脂氧素A4在制备治疗年龄相关性黄斑变性的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了脂氧素A4在制备治疗年龄相关性黄斑变性的药物中的应用，属于医药技术领域。本发明专利技术首次将内源性脂质介质引入年龄相关性黄斑变性的治疗领域，通过动物实验、细胞模型以及LXA4抑制RPE细胞光损伤的作用机制研究，发现了LXA4通过抑制RPE细胞光损伤干预年龄相关性黄斑变性，将为年龄相关性黄斑变性的诊断和治疗提供科学依据，不仅为年龄相关性黄斑变性的治疗提供新的治疗药物，同时也为改善和恢复视力的新疗法提供了可能的靶点。

【技术实现步骤摘要】
脂氧素A4在制备治疗年龄相关性黄斑变性的药物中的应用
本专利技术涉及脂氧素A4在制备治疗年龄相关性黄斑变性的药物中的应用，属于医药

技术介绍
AMD（age-relatedmaculardegeneration，年龄相关性黄斑变性）是导致老年人视力损伤的主要原因。目前，中国约有湿性（进展性）AMD患者260万人，在美国约有175万AMD患者。由于人口老龄化，AMD患者数量将在未来5年快速增长。在美国，每年用于治疗AMD的成本约300亿美元，而且预计该成本还将逐年上升。我国作为一个人口大国，每年约有4万人因AMD而失明，因病致盲或因病致贫的不在少数。目前AMD缺乏早期治疗的方法，仍有大量的早期AMD患者进展为湿性AMD，甚至是失明。显而易见，AMD是一个重大的公共卫生问题，且迫切需要探索预防和治疗的方法。尽管抗VEGF（vascularendothelialgrowthfactor，血管内皮生长因子）药物为治疗进展性AMD提供了新的治疗途径，但由于其价格昂贵且复发率高，因此抗VEGF药物的治疗仍不是治疗AMD的最佳方法。由于AMD发病机制复杂，尤其缺乏对其早期病变的病理生理的认识，因而探究AMD早期治疗的方法已成为现阶段研究的热点和难点。在关于AMD发病机制的众多学说中，光损伤学说和氧化应激学说是被最为广泛接受的。RPE（Retinalpigmentepithelium，视网膜色素上皮）细胞是视网膜组织的重要结构，RPE细胞的损伤被认为是AMD发生的始动因素。光损伤是RPE细胞损伤的主要原因，尽管RPE细胞的光损伤机制尚未完全明了，但是，越来越多的研究证实抑制RPE光损伤将对视网膜功能产生显著的保护作用。LXA4（脂氧素A4，lipoxinA4）是重要的抗炎抗氧化物质，其既可以通过内源性产生，亦可以通过阿司匹林诱导产生，已有研究证实LXA4可在体内多个器官中发挥抗氧化作用，然而，目前关于LXA4在眼部的作用研究甚少，尚未有文献报道其对RPE细胞的抗氧化损伤作用。本研究拟通过细胞和动物实验，验证LXA4是否对RPE细胞的光损伤有保护作用，并探索其可能的作用机制，为治疗AMD提供新的思路。
技术实现思路
为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术手段：本专利技术的第一个目的是提供脂氧素A4在制备治疗黄斑变性的药物中的应用。在本专利技术的一种实施方式中，所述黄斑变性为年龄相关性黄斑变性。本专利技术的第二个目的是提供脂氧素A4在制备抑制RPE细胞损伤或凋亡的药物中的应用。本专利技术的第三个目的是提供一种治疗年龄相关性黄斑变性的药物组合物，所述药物包括脂氧素A4，以及任选的药学可接受的载体和/或辅料。在本专利技术的一种实施方式中，药物组合物可呈选自如下的剂型：溶液、悬液、乳剂、丸剂、片剂、胶嚢、粉末、控制释放或持续释放制剂。本专利技术的第四个目的是提供一种抑制RPE细胞损伤或凋亡的药物组合物，所述药物包括脂氧素A4，以及任选的药学可接受的载体和/或辅料。在本专利技术的一种实施方式中，药物组合物可呈选自如下的剂型：溶液、悬液、乳剂、丸剂、片剂、胶嚢、粉末、控制释放或持续释放制剂。本专利技术药物组合物可根据本领域公知的方法制备，用于此目的时，如果需要，可将本专利技术化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药使用的适当的施用形式或剂量形式。经过验证可知，脂氧素A4通过激活Nrf2/ARE通路，促进Nrf2的核转位，增加下游抗氧化因子的表达，发挥抗氧化作用，从而减少RPE细胞损伤和凋亡。LXA4可改善光照或碘酸钠诱导的视网膜结构破坏，并抑制RPE细胞损伤从而干预AMD发生发展，具有潜在的临床应用前景。本专利技术首次将内源性脂质介质引入年龄相关性黄斑变性的治疗领域，LXA4干预年龄相关性黄斑变性的研究，将为年龄相关性黄斑变性的诊断和治疗提供科学依据，为进一步开发脂氧素A4治疗年龄相关性黄斑变性提供新思路。有益效果：1、LXA4在治疗年龄相关性黄斑变性中有很好的应用前景，增加研究的力度有可转化为眼用制剂的可能。2、对LXA4治疗年龄相关性黄斑变性的研究，不仅为年龄相关性黄斑变性的治疗提供新的治疗药物，同时也为改善和恢复视力的新疗法提供了可能的靶点。附图说明图1为本专利技术实施例的实验设计路线。图2为LXA4逆转蓝光辐射形成的视网膜及RPE脉络膜-巩膜复合体的形态改变。其中：A为彩色眼底图像和OCT图像；B为小鼠视网膜石蜡包埋组织H＆E染色照片；C为图B中的ONL,INL,IPL层厚度统计图；D为图B中的视网膜总厚度统计图，n=6。图3为LXA4阻止蓝光辐射形成的RPE层损伤。其中：A为小鼠视网膜组织切片亚甲蓝染色；B为小鼠视网膜组织脉络膜铺片；C为根据B图统计单位面积RPE细胞数量，n=6。图4为蓝光辐射诱导RPE细胞氧化损伤。其中：A为A2E负载的RPE细胞在蓝光暴露后不同时间点DHE染色的代表性图像；B为蓝光照射后DHE阳性细胞的定量分析；C为CCK8法检测蓝光照射后不同时间的细胞活力，n=6；D为免疫荧光法检测RPE细胞中ZO-1的表达；E为每个区域ZO-1阳性细胞的定量，n=6。图5为LXA4减轻蓝光辐射形成的RPE细胞氧化损伤。其中：A为流式细胞术检测蓝光照射后RPE细胞凋亡；B为各组RPE细胞凋亡率统计图，n=4；C为蓝光暴露后DHE染色的代表性图像；D为DHE阳性细胞数量统计，n=4；E为免疫荧光检测RPE细胞中的ZO-1紧密连接；F为ZO-1阳性细胞数量统计，n=6。图6为蓝光诱导RPE细胞中的Nrf2/HO-1通路活化。其中：A为Westernblot检测RPE细胞中HO1、NQO1、NRF2和FPRL的蛋白水平；B为WesternBlot的定量统计图，N=5；C为实时荧光定量PCR检测各组RPE细胞HO-1基因表达，N=7；D为免疫荧光分析各组RPE细胞中的Nrf2核易位；E为Nrf2核易位的定量统计，N=5；F为Westernblot检测RPE细胞胞浆和胞核的Nrf2蛋白水平；G为F图WesternBlot的统计图，N=5。图7为LXA4促进蓝光诱导的RPE细胞中Nrf2/HO1的通路。其中：A为RPE细胞中Nrf2与Keap1结合的Co-IP分析；B为Nrf2与Keap1结合作用统计图，N=3；C为Westernblot检测RPE细胞中HO-1和NQO1的Westernblot的蛋白水平；D为RPE细胞中HO-1和NQO1蛋白水平的相应定量分析，N=3；E为免疫荧光染色分析各组RPE细胞中的NRF2核易位；F为RPE细胞中Nrf2核易位的定量分析，N=6；G为EMSA检测ARE结合活性；H为RPE细胞ARE结合活性进行相应的统计学分析，N=3。图8为阻断NRF2-HO1通路逆转LXA4对蓝光诱导的RPE细胞氧化应激的保护作用；其中：A为Westernblot检测RPE细胞质中Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白水平；B为RPE细胞中Nrf2、NQO1和HO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.脂氧素A4在制备治疗黄斑变性的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.脂氧素A4在制备治疗黄斑变性的药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的脂氧素A4在制备治疗黄斑变性的药物中的应用，其特征在于，所述黄斑变性为年龄相关性黄斑变性。


3.脂氧素A4在制备抑制RPE细胞损伤或凋亡的药物中的应用。


4.根据权利要求2所述的脂氧素A4在制备抑制RPE细胞损伤或凋亡的药物中的应用，其特征在于，所述RPE细胞损伤或凋亡由光照或碘酸钠诱导产生。


5.一种治疗年龄相关性黄斑变性的药物组合物，其特征在于，所述药物包括脂氧素A4，以及任选的药学可...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢田华，王晓露，姚勇，邹建，吴美丽，杨倩，
申请(专利权)人：无锡市人民医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32