食管鳞癌淋巴结转移标志物、其检测试剂、检测系统及应用技术方案

本发明专利技术涉及食管鳞癌诊断、治疗领域，具体涉及食管鳞癌淋巴结转移标志物、其检测试剂、检测系统及应用。所述标志物为胱硫醚β‑合成酶，本发明专利技术通过检测受试者组织中胱硫醚β‑合成酶的含量可以判断受试者食管鳞癌淋巴是否转移，另外，本发明专利技术通过细胞实验及动物实验证明，下调胱硫醚β‑合成酶可以抑制食管鳞癌淋巴转移，该结果为治疗食管鳞癌淋巴结转移提供新思路。

【技术实现步骤摘要】
食管鳞癌淋巴结转移标志物、其检测试剂、检测系统及应用
本专利技术涉及食管鳞癌诊断、治疗领域，具体涉及食管鳞癌淋巴结转移的标志物、其检测试剂、检测系统及应用。
技术介绍
食管癌淋巴结转移是影响食管癌患者预后的最重要因素之一，近年来淋巴结转移数对肿瘤预后影响越来越受到人们重视。手术是治疗食管癌主要方法之一，但单纯手术效果较差，术后失败主要原因是复发和转移。胱硫醚β-合成酶(Cystathionineβ-sunthase，CBS)是一种吡哆醛磷酸依赖性酶，以63kDa的同源四聚体形式存在，以半胱氨酸为底物催化内源性H2S的产生。越来越多的研究证实H2S在心脑血管系统、消化系统、呼吸系统、神经系统、内分泌系统以及免疫系统中都具有广泛生物学效应。目前已有研究显示，CBS/H2S体系在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。但是未见有关于胱硫醚β-合成酶与食管鳞癌淋巴结转移相关的报道。
技术实现思路
有鉴于上述技术问题，本专利技术提供了诊断食管鳞癌淋巴结转移标志物，及抑制食管鳞癌淋巴结转移的药物作用靶点，为食管鳞癌的诊断和治疗提供有价值的帮助。本专利技术的目的之一是提供食管鳞癌淋巴结转移标志物，所述标志物为胱硫醚β-合成酶。本专利技术的目的之二是提供检测所述食管鳞癌淋巴结转移标志物的试剂在制备食管鳞癌淋巴结转移诊断工具中的应用。本专利技术的目的之三是提供一种检测所述食管鳞癌淋巴结转移标志物的检测系统，其包括接收部分，以接收来自食管鳞癌患者的样品，并且所述样品中包含胱硫醚β-合成酶；检测部分，其包括能检测胱硫醚β-合成酶的物质。进一步的，所述检测部分包括能够与胱硫醚β-合成酶结合的物质。进一步的，所述物质是选自由抗体或其抗原结合片段、相互作用融合蛋白、适体和亲和体组成的生物特异性捕获剂。进一步的，所述系统是生物芯片或测试条或微量滴定板。本专利技术的目的之四是提供所述食管鳞癌淋巴结转移标志物的抑制剂在制备抑制食管鳞癌淋巴结转移的药物中的应用。进一步的，所述抑制剂包括能够下调胱硫醚β-合成酶或涉及其上游或下游途径的物质的表达或活性的抑制剂。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术首次发现了胱硫醚β-合成酶(以下或简称为CBS)与食管鳞癌淋巴结转移相关，通过检测受试者CBS的表达，可以判断受试者食管鳞癌淋巴结是否转移以及是否存在转移风险，从而指导提供预防和治疗方案。本专利技术通过实验证明，下调CBS的表达可抑制淋巴结转移，可以为治疗食管鳞癌淋巴结转移提供新思路。附图说明图1为免疫组织化学法检测CBS在食管鳞癌组织和癌旁组织中的表达，A为组织拍照图，B为CBS表达阳性率(％)，C为CBS评分。图2为免疫组织化学法检测CBS在无淋巴结转移和有淋巴结转移食管鳞癌组织中的表达，A为组织拍照图，B为CBS表达阳性率(％)，C为CBS评分。图3为免疫蛋白印迹法检测CBS在食管鳞癌组织和癌旁组织中的表达(A)和CBS蛋白表达水平的统计图(B)。图4为免疫蛋白印迹法检测CBS在有淋巴结转移食管鳞癌组织和无淋巴结转移食管鳞癌组织中的表达(A)和CBS蛋白表达水平的统计图(B)。图5为CBS在转染CBSsiRNA和scrambledsiRNA的KYSE450细胞中的表达，图A为免疫蛋白印迹法检测结果，图B为CBS蛋白表达水平的统计图。图6为CBS在转染CBS过表达质粒和空载质粒的Eca109细胞中的表达，图A为免疫蛋白印迹法检测结果，图B为CBS蛋白表达水平的统计图。图7为CBS表达下调对KYSE450细胞生长(A)、增殖(B)、迁移(C)和侵袭(D)的影响。图8为CBS过表达对Eca109细胞生长(A)、增殖(B)、迁移(C)和侵袭(D)的影响。。图9为CBS不同表达水平对食管鳞癌细胞诱导脐静脉内皮细胞成管能力的影响，A为CBS表达下调后脐静脉内皮细胞生成血管的图像，B为CBS表达下调后脐静脉内皮细胞生成血管的数量统计，C为过表达CBS脐静脉内皮细胞生成血管图像，D为过表达CBS脐静脉内皮细胞生成血管的数量统计。图10为CBS不同表达水平对食管鳞癌细胞诱导淋巴内皮细胞成管能力的影响，A为CBS表达下调后淋巴内皮细胞生成淋巴管的图像，B为CBS表达下调后淋巴内皮细胞生成淋巴管的数量统计，C为过表达CBS淋巴内皮细胞生成淋巴管的图像，D为过表达CBS淋巴内皮细胞生成淋巴管的数量统计。图11为CBS表达下调对爪垫同侧腘窝淋巴结转移的影响，A为淋巴结大小，B为HE染色结果。图12为CBS表达下调对腋下同侧腋窝淋巴结转移的影响，A为淋巴结大小，B为HE染色结果。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、CBS差异表达1、检测组织芯片中食管鳞癌及癌旁组织中CBS蛋白的表达，淋巴结转移癌组织和非淋巴结转移癌组织中CBS蛋白的表达(1)样本收集食管鳞癌患者组织(含癌和癌旁)68例。淋巴结转移性食管鳞癌组织48例。淋巴结非转移性食管鳞癌组织25例。(2)实验方法免疫组织化学法。包埋切片后烤片，温度设置80℃，时间1-2h；脱蜡2次，每次15min，复水按照酒精浓度100％、95％、90％、85％、80％、75％、70％每次5min；在3％H2O2，室温条件下避光10min；在室温条件下滴加0.3％Triton-100孵育10min；微波修复，高火修复4次，每次6min，后需要冷却至室温，补加枸橼酸钠溶液；5％BSA滴加覆满组织，室温30min；孵一抗，于湿盒中，4℃过夜；第二天，补加一抗，37℃烘箱放置45min；孵二抗，室温孵育15min左右，时间不易过长；链霉亲和素-PoD浓缩液，1：100稀释，滴加，室温孵育30min；显色，1mLPBS中加入试剂盒中DAB显色液A50μL+显色液B50μL，充分混合均匀，滴加到切片，显微镜下观察，约5-30min可显色；水洗终止后用苏木素复染20s左右，水洗终止，在水中放置约9min，显微镜下观察；用60％、70％、80％、90％、95％、100％梯度酒精脱水，各浓度停留3min；用二甲苯处理3min后封片，备好蒸馏水洗干净晾干的盖玻片，滴半滴树胶，覆盖在组织上；显微镜下观察，红色/棕色区域即为目的蛋白，拍照记录。(3)实验结果CBS在食管鳞癌患者癌组织中的表达率明显高于癌旁组织。在75例食管鳞癌患者组织中，除去7例患者癌旁组织未检测到食管粘膜外，其余68例患者癌组织与癌旁组织相比，有53例癌组织阳性表达率高于癌旁，占78％(见图1)。所有患者中除去两例患者没有N分期资料外，有48例患者伴有淋巴结转移，在有淋巴结转移的患者中根据淋巴结转移程度将患者分为N1期、N2期和N3期。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.食管鳞癌淋巴结转移标志物，其特征在于，所述标志物为胱硫醚β-合成酶。/n

【技术特征摘要】
1.食管鳞癌淋巴结转移标志物，其特征在于，所述标志物为胱硫醚β-合成酶。


2.检测权利要求1所述食管鳞癌淋巴结转移标志物的试剂在制备食管鳞癌淋巴结转移诊断工具中的应用。


3.一种检测权利要求1所述食管鳞癌淋巴结转移标志物的检测系统，其特征在于，其包括接收部分，以接收来自食管鳞癌患者的样品，并且所述样品中包含胱硫醚β-合成酶；检测部分，其包括能检测胱硫醚β-合成酶的物质。


4.根据权利要求3所述的检测系统，其特征在于，所述检测部分包括能够与胱硫醚β-合成酶结合的物质。

【专利技术属性】
技术研发人员：王天晓，李明，柳雅，潘利敏，邓钰莹，韩雪，符含，李禹曦，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：河南;41