一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱技术

本发明专利技术公开了一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱，属于中药复方技术领域。标准煎液的制备包括如下步骤：取方中各药材，分别粉碎，按比例混合，加入蒸馏水，浸泡半小时，先武火煮沸，再文火煎煮，煎煮完毕后，趁热过滤，离心，即得。本发明专利技术提供的标准煎液制备方法可获得较高的出膏率和活性成分的提取率。指纹图谱的建立方法，包括如下步骤：不同批次供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、指纹图谱的测定和构建。本发明专利技术提供的指纹图谱建立方法稳定性、重复性和精密度高，简便易行，建立的指纹图谱有20个共有峰，包括升麻素苷、阿魏酸、甘草酸铵、蔓荆子黄素、羌活醇、蛇床子素和异欧前胡素，完善了羌活胜湿汤的质量控制方法。

【技术实现步骤摘要】
一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱
本专利技术属于中药复方领域，具体涉及一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱。
技术介绍
经典名方是中药方剂的杰出代表，是中医药的精华，也是历代中医经验的总结。传统的药用方法多为煎煮法，但传统的煎煮方法主要考虑煎煮器具、前处理方法、煎煮时间等因素，且参数比较模糊，缺乏相应的科学依据作为指导。另外，中药复方所含成分复杂，特别是经配伍煎煮后会发生成分的变化，这也给复方的质量控制带来了很多困难，只用单个或几个成分作为指标进行质量控制不能全面反映复方多组分、多靶点的用药特点。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，可以全面反映药材的质量，能同时对多种成分进行分析，适合复方模糊性、整体性的特点，在复方的质量控制中有广泛的应用。羌活胜湿汤为国家中医药管理局2018年首批公布的100个古代经典名方之一，出自金元四大家李东垣的《内外伤辨惑论》。原文记载：羌活、独活各一钱，藁本、防风、甘草(炙)、川芎各五分，蔓荆子三分，上口父咀，都作一服，水二盏，煎至一盏，去渣，大温服，空心食用。羌活胜湿汤由羌活、独活、藁本、防风、甘草(炙)、川芎、蔓荆子七味药材组方而成，临床上主要用于治疗类风湿性关节炎、偏头痛、肩周炎、感冒等风湿邪气痹阻的疾病，疗效显著。为了实现羌活胜湿汤煎煮过程的规范化，并能综合控制其质量，我们提出了一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱。
技术实现思路
本专利技术提供了一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱，包括以下步骤：1.标准煎液的制备：取羌活，独活，炙甘草，川芎，藁本，防风，蔓荆子，分别粉碎为一定粒度后，按比例混合。加入一定体积的蒸馏水，浸泡半小时，先武火煮沸，再转为文火煎煮一定时间。煎煮完毕后，趁热过滤，离心，即得标准煎液。以出膏量、升麻素苷提取量、甘草酸铵提取量综合加权评分为评价指标，采用正交试验，考察加水量、煎煮时间、煎煮次数三个因素对煎煮过程的影响，获得最佳煎煮工艺，并进行工艺验证；2.指纹图谱供试品溶液的制备：不同批次的羌活胜湿汤分别煎煮得标准煎液，各冻干得粉末，加入一定浓度的甲醇水溶液溶解，配制成一定浓度的供试品溶液，过膜，备用；3.对照品溶液的制备：精密称取升麻素苷、阿魏酸、甘草酸铵、蔓荆子黄素、羌活醇、蛇床子素、异欧前胡素对照品适量，加入一定浓度的甲醇水溶液溶解，定容至10mL，过微孔滤膜，得对照品混合物溶液；4.指纹图谱的测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪，进行测定，即得各批次羌活胜湿汤和对照品溶液的色谱图；5.指纹图谱的构建：将不同批次羌活胜湿汤色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)，选择各批次色谱图中均含有的色谱峰作为共有峰，生成羌活胜湿汤对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间，评价各批次羌活胜湿汤图谱的相似度。所述的步骤1中，羌活，独活，炙甘草，川芎，藁本，防风，蔓荆子药材的重量比为6：6：3：3：3：3：1.8，各药材粉碎粒度为粗粉或最粗粉。所述的步骤1中，综合加权评分中，出膏量占20％，升麻素苷提取量占40％，甘草酸铵提取量占40％。所述的步骤1中，正交试验中，加水量的三个水平设置为1：10、1：15和1：20，煎煮时间的三个水平设置为5分钟、10分钟和15分钟，煎煮次数的三个水平设置为1次、2次和3次。所述的步骤1中，最佳煎煮工艺为加20倍量的水，煎煮3次，每次10分钟。所述的步骤2中，所用的甲醇水溶液体积分数为30％-80％，供试品溶液浓度为2-10mg/mL。所述的步骤3中，所用的甲醇水溶液体积分数为30％-70％，各标准品浓度为50-200μg/mL。所述的步骤4中，建立羌活胜湿汤指纹图谱的色谱条件为：色谱柱为AgilentZorbaxExtendC18柱(4.6×250mm，5μm)；检测波长为254nm；流速为1.0mL/min；柱温为25℃；进样量为20μL；流动相为0.1％磷酸水(A)和乙腈(B)进行梯度洗脱；梯度洗脱程序为：0～10min，15～20％B；10～15min，20～35％B；15～25min，35～40％B；25～35min，40～65％B；35～40min，65～70％B；40～45min，70～100％B。所述的步骤5中，构建的羌活胜湿汤指纹图谱含有20个共有峰，以峰10为参照峰，各共有峰的相对保留时间依次为：峰1：0.288-0.292；峰2：0.318-0.321；峰3：0.463-0.466；峰4：0.496-0.500；峰5：0.553-0.559；峰6：0.575-0.579；峰7：0.634-0.637；峰8：0.742-0.747；峰9：0.874-0.883；峰10：1；峰11：1.059-1.063；峰12：1.112-1.117；峰13：1.250-1.255；峰14：1.341-1.351；峰15：1.382-1.391；峰16：1.415-1.426；峰17：1.468-1.480；峰18：1.628-1.636；峰19：1.693-1.707；峰20：1.757-1.772。所述的步骤5中，共有峰中包括七个特征峰，峰2为升麻素苷、峰5为阿魏酸、峰12为甘草酸铵、峰15为蔓荆子黄素、峰18为羌活醇、峰19为蛇床子素、峰20为异欧前胡素。甘草酸铵、峰15为蔓荆子黄素、峰18为羌活醇、峰19为蛇床子素、峰20为异欧前胡素。本专利技术的有益效果是：(1本专利技术提供的羌活胜湿汤标准煎液的制备方法，可获得较高的出膏率和药材中活性成分的提取率，且方法稳定可靠。(2)本专利技术基于羌活胜湿汤标准煎液建立的HPLC指纹图谱可全面反映羌活胜湿汤的化学成分信息和整体性特征，包含了大部分药理活性成分，为羌活胜湿汤的质量控制提供了依据。(3)本专利技术建立的指纹图谱方法操作简便、耗时短、精确度高、准确性好、重复性好，易于实现。附图说明图1为本专利技术一种实施例的羌活胜湿汤样品色谱图(1-20：20个共有峰；2.升麻素苷5.阿魏酸12.甘草酸铵15.蔓荆子黄素18.羌活醇19.蛇床子素20.异欧前胡素)图2为本专利技术一种实施例的13批羌活胜湿汤指纹图谱叠加图具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不仅局限于下述的实施方式。实施例1.羌活胜湿汤标准煎液的制备工艺以出膏量、升麻素苷、甘草酸铵提取量综合加权评分为评价指标，采用L9(34)正交试验，以加水量、煎煮时间、煎煮次数为考察因素进行实验并进行工艺验证。具体实施过程如下：升麻素苷、甘草酸铵对照品标准曲线的绘制：精密称取升麻素苷、甘草酸铵对照品适量，加入70％甲醇溶液配成一系列浓度的溶液，过0.22μm微孔滤膜，注入液相色谱仪。色谱条件如下：色谱柱为AgilentZorbaxExtendC18色谱柱(4.6×250mm，5μm)，流动相为0.02％磷酸水(A)和乙腈(B)，梯度洗脱程序如下本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱，其特征在于包括以下具体步骤：/n(1)标准煎液的制备：取羌活，独活，炙甘草，川芎，藁本，防风，蔓荆子，分别粉碎为一定粒度后，按比例混合，加入一定体积的蒸馏水，浸泡半小时，先武火煮沸，再转为文火煎煮一定时间，煎煮完毕后，趁热过滤，离心，即得标准煎液；以出膏量、升麻素苷提取量、甘草酸铵提取量综合加权评分为评价指标，采用正交试验，考察加水量、煎煮时间、煎煮次数三个因素对煎煮过程的影响，获得最佳煎煮工艺，并进行工艺验证；/n(2)指纹图谱供试品溶液的制备：不同批次的羌活胜湿汤分别煎煮得标准煎液，各冻干得粉末，加入一定浓度的甲醇水溶液溶解，配制成一定浓度的供试品溶液，过膜，备用；/n(3)对照品溶液的制备：精密称取升麻素苷、阿魏酸、甘草酸铵、蔓荆子黄素、羌活醇、蛇床子素、异欧前胡素对照品适量，加入一定浓度的甲醇水溶液溶解，定容至10mL，过微孔滤膜，得对照品混合物溶液；/n(4)指纹图谱的测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪，进行测定，即得各批次羌活胜湿汤和对照品溶液的色谱图；/n(5)指纹图谱的构建：将不同批次羌活胜湿汤色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)，选择各批次色谱图中均含有的色谱峰作为共有峰，生成羌活胜湿汤对照指纹图谱，计算各共有峰的相对峰面积和相对保留时间，评价各批次羌活胜湿汤图谱的相似度。/n...

【技术特征摘要】
1.一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱，其特征在于包括以下具体步骤：
(1)标准煎液的制备：取羌活，独活，炙甘草，川芎，藁本，防风，蔓荆子，分别粉碎为一定粒度后，按比例混合，加入一定体积的蒸馏水，浸泡半小时，先武火煮沸，再转为文火煎煮一定时间，煎煮完毕后，趁热过滤，离心，即得标准煎液；以出膏量、升麻素苷提取量、甘草酸铵提取量综合加权评分为评价指标，采用正交试验，考察加水量、煎煮时间、煎煮次数三个因素对煎煮过程的影响，获得最佳煎煮工艺，并进行工艺验证；
(2)指纹图谱供试品溶液的制备：不同批次的羌活胜湿汤分别煎煮得标准煎液，各冻干得粉末，加入一定浓度的甲醇水溶液溶解，配制成一定浓度的供试品溶液，过膜，备用；
(3)对照品溶液的制备：精密称取升麻素苷、阿魏酸、甘草酸铵、蔓荆子黄素、羌活醇、蛇床子素、异欧前胡素对照品适量，加入一定浓度的甲醇水溶液溶解，定容至10mL，过微孔滤膜，得对照品混合物溶液；
(4)指纹图谱的测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪，进行测定，即得各批次羌活胜湿汤和对照品溶液的色谱图；
(5)指纹图谱的构建：将不同批次羌活胜湿汤色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)，选择各批次色谱图中均含有的色谱峰作为共有峰，生成羌活胜湿汤对照指纹图谱，计算各共有峰的相对峰面积和相对保留时间，评价各批次羌活胜湿汤图谱的相似度。


2.根据权利要求1所述的一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱，其特征在于，所述的步骤(1)中，羌活，独活，炙甘草，川芎，藁本，防风，蔓荆子药材的重量比为6：6：3：3：3：3：1.8，各药材粉碎粒度为粗粉或最粗粉。


3.根据权利要求1所述的一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱，其特征在于，所述的步骤(1)中，综合加权评分中，出膏量占20％，升麻素苷提取量占40％，甘草酸铵提取量占40％。


4.根据权利要求1所述的一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱，其特征在于，所述的步骤(1)中，正交试验中，加水量的三个水平设置为1：10、1：15和1：20，煎煮时间的三个水平设置为5分钟、10分钟和15分钟，煎煮次数的三个水平设置为1次、2次和3次。


5.根据权利要求1所述的一种羌活胜湿汤标准煎液的制备方法及其指纹图谱，其特征在于，所述的步骤(1)中，最佳煎煮工艺为加20倍量的水，煎煮3...

【专利技术属性】
技术研发人员：王春华，李洪娟，孙佳佳，刘永俊，王继鹏，
申请(专利权)人：滨州医学院，山东祥隆医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37