双特异性缀合物制造技术

本发明专利技术提供了一种缀合物，所述缀合物包含：i)至少一个结合CD40的第一特异性结合分子，其中所述第一特异性结合分子是CD40的激动剂；和ii)至少一个结合标签部分的第二特异性结合分子，其中所述标签部分不是癌症抗原，其中所述第一特异性结合分子和第二特异性结合分子是包含抗体的抗原结合结构域的抗原结合蛋白，并且共价连接。所述缀合物可以与包含以下的标签构建体组合：i)标签部分，其不是癌症抗原；和ii)抗原，其是癌症抗原或衍生自病原体的抗原；其中所述抗原是多肽并且所述标签部分与所述抗原共价连接，所述组合用于在疗法中使用以刺激受试者针对所讨论的抗原产生免疫应答。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双特异性缀合物
本专利技术涉及新颖缀合物，所述缀合物包含能够与CD40特异性结合的第一结合分子，所述CD40通过共价连接(特别包括肽键)与能够与标签部分结合的第二结合分子结合以形成缀合物-标签复合物。标签部分可以作为进一步包含抗原的标签构建体的一部分提供。本专利技术进一步涉及缀合物与这种标签-抗原构建体的复合物，以及这种复合物在疗法中的用途，特别是在癌症治疗中的用途。
技术介绍
调节免疫应答的单克隆抗体(mAb)在癌症治疗中被证明是非常有效的，越来越多的证据表明这样的应答可以被用来提供持久的肿瘤根除。针对不同靶的各种抗体已经被开发出来，例如靶向免疫检查点CTLA-4和PD-1，这支持T细胞免疫可以为癌症提供有效治疗的观点。用与抗原呈递细胞(APC)上的共刺激受体CD40激动性结合的免疫刺激性mAb也获得了有希望的临床数据。CD40是TNF受体超家族的成员(可替代地称为TNF受体超家族成员5；TNFRSF5)，并且在抗原呈递细胞(APC)(例如B细胞、树突状细胞(DC)、巨噬细胞和单核细胞)、连同上皮细胞和内皮细胞以及某些肿瘤细胞上表达。当被其主要表达于成熟T细胞上的配体(CD40配体；CD40L，也称为CD154)激活时，CD40激活APC，并且诱导先天和适应性免疫应答。激动性CD40剂，例如抗CD40抗体，可用于诱导免疫系统，以预防癌细胞的增殖和/或杀伤癌细胞，从而为癌症提供有效的治疗方法。特别地，由激动性CD40剂激活的APC可刺激T细胞，包括效应T细胞，特别是CD8+细胞毒性T细胞，导致T细胞介导的癌细胞(例如肿瘤)破坏。如果APC是巨噬细胞，也可能有直接的癌细胞杀伤，对于CD40阳性的肿瘤可以观察到直接的抗肿瘤机制，其中抗CD40抗体与肿瘤细胞的结合可以诱导凋亡。各种抗CD40抗体处于临床前或临床开发阶段，包括抗体ADC-1013、CP-870,893、ChiLob7/4、SEA-CD40和APX005M。抗体ADC-1013在WO2016/023960中有描述，并且在WO2015/091853和US2017/0342159中提出了用于抗癌的各种其他抗CD40抗体。ChiLob7/4在US2009/0074711中有描述，SEA-CD40在US2017/0137528中有描述，CP-870,893在US2017/0342159中有描述，APX005M(有时可替代地简称为APX005)在WO2014/070934中有描述。有效刺激(或引发)T细胞不仅需要CD40刺激，还需要呈递抗原(在MHC的背景下，用于与T细胞受体(TCR)结合)。因此，有利的是APC在T细胞刺激的背景下将抗原交叉呈递给T细胞，换句话说，摄取、处理和呈递(细胞外来源的)抗原给T细胞。然而，抗原性材料可能并不总是存在(例如，如果肿瘤已经切除)，并且在这种情况下CD40激动剂在导致有效T细胞刺激方面可能具有较差的功效。CD40刺激也可能不足以激活T细胞(例如，如果作为输注产品的CD40激动剂存在剂量限制毒性)。因此，提供APC上CD40的激动性激活和同时提供抗原到APC的递送将是有益的。本专利技术解决了这一需求。
技术实现思路
特别地，提供了双特异性缀合物，其对CD40并且最终对抗原性组分都是特异性的，并且可用于激活抗原呈递细胞，特别是DC，特别是在疗法的背景下。根据抗原的不同，疗法可以是癌症的预防性或治疗性治疗，或者感染的预防性或治疗性治疗(激活的T细胞可以靶向并杀伤感染的细胞)。双特异性缀合物包含两个共价偶联在一起的单独的特异性结合部分。第一结合部分对CD40是特异性的。然而，本专利技术的缀合物不是提供对抗原直接特异性的第二特异性结合部分，而是包含对标签特异性的第二结合部分。标签可以作为构建体的一部分提供，其中标签与抗原共价偶联。因此，通过与标签结合，第二结合部分(以及因此缀合物)可以间接地与抗原结合，这提供了一种灵活的方法，通过所述方法可以改变抗原，因为在抗原和抗体之间没有化学连接。换言之，缀合物和标签构建体之间可形成复合物，所述复合物提供CD40激动剂(即用于激活APC)和抗原(即用于由APC呈递)两者。这有利地允许灵活地制备用于个性化药物的缀合物和复合物。不是制备包含直接融合到CD40激动剂(例如CD40结合剂)的抗原或融合到激动剂的抗原特异性结合剂的缀合物(这将需要为每个患者费力地合成和生产单独的缀合物)，而是本专利技术允许生产通用药剂，即双特异性(CD40和标签特异性)缀合物，其可根据特定个体患者的需要，通过结合到包含不同抗原但相同标签的不同标签构建体，定制用于个体的个性化使用。这样，只需要制备单独的标签构建体，这在制备患者特异性治疗剂的容易性和成本方面提供了益处。进一步认为，与直接和共价融合到CD40结合剂的抗原相比，或者与单独提供CD40结合剂和抗原相比，抗原与CD40结合剂的非共价结合可能有利于复合物的功效。因此，在第一方面，本公开提供了缀合物，其包含：i)结合CD40的第一特异性结合分子，其中所述第一特异性结合分子是CD40的激动剂；以及ii)结合标签部分的第二特异性结合分子；其中所述第一特异性结合分子和第二特异性结合分子共价连接。更具体地，该方面提供了缀合物，其包含：i)至少一个结合CD40的第一特异性结合分子，其中所述第一特异性结合分子是CD40的激动剂，并且是包含抗体的抗原结合结构域的抗原结合蛋白；以及ii)至少一个结合标签部分的第二特异性结合分子，其中所述标签部分不是癌症抗原，其中所述第一特异性结合分子和第二特异性结合分子是包含抗体的抗原结合结构域的抗原结合蛋白，并且彼此共价连接。特别地，第一特异性结合分子可结合CD40(当其定位在细胞，更特别是抗原呈递细胞的表面时)。CD40可以是人CD40。如上所述，在一个实施方案中，特异性结合分子是特异性结合蛋白，特别是抗原结合蛋白，即基于抗体的分子，如下文进一步描述。在特定实施方案中，第一特异性结合分子是抗体。在另一个具体的实施方案中，第二特异性结合分子是单链抗体构建体。缀合物包含至少一个第一特异性结合分子和至少一个第二特异性结合分子。因此，它可以包含两个或更多个第一和/或第二特异性结合分子。在一个实施方案中，缀合物可包含一个第一特异性结合分子和两个或更多个，例如2-4个，第二特异性结合分子。在这样的实施方案中，第一特异性结合分子可以是二价的，或者可以具有2或更高的化合价。可替代地或另外地，在这样的实施方案中，第二特异性结合分子可以是单价的。缀合物可以结合的标签部分可以采取包含与抗原共价连接的标签部分的标签构建体的形式。可产生或获得特异性结合蛋白的任何部分可用作标签部分。然而，在特定实施方案中，标签部分不是癌症抗原。在另一个实施方案中，标签部分不是在哺乳动物细胞表面上表达的蛋白，或者标签部分不包含以下或不由以下组成：在哺乳动物细胞表面上表达的哺乳动物蛋白中存在的氨基酸序列。在一个实施方案中，标签部分不包含以下或不由以下组成：哺乳动物蛋白中存在的氨基酸序列。在一个实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种缀合物，所述缀合物包含：/ni)至少一个结合CD40的第一特异性结合分子，其中所述第一特异性结合分子是CD40的激动剂；以及/nii)至少一个结合标签部分的第二特异性结合分子，其中所述标签部分不是癌症抗原，/n其中所述第一特异性结合分子和第二特异性结合分子是包含抗体的抗原结合结构域的抗原结合蛋白，并且共价连接。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181123 GB 1819124.7;20190215 GB 1902159.11.一种缀合物，所述缀合物包含：
i)至少一个结合CD40的第一特异性结合分子，其中所述第一特异性结合分子是CD40的激动剂；以及
ii)至少一个结合标签部分的第二特异性结合分子，其中所述标签部分不是癌症抗原，
其中所述第一特异性结合分子和第二特异性结合分子是包含抗体的抗原结合结构域的抗原结合蛋白，并且共价连接。


2.如权利要求1所述的缀合物，其中所述第一特异性结合分子：
(i)还包含抗体的Fc区；和/或
(ii)是二价；和/或
(iii)是单克隆抗体；和/或
(iv)是单克隆抗体的F(ab’)2片段；和/或
(v)结合人CD40，并且是人CD40的激动剂。


3.如权利要求1或2所述的缀合物，其中所述第一特异性结合分子是IgG同种型抗体。


4.如权利要求3所述的缀合物，其中所述第一特异性结合分子是IgG2同种型抗体。


5.如权利要求3或4所述的缀合物，其中所述第一特异性结合分子是选自以下的抗体：CP-870,893、APX005M、ADC-1013、ChiLob7/4、SEA-CD40和ABS-1150/1151，或包含所述抗体中的任何一种的抗原结合结构域的抗体。


6.如权利要求1至5中任一项所述的缀合物，其中所述第二特异性结合分子是scFv。


7.如权利要求1至6中任一项所述的缀合物，其中所述第一特异性结合分子和所述第二特异性结合分子都是人的或人源化的。


8.如权利要求1至7中任一项所述的缀合物，其中所述第二特异性结合分子与所述第一特异性结合分子的轻链或重链共价连接。


9.如权利要求8所述的缀合物，其中所述缀合物包含一个第一特异性结合分子以及两个第二特异性结合分子，所述第一特异性结合分子是抗体，所述第二特异性结合分子是scFv，并且：
i)一个scFv缀合到所述抗体的每条重链的CH3结构域；或者
ii)一个scFv缀合到所述抗体的每条轻链的CL结构域。


10.如权利要求1至9中任一项所述的缀合物，其中所述标签部分不包含人B细胞表位。


11.如权利要求1至9中任一项所述的缀合物，其中所述标签部分包含B细胞表位。


12.如权利要求11所述的缀合物，其中所述B细胞表位是非人B细胞表位。


13.如权利要求1至12中任一项所述的缀合物，其中所述标签部分是肽。


14.如权利要求13所述的缀合物，其中所述肽包含人工或非天然氨基酸序列，或由哺乳动物蛋白中未发现的氨基酸序列组成。

【专利技术属性】
技术研发人员：S·芒斯保，海伦娜·佩尔松洛茨霍姆，
申请(专利权)人：斯特赖克药物公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE