一种用于烟草愈伤组织培养的培养基及其制备方法和烟草愈伤组织培养的方法技术

本发明专利技术提供了一种用于烟草愈伤组织培养的培养基及其制备方法和烟草愈伤组织培养的方法，属于植物组织培养技术领域。本发明专利技术提供的用于烟草愈伤组织培养，包括如下含量的组分：MS粉4.70～4.80g/L、蔗糖28～32g/L、NAA0.5～1.5mg/L、6‑BA0.2～0.5mg/L和琼脂6.5～7.5g/L；所述NAA和6‑BA的浓度比为(2～3):1；所述培养基的pH值为5.7～5.8。本发明专利技术提供的培养基诱导率高，且得到的烟草愈伤组织脱分化程度高、疏松程度好，生长速度快。实施例的结果表明，在本发明专利技术的培养基诱出率在70％以上，愈伤组织脱分化程度高、疏松程度良好，且呈白色，无褐变。

【技术实现步骤摘要】
一种用于烟草愈伤组织培养的培养基及其制备方法和烟草愈伤组织培养的方法
本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及一种用于烟草愈伤组织培养的培养基及其制备方法和烟草愈伤组织培养的方法。
技术介绍
植物组织培养技术，作为植物无菌培养技术的一种，是根据植物细胞全能性，在适宜的温度、湿度等条件下进行愈伤组织诱导的过程。诱导出的愈伤组织可在适宜培养基上进行继代培养，从而能够继续生长发育。烟草属茄科烟草属的双子叶植物，是我国重要的经济作物。为了保证其优良性状的存在，也为了满足实验研究所需的快速大批量繁殖，黄花烟草的组织培养被广泛使用。由于不同外植体诱导愈伤的能力不同，不同培养基诱导愈伤的能力也不同。为减少客观因素对外植体诱导愈伤能力的影响，目前急需一种专门针对烟草愈伤组织培养的培养基和培养方法来提高烟草愈伤组织的诱导率，以保证其长势良好、脱分化程度高、疏松程度好。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种用于烟草愈伤组织培养的培养基及其制备方法和烟草愈伤组织培养的方法。本专利技术提供的培养基得到的烟草愈伤组织的诱导率和脱分化程度高、疏松程度良好，且生长速度快，方便后续实验的进行，提高工作效率和经济效益。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术提供了一种用于烟草愈伤组织培养的培养基，包括如下含量的组分：MS粉4.70～4.80g/L、蔗糖20～30g/L、NAA0.5～1.5mg/L、6-BA0.2～0.5mg/L和琼脂6.5～7.5g/L；所述NAA和6-BA的浓度比为(2～3):1；所述培养基的pH值为5.7～5.8。本专利技术提供了上述技术方案所述培养基的制备方法，包括如下步骤：将MS粉和蔗糖用超纯水溶解，调节pH，定容，添加琼脂，灭菌，在灭菌后的溶液中添加NAA和6-BA，得到培养基。本专利技术提供了一种烟草愈伤组织的培养方法，采用上述技术方案中所述的培养基对烟草叶片依次进行诱导培养和继代培养，得到烟草愈伤组织。优选的，所述烟草的种类包括黄花烟草和红花烟草。优选的，包括如下步骤：1)将烟草叶片进行切割，得到切割后的叶片组织；2)将切割后的叶片组织接种到上述技术方案所述的培养基进行诱导培养；3)将步骤2)诱导出的愈伤组织进行切割，得到愈伤组织块；4)将步骤3)得到的愈伤组织块接种到上述技术方案所述的培养基中进行继代培养，得到烟草愈伤组织。优选的，步骤1)所述烟草叶片选择培养50～60d的无菌苗的幼叶；所述切割后的叶片组织的边长为3～5mm。优选的，步骤2)所述切割后的叶片组织的接种量为8～10个/60cm2。优选的，步骤2)所述诱导培养的温度为22～28℃，诱导培养的时间为18～22d。优选的，步骤3)所述愈伤组织块的大小为(5～10)mm×(5～10)mm×(5～10)mm。优选的，步骤4)所述愈伤组织块的接种量为8～10个/60cm2。优选的，步骤4)所述继代培养的温度为22～28℃，所述继代培养的时间为16～22d。有益效果：本专利技术提供了一种用于烟草愈伤组织培养的培养基，包括如下含量的组分：MS粉4.70～4.80g/L、蔗糖20～30g/L、NAA0.5～1.5mg/L、6-BA0.2～0.5mg/L和琼脂6.5～7.5g/L；所述NAA和6-BA的浓度比为(2～3):1；所述培养基的pH值为5.7～5.8。本专利技术提供的培养基诱导烟草愈伤的诱导率高，且得到的烟草愈伤组织的脱分化程度高、疏松程度良好，生长速度快。实施例的结果表明，在本专利技术的培养基进行烟草愈伤组织的诱导培养和继代培养，诱出率在70％以上，愈伤组织脱分化程度高、疏松程度良好，且呈白色，无褐变。附图说明图1为不同培养基对红花大金元愈伤诱导的结果图，其中第一排自左向右依次为采用对比例1、对比例8和实施例1培养基的结果；第二排自左向右依次为采用对比例2、对比例3和对比例4培养基的结果；第三排自左向右依次为采用对比例5、对比例6和对比例7培养基的结果；图2为不同培养基对阳高小兰花愈伤诱导的结果图，其中第一排自左向右依次为采用实施例2、对比例9和对比例10培养基的结果；第二排自左向右依次为采用对比例8、实施例1和实施例3培养基的结果。具体实施方式本专利技术提供了一种用于黄花烟草愈伤组织培养的培养基，包括如下含量的组分：MS粉4.70～4.80g/L、蔗糖20～30g/L、NAA0.5～1.5mg/L、6-BA0.2～0.5mg/L和琼脂6.5～7.5g/L；所述NAA和6-BA的浓度比为(2～3):1；所述培养基的pH值为5.7～5.8。本专利技术优选在MS培养基的基础上进行配制。在本专利技术中，所述用于烟草愈伤组织培养的培养基中MS粉的浓度为4.70～4.80g/L，进一步优选为4.74g/L；所述蔗糖的浓度为20～30g/L，进一步优选为25～30g，更进一步优选为30g/L；所述NAA的浓度为0.5～1.5mg/L，进一步优选为0.75～1.0mg/L，更进一步优选为1.0mg/L；所述6-BA的浓度为0.2～0.5mg/L，进一步优选为0.3～0.5mg/L，更进一步优选为0.5mg/L；所述琼脂的浓度为6.5～7.5g/L，进一步优选为6.8～7.2g/L，更进一步优选为7g/L。在本专利技术中，所述NAA和6-BA的浓度比为(2～3):1，进一步优选为2:1。本专利技术对各组分的来源没有特殊要求，采用常规市售产品即可。在本专利技术中，MS粉提供组织细胞所需的基本营养物质；蔗糖能够提供细胞所需的碳源和能量；NAA是一种生长调节剂，能够促进细胞分裂与扩大；6-BA是细胞分裂素，可促进植物细胞生长，抑制植物叶绿素的降解，延缓叶片衰老。本专利技术将NAA和6-BA的浓度和比例调节到合适的范围，能够提高黄花愈伤组织的诱导率，且能够使愈伤组织保持良好的分化能力，且脱分化程度高、疏松程度良好，生长速度快等特性。在本专利技术中，所述烟草的种类优选为黄花烟草和红花烟草。在本专利技术中，所述黄花烟草进一步优选包括阳高小兰花和马合烟，更进一步优选为阳高小兰花；在本专利技术中，所述红花烟草进一步优选包括红花大金元、K326和中烟100，更进一步优选为红花大金元。采用本专利技术的培养基培养阳高小兰花，诱导率和获得的愈伤组织的生长状况更好。本专利技术提供了上述技术方案所述培养基的制备方法，包括如下步骤：将MS粉和蔗糖用超纯水溶解，调节pH，定容，添加琼脂，灭菌，在灭菌后的溶液中添加NAA和6-BA，得到培养基。本专利技术将MS粉和蔗糖用超纯水溶解，本专利技术对溶解的方式没有限定，能够充分溶解即可。溶解后，本专利技术调节溶液的pH并定容。定容后，本专利技术在定容后的溶液中添加琼脂。添加琼脂后，本专利技术将添加琼脂的溶液进行灭菌。在本专利技术中，所述灭菌优选为高压灭菌，所述高压灭菌的压力为0.12～0.12.5MPa，进一步优选为0.12Mpa；所述高压灭菌的温度优选为120～121℃，进一步优选为121℃；所述高压灭菌的时间优选本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于烟草愈伤组织培养的培养基，其特征在于，包括如下含量的组分：MS粉4.70～4.80g/L、蔗糖20～30g/L、NAA 0.5～1.5mg/L、6-BA0.2～0.5mg/L和琼脂6.5～7.5g/L；所述NAA和6-BA的浓度比为(2～3):1；所述培养基的pH值为5.7～5.8。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于烟草愈伤组织培养的培养基，其特征在于，包括如下含量的组分：MS粉4.70～4.80g/L、蔗糖20～30g/L、NAA0.5～1.5mg/L、6-BA0.2～0.5mg/L和琼脂6.5～7.5g/L；所述NAA和6-BA的浓度比为(2～3):1；所述培养基的pH值为5.7～5.8。


2.权利要求1所述培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将MS粉和蔗糖用超纯水溶解，调节pH，定容，添加琼脂，灭菌，在灭菌后的溶液中添加NAA和6-BA，得到培养基。


3.一种烟草愈伤组织的培养方法，其特征在于，采用权利要求1所述的培养基对烟草叶片依次进行诱导培养和继代培养，得到烟草愈伤组织。


4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述烟草的种类包括黄花烟草和红花烟草。


5.根据权利要求3或4所述的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将烟草叶片进行切割，得到切割后的叶片组织；
2)将切割后的叶片组织接种到所述的培养基进行诱导培养；

【专利技术属性】
技术研发人员：张彦，杜沙沙，张城蓓，石屹，刘文倩，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所中国烟草总公司青州烟草研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37