一种唾液乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种唾液乳杆菌及其应用；该唾液乳杆菌

【技术实现步骤摘要】
一种唾液乳杆菌及其应用所属
本专利技术属于生物
，具体涉及一种缓解化疗药引起的肠黏膜炎的唾液乳杆菌及其应用
技术介绍
癌症作为当今人类重大的生命健康安全威胁之一，其治疗难度大、治疗成本高等因素一直是全人类勠力攻克的难题。化疗是治疗癌症的常见方法，但值得关注的是，化疗引起的诸多毒副作用已成为癌症治疗中亟需攻克的重大难题。化疗引发的毒副作用中，相关药物对肠道的负面影响是毒副作用之一，极有可能导致炎症性肠病的发生，如结肠炎、黏膜炎等。化疗可能引起急性行为副作用(疲劳、厌食等)及肠道稳态破坏(腹泻、便秘及菌群失调)，显著降低了患者的生活质量。目前虽有多种常见的针对治疗炎症性肠病的方法，但由于常见的药物或在缓解肠黏膜炎的效果并不明显或一定程度上影响癌症的治疗疗效。越来越多的研究表明，肠道菌群在癌症的治疗过程中发挥着重要的作用。补充益生菌是一种简单可行的调节肠道菌群的方式。同时益生菌也被正式在降低治疗副作用方面具有有益作用。乳杆菌具有调节免疫和肠道菌群改善疾病的作用，但其作用是具有菌株特异性且机制尚不完全清楚。乳杆菌可能具有缓解化疗药引起的肠黏膜炎的作用。本专利技术从多种食品源益生菌中筛选了一株能够缓解化疗药毒副作用的唾液乳杆菌菌株，利用16srDNA技术对筛选的菌株进行鉴定，利用线虫模型及小鼠动物模型对其缓解缓解化疗药引起的肠黏膜炎进行评估验证研究，对为益生菌缓解化疗副作用提供了良好基础。
技术实现思路
专利技术目的本专利技术的目的是提供一株从市售泡菜筛选出的，一种能够缓解化疗药物引起的肠黏膜炎的唾液乳杆菌。技术方案一种唾液乳杆菌Lactobacillussalivarius，2021年05月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.22516，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。所述的唾液乳杆菌在制备化疗药物引起的肠黏膜炎药物中的应用。所述的唾液乳杆菌特性描述如下：通过富集培养、利用平板分区划线、转接等方法分离出一株唾液乳杆菌，命名为唾液乳杆菌CPU-1，对其形态学和生理生化试验，该菌在以MRS固体培养基上经48h培养后菌落大小为0.6～1.5mm，呈乳白色、边缘整齐、较光泽并凸起于培养基表面，革兰氏阳性短杆菌、无芽孢、无荚膜。唾液乳杆菌产H2S试验、吲哚试验为阴性；甲基红试验、接触酶试验、柠檬酸盐利用试验、淀粉水解试验和明胶液化试验均为阳性。对唾液乳杆菌CPU-1进行16srDNA序列扩增并测序，将测序结果(见SEQIDNO.1)与GenBank中公开的细菌16srDNA序列进行核苷酸同源性比较，并构建系统发育树。BLAST分析结果显示，16SrDNA基因序列与唾液乳杆菌的同源性最高。基于16SrDNA序列、生化鉴定以及表征性状，将分离菌株鉴定为唾液乳杆菌。使用生存条件相同、年龄相同的野生型的秀丽隐杆线虫(N2)为观察对象，含有不同化疗药物的的NGM培养基预先接种大肠杆菌OP50作为线虫的常规食物作为对照组，以含有不同化疗药物的的NGM培养基预先接种等量唾液乳杆菌作为线虫的食物作为实验组。此后每个平板转接20条同步化线虫，于20℃培养。借助光学显微镜每天观察线虫的生存情况，并记录下线虫死亡数，计算存活率，直至所有线虫死亡。随后对不同化疗药物与益生菌组合条件下培养的线虫存活率进行对比、分析，评估益生菌对化疗药物的毒性影响，发现唾液乳杆菌CPU-1能降低化疗药对线虫的毒性。小鼠实验表明唾液乳杆菌CPU-1能有效降低化疗药引起的黏膜炎症状。有益效果本专利技术首次在市售泡菜筛选出的唾液乳杆菌CPU-1，该菌株为全新的菌株，其能够缓解化疗药物引起的毒副作用-黏膜炎症状，具体为：显著延长生活在含化疗药物的NGM固体培养基上秀丽隐杆线虫的寿命，缓解小鼠因化疗药物替莫唑胺引起的包括腹泻、体重减少、便血在内的多种肠黏膜炎症状。附图说明图1为唾液乳杆菌的系统发育树；图2为对不同化疗药物与唾液乳杆菌组合条件下培养的线虫存活率；图3为小鼠结肠肠道病理切片图；其中空白对照组(A)，化疗药物组(B)，化疗药物+唾液乳杆菌(C)。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。实施例1线虫模型初步检测及评估唾液乳杆菌缓解化疗药物的毒副作用效果使用同步化后的生存条件相同、年龄相同的野生型的秀丽隐杆线虫(N2)为观察对象，含有化疗药物的的NGM培养基预先接种大肠杆菌OP50作为线虫的常规食物作为对照组，以含有不同化疗药物的的NGM培养基预先接种等量唾液乳杆菌作为线虫的食物作为实验组，。此后每个平板转接20条同步化线虫，于20℃培养。借助光学显微镜每天观察线虫的生存情况，并记录下线虫死亡数，计算存活率，直至所有线虫死亡。随后对不同化疗药物与益生菌组合条件下培养的线虫存活率进行对比、分析，评估益生菌的治疗作用与化疗药物的影响。研究结果表明：如图2所示，唾液乳杆菌显著延长生活在含化疗药物的NGM固体培养基上秀丽隐杆线虫的寿命，减少化疗药物的毒副作用。实施例2小鼠动物模型检测及评估评估唾液乳杆菌缓解化疗药物的毒副作用效果根据线虫模型初步检测及评估化疗药物的毒副作用，选用替莫唑胺口服灌胃小鼠进行造模；20只小鼠(6周龄)随机分为3个组：空白对照组、化疗药物组(灌胃替莫唑胺0.1mg/只/天)、化疗药物+益生菌组(灌胃替莫唑胺0.1mg/天/只并灌胃109CFU唾液乳杆菌200μL/只/天)；在相同温度、化疗药物及益生菌总用量相同的条件下每日记录各组实验小鼠的体重变化、腹泻程度等指标；在给药处理第14天取肠道样品后进行病理切片，分析评估各组的肠道损伤情况。研究结果表明：如图3所示，与空白对照组(A组)相比，化疗药物组(B组)出现炎症细胞浸润，腺管扭曲严重，呈现溃疡现象并出现大量空泡，而在化疗药物+唾液乳杆菌(C组)中，上述现象得到一定程度缓解。唾液乳杆菌能够缓解小鼠因化疗药物替莫唑胺引起的包括腹泻、体重减少、便血在内的多种肠黏膜炎症状。序列表<110>中国药科大学<120>一种唾液乳杆菌及其应用<160>1<170>SIPOSequenceListing1.0<210>1<211>1432<212>DNA<213>16sRNA(2AmbystomalateralexAmbystomajeffersonianum)<400>1tgcaagtcgaacgaaactttcttacaccgaatgcttgcattcaccgtaagaagttgagtg60gcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcctaaaagaaggggataacacttggaaac120agg本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种唾液乳杆菌，其特征在于该唾液乳杆菌

【技术特征摘要】
1.一种唾液乳杆菌，其特征在于该唾液乳杆菌Lactobacillussalivarius，2021年05月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.22516，...

【专利技术属性】
技术研发人员：储卫华，衡星，罗奥翔，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32