCTGGCACT(SEQIDNO:309)、AAATCCTCTCCCTGGCACT(SEQIDNO:310)、AAATCCTCATCTGGCACT(SEQIDNO:311)、AAATCCT、AAACCCTGGCACT(SEQIDNO:312)、AAATCCTCTGGCACT(SEQIDNO:313)、AAATCCCCCTGGCACT(SEQIDNO:314)、AAATCCTCACT(SEQIDNO:315)、ACATCCCTGGCACT(SEQIDNO:316)和/或AAAT的核苷酸序列。
19.如权利要求18所述的工程化T细胞，其中该被破坏的CD33基因缺少包含AAATCCTCATCCCTGGCACT(SEQIDNO:299)的片段。
20.如权利要求18或19所述的工程化T细胞，其中该被破坏的CD33基因缺少以下片段，该片段的3’区段包含AAATCCTCAT(SEQIDNO:317)、AAATCCTCATCCCT(SEQIDNO:318)、AAATCCTCATCCCTGG(SEQIDNO:320)、AAATCCTCATC(SEQIDNO:322)或AAATCCTCATCCCTGGCA(SEQIDNO:324)的核苷酸序列。
21.如权利要求18-20中任一项所述的工程化T细胞，其中该被破坏的CD33基因缺少以下片段，该片段的5’区段包含CTCATCCCTGGCACT(SEQIDNO:323)的核苷酸序列。
22.一个包含如权利要求1-21中任一项所述的工程化T细胞的工程化T细胞群体，其中该群体的至少25％或至少50％的工程化T细胞表达该CAR。
23.如权利要求22所述的群体，其中该群体的至少70％的工程化T细胞表达该CAR。
24.如权利要求22所述的群体，其中该群体的至少25％的工程化T细胞在至少7天或至少14天的体外增殖后表达该CAR。
25.如权利要求22-24中任一项所述的群体，其中该群体的至少50％的工程化T细胞不表达可检测水平的T细胞受体(TCR)蛋白。
26.如权利要求25所述的群体，其中该群体的至少90％的工程化T细胞不表达可检测水平的TCR蛋白。
27.如权利要求22-26中任一项所述的群体，其中该群体的至少50％的工程化T细胞不表达可检测水平的β2M蛋白。
28.如权利要求27所述的群体，其中该群体的至少70％的工程化T细胞不表达可检测水平的β2M蛋白。
29.如权利要求22-28中任一项所述的群体，其中该群体的至少20％的工程化T细胞不表达可检测水平的CD33蛋白。
30.如权利要求29所述的群体，其中该群体的至少50％的工程化T细胞不表达可检测水平的CD33蛋白。
31.如权利要求22-30中任一项所述的群体，其中当与表达CD33的癌细胞群体在体外共培养时，该群体的工程化T细胞诱导该群体的至少10％、至少25％或至少50％的癌细胞的细胞裂解。
32.如权利要求31所述的群体，其中当与表达CD33的癌细胞群体在体外共培养时，该群体的工程化T细胞诱导该癌细胞群体的至少70％、至少80％或至少90％的细胞裂解。
33.如权利要求31或32所述的群体，其中当与癌细胞群体在体外共培养时，该群体的工程化T细胞分泌IFNγ。
34.如权利要求31-33中任一项所述的群体，其中工程化T细胞与癌细胞的比率为1:1至2:1。
35.如权利要求31-34中任一项所述的群体，其中这些癌细胞包括白血病细胞。
36.如权利要求31-34中任一项所述的群体，其中这些癌细胞包括急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和慢性髓细胞性白血病(CML)。
37.一种方法，该方法包括向受试者施用如权利要求22-36中任一项所述的工程化T细胞群体。
38.如权利要求37所述的方法，其中该受试者是人类受试者。
39.如权利要求37或38所述的方法，其中所述受试者患有癌症。
40.如权利要求39所述的方法，其中该癌症是白血病，任选地是急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、急性髓细胞性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)和慢性髓细胞性白血病(CML)。
41.如权利要求39或40所述的方法，其中该癌症包括表达CD33的癌细胞。
42.如权利要求39-41中任一项所述的方法，其中向受试者施用该工程化T细胞群体导致癌性肿瘤体积相对于基线对照的减小。
技术研发人员：JA特雷特，J萨格特，D卡雷齐迪斯，
申请(专利权)人：克里斯珀医疗股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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