一种表皮干细胞复苏液及复苏方法技术

本发明专利技术公开了一种表皮干细胞复苏液，包括培养基和添加在培养基中的以下成分：葡萄糖酸钙、雪胆素甲、Fe

【技术实现步骤摘要】
一种表皮干细胞复苏液及复苏方法
本专利技术涉及干细胞领域，尤其涉及一种表皮干细胞复苏液及复苏方法。
技术介绍
皮肤是人体最大的器官，也是人体的第一道防线。在抵御微生物入侵、紫外线辐射及防止水分的丢失、调节体温上起重要作用，同时也是免疫系统的组成部分之一。人体表皮干细胞是一种具有产生至少一种以上高度分化子代细胞潜能的细胞，可使皮肤再生，由于皮肤表皮干细胞再生周期长，随着年龄的增长，皮肤表皮干细胞数量也在逐渐减少。表皮干细胞（ESCs）是一类具有无限增殖能力，可增殖分化为表皮中各种功能细胞的细胞群。主要位于表皮基底层，属于成体干细胞，具有很强的分裂增殖能力，以补充衰老脱落的角质细胞。表皮干细胞具有干细胞的特征：未成熟、体积小、细胞器小、克隆形成能力高、细胞周期慢、无限次分裂等。它的正常增殖和分化是维持皮肤及其附属器结构和功能完整的基本要求。是皮肤及附属器官发生、修复的基础，也是皮肤创面修复过程中的重要种子细胞，可通过增殖、分化、迁移等方式参与创面修复。表皮干细胞在特定诱导条件下可以诱导分化成皮肤和附属器官，在缺失表皮干细胞的情况下，上皮组织的修复进度将受到明显的影响。在表皮干细胞的应用中，经常需要将作为种子细胞的表皮干细胞在液氮中进行超低温保存，需要时再将冻存的表皮干细胞自液氮中取出，经复苏后再正常使用，现有的复苏液存在成分有安全隐患，如添加胎牛血清等，经复苏后的细胞存活率低，细胞增殖活性差等问题，导致复苏后的表皮干细胞不能满足科研及临床的使用需求，因此有必要研究一种表皮干细胞的复苏液及复苏方法，来提高表皮干细胞的复苏效率。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种表皮干细胞复苏液，有效提高表皮干细胞的复苏率，提高复苏后细胞的增殖活性。本专利技术的目的之二在于提供一种表皮干细胞的复苏方法。本专利技术的目的之一采用如下技术方案实现：一种表皮干细胞复苏液，包括培养基和添加在培养基中的以下成分：葡萄糖酸钙、雪胆素甲、Fe3O4磁性纳米微球、肌苷、右旋糖酐、谷氨酰胺、抗坏血酸。进一步地，培养基中各成分的浓度为：葡萄糖酸钙2.8-3.5μg/mL、雪胆素甲1.5-2ng/mL、Fe3O4磁性纳米微球5-10ng/mL、肌苷3.5-5.5ng/mL、右旋糖酐1.3-2.5μg/mL、谷氨酰胺1-5μg/mL、抗坏血酸5-10μg/mL。进一步地，培养基中各成分的浓度为：葡萄糖酸钙3.1μg/mL、雪胆素甲1.8ng/mL、Fe3O4磁性纳米微球8ng/mL、肌苷4ng/mL、右旋糖酐2.2μg/mL、谷氨酰胺3μg/mL、抗坏血酸7μg/mL。进一步地，所述Fe3O4磁性纳米微球的粒径为100-200nm。进一步地，所述培养基为DMEM/F12培养基。本专利技术的目的之二采用如下技术方案实现：一种表皮干细胞的复苏方法，包括以下步骤：（1）取出在液氮中冻存的表皮干细胞置于37-40℃的水浴中震荡复温，融化后加入权利要求1至5任一项所述的复苏液，混合均匀后离心，去除上清；（2）向步骤（1）的表皮干细胞中再次加入复苏液重悬细胞，放入37℃，5%CO2的培养箱中，培养24h，即完成复苏培养。进一步地，步骤（2）中复苏液中表皮干细胞的密度为4-9×105个/mL。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术提供一种表皮干细胞复苏液，在复苏液中各成分协同作用，有效提高表皮干细胞的复苏率，尤其是雪胆素甲、Fe3O4磁性纳米微球、肌苷在复苏液中发挥作用，为表皮干细胞的复苏提供稳定的外环境，并对表皮干细胞形成有效刺激，使经液氮超低温保存的细胞快速恢复活性，提高细胞的复苏率，经复苏培养24h后的表皮干细胞仍保持较好的增殖活性，保障经低温冻存的表皮干细胞在科研及临床应用的效果。2、本专利技术还提供了一种表皮干细胞的复苏方法，在复苏过程中添加本专利技术的复苏液，并在37℃，5%CO2的条件下培养24h，该过程细胞几乎不增殖，主要是帮助冻存后的表皮干细胞适应外部环境，快速恢复增殖活性，减少细胞凋亡，此后再经常规培养即可收获大量的表皮干细胞。具体实施方式下面，结合具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。实施例1一种表皮干细胞复苏液，由DMEM/F12培养基和添加在培养基中的以下成分组成：葡萄糖酸钙、雪胆素甲、粒径为100-200nm的Fe3O4磁性纳米微球、肌苷、右旋糖酐、谷氨酰胺、抗坏血酸；培养基中各成分的浓度为：葡萄糖酸钙3.1μg/mL、雪胆素甲1.8ng/mL、粒径为100-200nm的Fe3O4磁性纳米微球8ng/mL、肌苷4ng/mL、右旋糖酐2.2μg/mL、谷氨酰胺3μg/mL、抗坏血酸7μg/mL。一种表皮干细胞的复苏方法，包括以下步骤：（1）取出在液氮中冻存6个月的P3代表皮干细胞置于37℃的水浴中震荡复温，融化后加入等量复苏液，混合均匀后800rpm离心10min，去除上清；（2）向步骤（1）的表皮干细胞中再次加入复苏液重悬细胞，复苏液中表皮干细胞的密度为7×105个/mL，放入37℃，5%CO2的培养箱中，培养24h，即完成复苏培养。实施例2一种表皮干细胞复苏液，由DMEM/F12培养基和添加在培养基中的以下成分组成：葡萄糖酸钙、雪胆素甲、粒径为100-200nm的Fe3O4磁性纳米微球、肌苷、右旋糖酐、谷氨酰胺、抗坏血酸；培养基中各成分的浓度为：葡萄糖酸钙2.8μg/mL、雪胆素甲1.5ng/mL、粒径为100-200nm的Fe3O4磁性纳米微球5ng/mL、肌苷3.5ng/mL、右旋糖酐1.3μg/mL、谷氨酰胺1μg/mL、抗坏血酸5μg/mL。一种表皮干细胞的复苏方法，包括以下步骤：（1）取出在液氮中冻存3个月的P3代表皮干细胞置于38℃的水浴中震荡复温，融化后加入等量复苏液，混合均匀后800rpm离心10min，去除上清；（2）向步骤（1）的表皮干细胞中再次加入复苏液重悬细胞，复苏液中表皮干细胞的密度为4×105个/mL，放入37℃，5%CO2的培养箱中，培养24h，即完成复苏培养。实施例3一种表皮干细胞复苏液，由DMEM/F12培养基和添加在培养基中的以下成分组成：葡萄糖酸钙、雪胆素甲、粒径为100-200nm的Fe3O4磁性纳米微球、肌苷、右旋糖酐、谷氨酰胺、抗坏血酸；培养基中各成分的浓度为：葡萄糖酸钙3.5μg/mL、雪胆素甲2ng/mL、粒径为100-200nm的Fe3O4磁性纳米微球10ng/mL、肌苷5.5ng/mL、右旋糖酐2.5μg/mL、谷氨酰胺5μg/mL、抗坏血酸10μg/mL。一种表皮干细胞的复苏方法，包括以下步骤：（1）取出在液氮中冻存3个月的P3代表皮干细胞置于40℃的水浴中震荡复温，融化后加入等量复苏液，混合均匀后800rpm离心10min，去本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表皮干细胞复苏液，其特征在于，包括培养基和添加在培养基中的以下成分：葡萄糖酸钙、雪胆素甲、Fe

【技术特征摘要】
1.一种表皮干细胞复苏液，其特征在于，包括培养基和添加在培养基中的以下成分：葡萄糖酸钙、雪胆素甲、Fe3O4磁性纳米微球、肌苷、右旋糖酐、谷氨酰胺、抗坏血酸。


2.根据权利要求1所述表皮干细胞复苏液，其特征在于，培养基中各成分的浓度为：葡萄糖酸钙2.8-3.5μg/mL、雪胆素甲1.5-2ng/mL、Fe3O4磁性纳米微球5-10ng/mL、肌苷3.5-5.5ng/mL、右旋糖酐1.3-2.5μg/mL、谷氨酰胺1-5μg/mL、抗坏血酸5-10μg/mL。


3.根据权利要求2所述表皮干细胞复苏液，其特征在于，培养基中各成分的浓度为：葡萄糖酸钙3.1μg/mL、雪胆素甲1.8ng/mL、Fe3O4磁性纳米微球8ng/mL、肌苷4ng/mL、右旋糖酐2.2μg/mL、谷氨酰胺3μg/mL、抗坏血酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾定福，廖洪花，
申请(专利权)人：郑州广毓生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41