一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法技术

本发明专利技术提供一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法，包括以下步骤：S1使用荧光团辅助的碳水化合物电泳鉴定具有动脉粥样硬化或发生动脉粥样硬化的受试者，以确定受试者中存在的内源性肝素的量；S2向受试者施用治疗有效剂量的肝素,根据肝素含量变化判断动脉粥样硬化程度。本发明专利技术的有益效果：使用荧光团辅助的碳水化合物测定生物样品内源性肝素的变化，用于评估动脉粥样硬化程度和评估动脉粥样硬化进展，同时还可以基于该检测方法制作提测定生物样品中肝素的试剂盒，进而对动脉粥样硬化程度进行分析判断。

【技术实现步骤摘要】
一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法
本专利技术涉及动脉粥样硬化程度检测方法
，尤其涉及一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法。
技术介绍
动脉粥样硬化是一种疾病，其特征在于内皮细胞和下面的基质细胞室的变化，其中细胞增殖和脂质填充的巨噬细胞的积累。这种疾病每年导致超过一百万美国人死亡。由于缺乏早期诊断技术，受影响但无症状的人数可能更高。在疾病过程的早期，不存在临床症状，并且患者或医生通常不会识别该疾病。到临床症状出现时，发生了大量的发病率和死亡率。冠状动脉粥样硬化性心脏病是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起血管腔狭窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病，常常被称为“冠心病”。但是冠心病的范围可能更广泛，还包括炎症、栓塞等导致管腔狭窄或闭塞。世界卫生组织将冠心病分为5大类：无症状心肌缺血(隐匿性冠心病)、心绞痛、心肌梗死、缺血性心力衰竭(缺血性心脏病)和猝死5种临床类型。临床中常常分为稳定性冠心病和急性冠状动脉综合征。控制动脉粥样硬化发作的预防技术包括身体活动，健康饮食，戒烟和体重减轻。这些干预疗法需要准确和敏感的动脉粥样硬化测量，以便能够充分评估即时和长期疗效。对动脉粥样硬化易感性的最佳测量之一是评估冠状动脉钙，尽管评估冠状动脉钙水平可以显示与风险因素高度相关的测量结果，但这些测量结果并未提供有关血栓形成事件发生率的信息。很明显，需要更准确和灵敏的方法来早期检测冠状动脉粥样硬化和冠状动脉血栓形成的风险。血液中的许多生化测量与发生动脉粥样硬化的风险增加有关。这些包括葡萄糖，脂质，脂蛋白，载脂蛋白和高胱氨酸。在评估这些新测试时，重要的是要确定它们在实践中可用于预测动脉粥样硬化的实际状况的发展，而不是用于发展动脉粥样硬化倾向的“风险因素”。由于需要将新出现的新型动脉粥样硬化治疗方法应用于高风险人群，因此对预测因素的验证非常迫切。一些医学界的专家学者推测内源性肝素水平与胆固醇和脂蛋白水平呈负相然而，以前尚未获得测量内源性肝素并将存在的水平与动脉粥样硬化程度相关联的有效方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的实施例提供了一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法。本专利技术的实施例提供一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法，包括以下步骤：S1使用荧光团辅助的碳水化合物电泳鉴定具有动脉粥样硬化或发生动脉粥样硬化的受试者，以确定受试者中存在的内源性肝素的量；使用荧光团辅助的碳水化合物测定具体方法为,取得生物样本,使所述样品中的碳水化合物与能够发荧光的部分反应，以形成碳水化合物和能发荧光的部分的缀合物,使缀合物在凝胶中进行电泳分离,将凝胶中分离的糖类电印迹到支持膜表面,使标记的探针与膜接触并测定探针与缀合物的结合亲和力；S2向受试者施用治疗有效剂量的肝素,根据肝素含量变化判断动脉粥样硬化程度。进一步地，使用选自8-氨基萘-1,3,6-三磺酸，1-氨基-6,8-的荧光团、二磺酸，1-氨基-4-萘磺酸，荧光黄和2-氨基吖啶酮进行荧光辅助碳水化合物电泳。4.如权利要求1所述的一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法，其特征在于：肝素为肝素酶修饰生物样品中的硫酸肝素。进一步地，使用荧光团辅助的碳水化合物测定具体方法还包括获取生物样品时将生色团添加到生物样品中。进一步地，使缀合物在凝胶中进行电泳分离之前向生物样品中加入酶，该酶化学改变硫酸肝素或从肝素中除去荧光标签。进一步地，修饰肝素以使肝素更易于荧光团标记。进一步地，所述步骤S2中内源性肝素的量在血浆中测定。进一步地，硫酸肝素的量的测定方法有：使用UV吸光度测量固定或可变波长型检测器定量硫酸肝素的量、或使用激光或非相干光源诱导荧光和可变或固定波长检测器定量硫酸肝素的量。进一步地，所述步骤S2中根据肝素含量变化判断动脉粥样硬化程度的结果由计算机程序存储和分析。本专利技术的实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本专利技术一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法，使用荧光团辅助的碳水化合物测定生物样品内源性肝素的变化，用于评估动脉粥样硬化程度和评估动脉粥样硬化进展，同时还可以基于该检测方法制作提测定生物样品中肝素的试剂盒，进而对动脉粥样硬化程度进行分析判断。附图说明图1是本专利技术一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法的流程图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术实施方式作进一步地描述。请参考图1，本专利技术的实施例提供了一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法，包括以下步骤：S1使用荧光团辅助的碳水化合物电泳鉴定具有动脉粥样硬化或发生动脉粥样硬化的受试者，以确定受试者中存在的内源性肝素的量。具体的：使用荧光团辅助的碳水化合物测定具体方法为,步骤S101：取得生物样本,获取生物样品时可将生色团添加到生物样品中，修饰肝素以使肝素更易于荧光团标记；步骤S102：使所述样品中的碳水化合物与能够发荧光的部分反应，以形成碳水化合物和能发荧光的部分的缀合物；步骤S103：使缀合物在凝胶中进行电泳分离,可以使用选自8-氨基萘-1,3,6-三磺酸，1-氨基-6,8-的荧光团、二磺酸，1-氨基-4-萘磺酸，荧光黄和2-氨基吖啶酮进行荧光辅助碳水化合物电泳。另外，使缀合物在凝胶中进行电泳分离之前向生物样品中加入酶，该酶化学改变硫酸肝素或从肝素中除去荧光标签。步骤S104：将凝胶中分离的糖类电印迹到支持膜表面,使标记的探针与膜接触并测定探针与缀合物的结合亲和力。特定的诊断性碳水化合物，特别是糖胺聚糖如硫酸肝素可用于确定内源性肝素产生与动脉粥样硬化斑块形成之间的不平衡。本专利技术还基于以下发现：荧光团辅助的碳水化合物电泳过程可用于确定低水平的内源性产生的肝素的存在。荧光团辅助的碳水化合物电泳使得碳水化合物的复杂混合物电泳分离成凝胶上的不同条带。在电泳之前，用荧光标记物处理用于分析的碳水化合物混合物，该标记物与碳水化合物的还原端结合用于分析。荧光团标记通过荧光来定量测量标记的碳水化合物。当荧光团本身不带电荷时，荧光团标记带电荷或与电荷赋予物质偶联。因此，标签不仅荧光标记碳水化合物，而且赋予离子电荷，允许迄今不带电的碳水化合物在电场中迁移。合适的荧光标记包括例如8-氨基萘-1；3,6-三磺酸，1-氨基-4-萘磺酸，1-氨基-6,8-二磺酸)，荧光黄和2-氨基吖啶酮。在标记碳水化合物后，随后对样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳或类似的电泳分离装置，以将标记的碳水化合物分离并浓缩成条带。可以通过U.V.下的光电菜单荧光直接观察分离的碳水化合物。灯光和条带图案以照片方式存储。或者，可以通过光电装置使分离的碳水化合物可视化，包括激光扫描仪光电倍增管系统和冷却电荷耦合装置。当进行荧光团辅助的碳水化合物电泳以确定感兴趣的碳水化合物如硫酸肝素的存在时，电泳分离应该发生到足以独立地分辨感兴趣的碳水化合物条带的程度。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法，其特征在于：包括以下步骤：/nS1使用荧光团辅助的碳水化合物电泳鉴定具有动脉粥样硬化或发生动脉粥样硬化的受试者，以确定受试者中存在的内源性肝素的量；使用荧光团辅助的碳水化合物测定具体方法为,取得生物样本,使所述样品中的碳水化合物与能够发荧光的部分反应，以形成碳水化合物和能发荧光的部分的缀合物,使缀合物在凝胶中进行电泳分离,将凝胶中分离的糖类电印迹到支持膜表面,使标记的探针与膜接触并测定探针与缀合物的结合亲和力；/nS2向受试者施用治疗有效剂量的肝素,根据肝素含量变化判断动脉粥样硬化程度。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1使用荧光团辅助的碳水化合物电泳鉴定具有动脉粥样硬化或发生动脉粥样硬化的受试者，以确定受试者中存在的内源性肝素的量；使用荧光团辅助的碳水化合物测定具体方法为,取得生物样本,使所述样品中的碳水化合物与能够发荧光的部分反应，以形成碳水化合物和能发荧光的部分的缀合物,使缀合物在凝胶中进行电泳分离,将凝胶中分离的糖类电印迹到支持膜表面,使标记的探针与膜接触并测定探针与缀合物的结合亲和力；
S2向受试者施用治疗有效剂量的肝素,根据肝素含量变化判断动脉粥样硬化程度。


2.如权利要求1所述的一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法，其特征在于：使用选自8-氨基萘-1,3,6-三磺酸，1-氨基-6,8-的荧光团、二磺酸，1-氨基-4-萘磺酸，荧光黄和2-氨基吖啶酮进行荧光辅助碳水化合物电泳。


3.如权利要求1所述的一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的方法，其特征在于：肝素为肝素酶修饰生物样品中的硫酸肝素。


4.如权利要求1所述的一种利用内源性肝素来检测动脉粥样硬化程度的...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗保平，吴朝霞，许海，
申请(专利权)人：湖北中医药大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42