荧光定量PCR检测麻疹病毒、腮腺炎病毒和/或风疹病毒的方法技术

公开了核苷酸序列，其选自：SEQ ID NO：1；SEQ ID NO：2；SEQ ID NO：3；SEQ ID NO：7；SEQ ID NO：8；SEQ ID NO：9；SEQ ID NO：16；SEQ ID NO：17；以及SEQ ID NO：18。

【技术实现步骤摘要】
荧光定量PCR检测麻疹病毒、腮腺炎病毒和/或风疹病毒的方法领域本公开大体上涉及生物
，更具体地，本公开涉及荧光定量PCR检测领域。背景麻疹、腮腺炎和风疹(以下简称“麻腮风”)是由麻疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒引起的重要病毒性传染病，上述三个疾病均为儿童急性传染病，对儿童的健康危害最大，被列入法定新发传染病名单中。据国家卫生健康委员会官方数据统计，近年来每年新发病例数合计均在二十万例以上，其中腮腺炎的占比最高。疫苗免疫是预防麻腮风的重要措施。上世纪60年代开始，随着生物技术和人们对于麻腮风的深入了解，陆续开发出相关减毒活疫苗预防该病，并取得良好的效果。由于3种疾病的接种群体和其他特性的原因，加之使用方便等原因，又进一步开发出麻腮风三联活疫苗，并占据了市场的主导地位。概述一方面，本公开涉及核苷酸序列，其选自：SEQIDNO：1；SEQIDNO：2；SEQIDNO：3；SEQIDNO：7；SEQIDNO：8；SEQIDNO：9；SEQIDNO：16；SEQIDNO：17；以及SEQIDNO：18。另一方面，本公开涉及探针，其选自：Cy5-SEQIDNO：3-BHQ2；FAM-SEQIDNO：9-BHQ2；以及VIC-SEQIDNO：18-BHQ1。再一方面，本公开涉及荧光定量PCR检测麻疹病毒的方法，其包括使用SEQIDNO：1和SEQIDNO：2作为引物，以及使用Cy5-SEQIDNO：3-BHQ2作为探针。又一方面，本公开涉及荧光定量PCR检测腮腺炎病毒的方法，其包括使用SEQIDNO：7和SEQIDNO：8作为引物，以及使用FAM-SEQIDNO：9-BHQ2作为探针。另一方面，本公开涉及荧光定量PCR检测风疹病毒的方法，其包括使用SEQIDNO：16和SEQIDNO：17作为引物，以及使用VIC-SEQIDNO：18-BHQ1作为探针。再一方面，本公开涉及荧光定量PCR检测麻疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒的方法，其包括使用SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：7、SEQIDNO：8、SEQIDNO：16和SEQIDNO：17作为引物，以及使用Cy5-SEQIDNO：3-BHQ2、FAM-SEQIDNO：9-BHQ2和VIC-SEQIDNO：18-BHQ1作为探针。又一方面，本公开涉及检测麻疹病毒的方法，其包括：采用单层接种或混种接种的方式将细胞接种麻疹病毒；用低渗PBS裂解接种后的细胞将麻疹病毒从所述接种后的细胞中释放；以及使用荧光定量PCR检测麻疹病毒，其中使用SEQIDNO：1和SEQIDNO：2作为引物，以及使用Cy5-SEQIDNO：3-BHQ2作为探针。另一方面，本公开涉及检测腮腺炎病毒的方法，其包括：采用单层接种或混种接种的方式将细胞接种腮腺炎病毒；用低渗PBS裂解接种后的细胞将腮腺炎病毒从所述接种后的细胞中释放；以及使用荧光定量PCR检测麻腮腺炎毒，其中使用SEQIDNO：7和SEQIDNO：8作为引物，以及使用FAM-SEQIDNO：9-BHQ2作为探针。再一方面，本公开涉及检测风疹病毒的方法，其包括：采用单层接种或混种接种的方式将细胞接种风疹病毒；用低渗PBS裂解接种后的细胞将风疹病毒从所述接种后的细胞中释放；以及使用荧光定量PCR检测风疹病毒，其中使用SEQIDNO：16和SEQIDNO：17作为引物，以及使用VIC-SEQIDNO：18-BHQ1作为探针。又一方面，本公开涉及检测麻疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒的方法，其包括：采用单层接种或混种接种的方式将细胞接种风疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒；用低渗PBS裂解接种后的细胞将风疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒从所述接种后的细胞中释放；以及使用荧光定量PCR检测风疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒，其中使用SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：7、SEQIDNO：8、SEQIDNO：16和SEQIDNO：17作为引物，以及使用Cy5-SEQIDNO：3-BHQ2、FAM-SEQIDNO：9-BHQ2和VIC-SEQIDNO：18-BHQ1作为探针。附图简要说明图1示出了本公开的SEQIDNO：1至SEQIDNO：24的核苷酸序列。图2示出了本公开实施例1的麻疹病毒荧光定量PCR方法建立的标准曲线图。图3示出了本公开实施例1的麻疹病毒培养时间的曲线图。图4示出了本公开实施例2的腮腺炎病毒荧光定量PCR方法建立的标准曲线图。图5示出了本公开实施例2的腮腺炎病毒培养时间的曲线图。图6示出本公开实施例3的风疹病毒荧光定量PCR方法建立的标准曲线图。图7示出了本公开实施例3的风疹病毒培养时间的曲线图。图8示出了本公开实施例4的多重荧光定量PCR方法建立的标准曲线图。图9示出了本公开实施例5的不同裂解试剂的比较曲线图。图10示出了本公开实施例6的不同接种方法的比较曲线图。详述在以下的说明中，包括某些具体的细节以对各个公开的实施方案提供全面的理解。然而，相关领域的技术人员会认识到，不采用一个或多个这些具体的细节，而采用其它方法、部件、材料等的情况下仍实现实施方案。除非本申请中另有要求，在整个说明书和所附的权利要求书中，词语“包括”、“包含”、“含有”和“具有”应解释为开放式的、含括式的意义，即“包括但不限于”。在本公开和所附权利要求书中使用时，除非上下文另有明确规定，否则不带数量指示的单数指称物包括复数指称物。在整个说明书中提到的“一实施方案”、“实施方案”、“在另一实施方案中”或“在某些实施方案中”意指在至少一实施方案中包括与该实施方案所述的相关的具体参考要素、结构或特征。因此，在整个说明书中不同位置出现的短语“在一实施方案中”或“在实施方案中”或“在另一实施方案中”或“在某些实施方案中”不必全部指同一实施方案。此外，具体要素、结构或特征可以任何适当的方式在一个或多个实施方案中结合。应当理解，在本公开的说明书和所附的权利要求书中用到的单数形式的冠词“一”(对应于英文“a”、“an”和“the”)包括复数的对象，除非文中另外明确地规定。定义在本公开中，术语“麻疹病毒(Measlesvirus，MeV)”为球形或丝形，直径约120nm至250nm，核心为单负链RNA，不分节段，基因组全长约16kb，基因组有N、P、M、F、H、L6个基因，分别编码6个结构和功能蛋白：核蛋白(nucleoprotein，NP)、磷酸化蛋白(phosphoprotein，P)、M蛋白(membraneprotein，M)、融合蛋白(fusionprotein，F)、血凝素蛋白(hemagglutinin，H)和依赖RNA的RNA聚合酶(largepolymerase，L)。核衣壳呈螺旋对称，外有包膜，表面有两种刺突，即HA和溶血素(haemolyxin，HL)，它们的成分都是糖蛋白，但性质各异。HA只能凝集猴红本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.核苷酸序列，其选自：/nSEQ ID NO：1；/nSEQ ID NO：2；/nSEQ ID NO：3；/nSEQ ID NO：7；/nSEQ ID NO：8；/nSEQ ID NO：9；/nSEQ ID NO：16；/nSEQ ID NO：17；以及/nSEQ ID NO：18。/n

【技术特征摘要】
1.核苷酸序列，其选自：
SEQIDNO：1；
SEQIDNO：2；
SEQIDNO：3；
SEQIDNO：7；
SEQIDNO：8；
SEQIDNO：9；
SEQIDNO：16；
SEQIDNO：17；以及
SEQIDNO：18。


2.探针，其选自：
Cy5-SEQIDNO：3-BHQ2；
FAM-SEQIDNO：9-BHQ2；以及
VIC-SEQIDNO：18-BHQ1。


3.荧光定量PCR检测麻疹病毒的方法，其包括使用SEQIDNO：1和SEQIDNO：2作为引物，以及使用Cy5-SEQIDNO：3-BHQ2作为探针。


4.荧光定量PCR检测腮腺炎病毒的方法，其包括使用SEQIDNO：7和SEQIDNO：8作为引物，以及使用FAM-SEQIDNO：9-BHQ2作为探针。


5.荧光定量PCR检测风疹病毒的方法，其包括使用SEQIDNO：16和SEQIDNO：17作为引物，以及使用VIC-SEQIDN0：18-BHQ1作为探针。


6.荧光定量PCR检测麻疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒的方法，其包括使用SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：7、SEQIDNO：8、SEQIDNO：16和SEQIDNO：17作为引物，以及使用Cy5-SEQIDNO：3-BHQ2、FAM-SEQIDNO：9-BHQ2和VIC-SEQIDNO：18-BHQ1作为探针。


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【专利技术属性】
技术研发人员：宋阳，李娜，张燕，宋雪，
申请(专利权)人：北京民海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11