一种结核分枝杆菌抗原蛋白Rv1808及其表位肽的应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种结核分枝杆菌抗原蛋白Rv1808及其表位肽的应用。由所述Rv1808蛋白及其表位肽制备的检测试剂可广泛用于结核病的辅助诊断、流行病学监测等相关领域，Rv1808蛋白及其表位肽制备的结核疫苗和抗结核药物可用于结核病的预防和治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种结核分枝杆菌抗原蛋白Rv1808及其表位肽的应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种结核分枝杆菌抗原蛋白Rv1808及其表位肽的应用。
技术介绍
结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(MycobacteriumTuberculosis，MTB)感染引起的以呼吸道传染为主的传染病，是单因致病率最高的慢性传染性疾病。据WHO估计，全世界约有三分之一人口为结核带菌者，其中约5-10％的携带者可发展为活动性结核病。中国作为全球结核病高负担国之一，肺结核病人的数量仅次于印度而位居世界第二。因此，研发适合中国人群的结核病疫苗和新型检测方法刻不容缓。结核分枝杆菌属于胞内寄生菌，对其有效控制主要依赖于细胞免疫，其中CD8+细胞毒性T细胞(CTL)在清除结核菌中发挥着重要作用。抗原特异性CD8+CTL数量的多少和功能的强弱直接反映了人体特异性细胞免疫的功能状态，在监测疾病进程、指导治疗方案、评价临床疗效、预测疾病慢性转归以及疫苗效果评估等方面都有着不同于抗体的重要参考价值。鉴于CD8+T细胞在抗结核中发挥的重要作用，筛选中国人群高频HLA分型对应的CTL表位肽及其组合，并定期评估CTL表位肽刺激机体产生抗结核特异性CD8+T细胞的数目及功能的动态变化，在结核疫苗研制及后期疗效评估、疾病进展检测中均具有重要的意义。目前已知的结核菌CTL表位肽主要是在欧美人群中鉴定，多为HLA-A*0201限制性，而对于结核病流行最严重的非洲和东南亚人群，并没有合适的表位肽可使用。HLA-A*2402是世界上分布最广泛的HLA抗原之一，特别在亚洲人群中；然而，已发现的HLA-A*2402特异的结核菌CD8细胞表位非常少。因此，鉴定HLA-A*2402限制性CTL表位对于研发适合中国人群的表位肽疫苗具有非常重要的意义。
技术实现思路
一方面，本申请提供了结核分枝杆菌Rv1808蛋白在制备结核测试剂、疫苗和/或药物中的应用。结核分枝杆菌RV1808基因编码的PPE家族蛋白32(PPE32)蛋白属于PPE_SVP亚家族成员之一。在一些实施方案中，所述Rv1808蛋白选自SEQIDNO：5所示的序列，或将SEQIDNO：5所示的序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与SEQIDNO：5所示的序列具有相同功能的蛋白质。一方面，本申请提供了一种结核分枝杆菌的表位肽，所述表位肽选自如SEQIDNO：1-4任一所示的序列，或将SEQIDNO：1-4任一所示的序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与取代和/或缺失和/或添加前的序列具有相同功能的表位肽中的至少一种。T细胞无法识别完整的结核菌和蛋白抗原，而是识别经过抗原递呈细胞摄取和加工后释放出的结核表位肽。表位肽是抗原中引起免疫应答的核心部份，也称为抗原决定簇，它与抗原递呈细胞(APC)表面的MHC分子结合形成肽-MHC复合物并被递呈在APC细胞表面，进而活化T细胞，诱发T细胞免疫反应。CD4+T细胞识别MHC-II类分子递呈的表位肽，而CD8+T细胞识别MHC-I类分子递呈的表位肽。T细胞对表位肽的识别及其活化要求表位肽与抗原递呈细胞表面MHC分子稳定结合，而肽与MHC分子的亲和力是形成肽-MHC复合物的关键。在一些实施方案中，所述表位肽选自如SEQIDNO：1所示的序列，或将SEQIDNO：1所示的序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与SEQIDNO：1所示的序列具有相同功能的表位肽。在一些实施方案中，本申请还提供了所述的表位肽在制备结核测试剂、疫苗和/或药物中的应用。一方面，本申请提供了一种结核诊断试剂，所述诊断试剂中含有结核分枝杆菌蛋白Rv1808，或编码所述抗原蛋白Rv1808的DNA，或由含有所述DNA的重组菌产生的重组蛋白；和/或，所述表位肽，或编码所述表位肽的DNA，或由含有编码所述表位肽的DNA的重组菌产生的重组蛋白。一方面，本申请提供一种结核疫苗，其有效成分为结核分枝杆菌蛋白Rv1808，或编码所述蛋白Rv1808的DNA，或由含有所述DNA的重组菌产生的重组蛋白；和/或，所述表位肽，或编码所述表位肽的DNA，或由含有编码所述表位肽的DNA的重组菌产生的重组蛋白。一方面，本申请提供了一种检测受试者结核分枝杆菌感染的方法，包括检测对以下一个或几个选项的免疫应答：(a)Rv1808蛋白；和(b)SEQIDNO：1-4任一所示的序列。在一些实施方案中，所述方法包括检测对SEQIDNO：1所示的序列的免疫应答。在一些实施方案中，所述免疫应答为T细胞应答；在一些实施方案中，所述T细胞应答选自T细胞特异性识别MHC-抗原肽复合物、细胞因子分泌、T细胞增殖或T细胞杀伤中的至少一种；在一些实施方案中，所述T细胞特异性识别MHC-抗原肽复合物的检测方法为MHC四聚体检测；在一些实施方案中，所述细胞因子选自γ干扰素、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素10和肿瘤坏死因子α中的至少一种；所述细胞因子的检测方法选自酶联免疫斑点试验、酶联免疫吸附试验、免疫胶体金试验、细胞因子内染色和T细胞增殖试验中的至少一种；在一些实施方案中，所述T细胞增殖的检测方法选自CFSE细胞增殖实验；在一些实施方案中，所述T细胞杀伤的检测方法选自51Cr靶细胞杀伤实验。在一些实施方案中，所述检测的样本选自外周血、静脉血、脑脊液、胸腔积液或胸水中的一种或几种。本申请中的“检测”同诊断，包括结核的筛选、风险评估、预后、疾病识别、病症阶段的诊断和治疗性靶标的选择。附图说明图1为实施例2中4个表位肽在20个患者中的识别频数；图2为实施例2中ELISpot检测SEQIDNO：1IPGGWWLTF表位肽诱导结核患者T细胞分泌IFN-γ示意图图3为实施例3中MHC四聚体检测结核患者PBMC中SeqIDNo：1IPGGWWLTF特异性CD8+T细胞具体实施方式以下通过具体的实施例进一步说明本申请的技术方案，具体实施例不代表对本申请保护范围的限制。其他人根据本申请理念所做出的一些非本质的修改和调整仍属于本申请的保护范围。实施例1利用生物信息学方法，专利技术人研究分析了HLA-A*2402型MHC递呈的表位肽共计401个；对得分较高的40个表位肽利用ClassIImmunogenicity进行免疫原性分析，选出了分值较高的4个9mer肽，如表1所示。用NetMHC4.0分析表1中的4个肽与HLA-A*2402型MHC亲和力，其中SeqIDNO：1IPGGWWLTF亲和力最高(％rank0.4，BindLevel<＝SB)。表19mer肽的基本信息实施例2ELISpot实验检测实施例1中的4条表位肽诱导T细胞分泌IFN-γ。PBMC细胞分离及冻存：采用密度梯度法分离HLA-A*2402基因型结核患者外周血单核细胞(P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.结核分枝杆菌Rv1808蛋白在制备结核测试剂、疫苗和/或药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.结核分枝杆菌Rv1808蛋白在制备结核测试剂、疫苗和/或药物中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Rv1808蛋白选自SEQIDNO：5所示的序列，或
将SEQIDNO：5所示的序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与SEQIDNO：5所示的序列具有相同功能的蛋白质。


3.一种结核分枝杆菌的表位肽，其特征在于，所述表位肽选自如SEQIDNO：1-4任一所示的序列，或
将SEQIDNO：1-4任一所示的序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与取代和/或缺失和/或添加前的序列具有相同功能的表位肽中的至少一种。


4.如权利要求3所述的表位肽，其特征在于，所述表位肽选自如SEQIDNO：1所示的序列，或
将SEQIDNO：1所示的序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的且与SEQIDNO：1所示的序列具有相同功能的表位肽。


5.如权利要求3或4任一所述的表位肽在制备结核测试剂、疫苗和/或药物中的应用。


6.一种结核诊断试剂，其特征在于，所述诊断试剂中含有结核分枝杆菌蛋白Rv1808，或编码所述抗原蛋白Rv1808的DNA，或由含有所述DNA的重组菌产生的重组蛋白；和/或，
权利要求3或4任一所述表位肽，或编码所述表位肽的DNA，或由含有编码所述表...

【专利技术属性】
技术研发人员：周亮，曾庆，
申请(专利权)人：广州好芝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44