含有TSP1蛋白抑制剂作为活性成分的用于预防或治疗法布里病的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及用于预防或治疗法布里病的药物组合物，其含有TSP1蛋白抑制剂作为活性成分。特别地，在本发明专利技术的通过敲除来自法布里病患者的诱导多能干细胞中的TSP1基因而产生的血管内皮细胞中，已经证实了细胞形态的恢复、TSP1基因表达的降低、作为抗血管生成因子的TSP1蛋白和磷酸化SMAD蛋白表达水平的降低、以及作为血管生成因子的KDR蛋白和eNOS蛋白表达水平的增加，因此TSP1基因表达抑制剂或TSP1蛋白活性抑制剂可有效用于治疗法布里病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有TSP1蛋白抑制剂作为活性成分的用于预防或治疗法布里病的药物组合物
本专利技术涉及一种用于预防或治疗法布里病的药物组合物，其包含TSP1蛋白抑制剂作为活性成分。
技术介绍
法布里病是一种由编码α-半乳糖苷酶的基因GLA突变引起的X基因相关的隐性遗传病。GLA基因是一种存在于人类第7外显子xq22.1位置的基因，编码一种由370个氨基酸组成的糖蛋白，该糖蛋白是由总共429个氨基酸组成的前体蛋白加工而成的(Schiffmann，R.Pharmacology&therapeutics122，65-77(2009))。到目前为止，已经报道了超过400个已知出现在GLA基因中的突变位点(http：//www.hgmd.cf.ac.uk)，而法布里病症状的严重程度因GLA基因中的突变位置而异。大多数突变根本没有表现出α-半乳糖苷酶的活性，但是一些错义突变表现出5-10％的残留酶活性。具有这些突变的患者没有表现出临床上重要的病理生理学(Clarke，J.T.Annalsofinternalmedicine146，425-433(2007))。法布里病也显示了溶酶体酶的缺乏。众所周知，这种酶的缺乏是由于球形神经酰胺(Gb3，CD77)的过度积累造成的，球形神经酰胺是一种中性鞘糖脂，在伯基特淋巴瘤细胞中充当志贺毒素受体(Nudelman，E.等人，ScienceNewYork，N.Y220，509-511(1983))。Gb3的积累出现在多种细胞中，如法布里病患者的血管细胞、心脏细胞、肾脏上皮细胞或神经元细胞。特别是，血管细胞中Gb3的积累导致系统性心血管功能障碍，如中风或心肌梗死。在过去，据报道法布里病在117,000名男性中发生1例(Meikle，P.J.等人，Jama281，249-254(1999))。然而，近年来，发病率迅速上升，据报道，每3,100至3,700名男性儿童中就有1名出现这种情况(Spada，m.等人，Americanjournalofhumangenetics79，31-40(2006))。重复酶替代疗法是治疗法布里病的唯一方法。特别地，通过将Fabrazyme(半乳糖苷酶β)(Eng，C.M.等人，TheNewEnglandjournalofmedicine345，9-16(2001))或Plagal(半乳糖苷酶α)(Schiffmann，R.等人，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica97，365-370(2000))作为α-半乳糖苷酶给药，消除了在法布里病患者的各种细胞类型中积累的Gb3。通过静脉注射给药的酶通过质膜上的甘露糖6-磷酸(M6P)受体进入细胞，并移动到溶酶体。这种治疗酶的给药在法布里病的治疗中起着关键作用。然而，重组酶如Fabrazyme或Replagal在血液中不稳定，并且有可能通过重复给药诱导过敏反应(Eng，C.M.等人，TheNewEnglandjournalofmedicine345，9-16(2001)；Schiffmann,R.等人，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica97，365-370(2000)；Sakuraba,H.等人，Journalofhumangenetics51，180-188(2006))。在法布里病的研究和治疗剂的开发中，研究在诱导小鼠GLA基因敲除后内皮功能障碍中Gb3积累的作用是很常见的。在GLA敲除小鼠模型中，在主动脉内皮细胞的细胞质膜微囊中观察到Gb3的异常积累(Shu，L.&Shayman，J.A.TheJournalofbiologicalchemistry282，20960-20967(2007))。据报道，这种Gb3的异常积累可导致GLA敲除的内皮细胞中钙通道功能的降低(Park，S.等人，Cardiovascularresearch89，290-299(2010))。然而，由于GLA敲除小鼠中Gb3积累的程度与法布里病患者中的有些不同，GLA敲除小鼠模型具有局限性，因为它不能复制法布里病患者中诱导的各种并发症(Taguchi，Maruyama等人，BiochemicalJournal456，373-383(2013))。另一方面，干细胞是处于预分化阶段的细胞，会分化为构成组织的每个细胞，并且可以从胚胎、胎儿和成人的每个组织中获得。干细胞是指具有自我增殖能力和多能性的细胞，所述自我增殖能力是指能够在未分化状态下无限增殖，所述多能性是指通过特异性分化刺激分化成各种组织细胞的潜力。干细胞通过分化(环境)的刺激分化成特定的细胞，与细胞分裂停止的已分化细胞不同，它们可以通过细胞分裂(自我更新)产生与自身相同的细胞，从而具有增殖(扩增)特征。干细胞也可以通过不同的环境或分化刺激分化为其他细胞，从而具有分化的可塑性。包括诱导多能干细胞(iPSC)在内的人类多能干细胞(hPSCs)可以分化为多种细胞类型。诱导多能干细胞(iPSCs)可以在体外分化并用于治疗没有免疫排斥的疾病，或者作为理解和评估疾病早期机制的手段(Muotri，A.R.EpilepsyBehav14Suppl1：81-85(2009)；Marchetto，M.C.，B.Winner，等人，HumMolGenet19(R1)：R71-76(2010))。当来自患有各种遗传疾病的患者的iPSC直接分化成疾病相关的细胞类型时，它们表现出疾病特异性表型(Park，I.H.等人，Cell134，877886(2008)；Tiscornia，G.等人，Naturemedicine17，1570-1576(2011))。这些疾病特异性iPSC可分化为疾病相关的细胞类型，因此可有效地用于确认疾病的特定机制或筛选治疗剂。因此，本专利技术人认识到已被用作法布里病治疗剂的Fabrazyme的问题，并试图开发能够克服这些问题的患者特异性治疗剂。同时，本专利技术人建立了一个用于使用iPSC研究法布里病的干细胞模型，并确定TSP1(血小板反应蛋白1)蛋白是法布里病血管病变的原因。此外，本专利技术人通过证实来自法布里病患者的血管内皮细胞中细胞形态的恢复、TSP1(血小板反应蛋白1)基因表达的降低、作为抗血管生成因子的TSP1蛋白和磷酸化SMAD蛋白表达水平的降低、以及作为血管生成因子的KDR(激酶插入结构域受体)蛋白和eNOS(内皮一氧化氮合酶)蛋白表达水平的增加完成了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供TSP1蛋白抑制剂用于预防或治疗法布里病的用途。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种用于预防或治疗法布里病的药物组合物，其包含TSP1(血小板反应蛋白1)基因表达抑制剂或TSP1(血小板反应蛋白1)蛋白活性抑制剂作为活性成分。本专利技术还提供了一种用于预防或改善法布里病的保健功能性食品，其包含TSP1基因表达抑制剂或TSP1蛋白活性抑制剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于预防或治疗法布里病的药物组合物，其包含TSP1(血小板反应蛋白1)基因表达抑制剂或TSP1蛋白活性抑制剂作为活性成分。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181004 KR 10-2018-01184301.一种用于预防或治疗法布里病的药物组合物，其包含TSP1(血小板反应蛋白1)基因表达抑制剂或TSP1蛋白活性抑制剂作为活性成分。


2.根据权利要求1所述的用于预防或治疗法布里病的药物组合物，其中所述TSP1基因是由SEQ.ID.NO：1表示的核苷酸序列组成的多核苷酸。


3.根据权利要求1所述的用于预防或治疗法布里病的药物组合物，其中所述TSP1基因表达抑制剂包括选自由针对构成TSP1基因的多核苷酸的反义核苷酸、siRNA(小干扰RNA)、shRNA(短发夹RNA)和核酶组成的组中的任意一种或多种。


4.根据权利要求1所述的用于预防或治疗法布里病的药物组合物，其中所述TSP1蛋白是由SEQ.ID.NO：2表示的氨基酸序列组成的多肽。


5.根据权利要求1所述的用于预防或治疗法布里病的药物组合物，其中所述TSP1蛋白活性抑制剂包括选自由与构成TSP1蛋白的多肽互补结合的化合物、肽、肽模拟物、基质类似物、适配体和抗体组成的组中的任何一种或多种。


6.一种用于预防或改善法布里病的保健功能性食品，其包含TSP1蛋白基因表达抑制剂或TSP1蛋白活性抑制剂作为活性成分。


7.一种用于法布里病的候选治疗剂的筛选方法，其包括以下步骤：
1)用试验材料处理表达TSP1蛋白的细胞系；
2)测量TSP1蛋白在细胞系中的表达水平；以及
3)选择与未用试验材料处理的对照相比，TSP1蛋白表达水平降低的试验材料。


8.根据权利要求7所述的用于法布里病的候选治疗剂的筛选方法，其中步骤1)所述的试验材料是选自由肽、蛋白质、非肽化合物、活性化合物、发酵产物、细胞提取物、植物提取物、动物组织提取物和血浆组成的组中的一种或多种物质。


9.根据权利要求7所述的用于法布里病的候选治疗剂的筛选方法，其中步骤2)所述的蛋白质表达水平通过选自由酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩龙万，都孝尙，
申请(专利权)人：韩国科学技术院，
类型：发明
国别省市：韩国;KR