【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞内递送生物分子以增强抗原呈递细胞功能相关申请的交叉引用本申请要求2019年10月4日提交的美国临时申请号62/741,491、2019年1月18日提交的美国临时申请号62/794,518和2019年9月11日提交的美国临时申请号62/898,935的优先权。所述申请各自的内容通过引用以其整体特此并入。
本公开文本总体上涉及抗原呈递细胞，其包含增强所述抗原呈递细胞的活力和/或功能的药剂；制造此类增强的抗原呈递细胞的方法；以及使用此类增强的抗原呈递细胞的方法，如用于调节个体的免疫应答。
技术介绍
可以将免疫疗法分为两个主要干预类型，即被动干预或主动干预。被动方案包括施用预激活和/或工程化的细胞、疾病特异性治疗性抗体和/或细胞因子。主动免疫疗法策略涉及在体内刺激免疫系统效应子功能。当前几种主动方案包括使用疾病相关肽、裂解物或同种异体全细胞的疫苗接种策略；作为肿瘤抗原递送的媒介物的自体DC的输注；以及免疫检查点调节剂的输注。参见Papaioannou,NikosE.等人Annalsoftranslationalmedicine4.14(2016)。本文引用的所有参考文献(包括专利申请和出版物)均通过引用以其整体并入。
技术实现思路
在一些方面，本专利技术提供一种增强抗原呈递细胞的肿瘤归巢的方法，所述方法包括：a)使包含所述抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，...
【技术保护点】
1.一种增强抗原呈递细胞的肿瘤归巢的方法，所述方法包括：/na)使包含输入抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，使增强所述抗原呈递细胞的肿瘤归巢的药剂能够通入所述抗原呈递细胞中；以及/nb)将所述扰动的输入抗原呈递细胞与增强所述抗原呈递细胞的肿瘤归巢的所述药剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入抗原呈递细胞，从而生成增强的抗原呈递细胞。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181004 US 62/741,491;20190118 US 62/794,518;20191.一种增强抗原呈递细胞的肿瘤归巢的方法，所述方法包括：
a)使包含输入抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，使增强所述抗原呈递细胞的肿瘤归巢的药剂能够通入所述抗原呈递细胞中；以及
b)将所述扰动的输入抗原呈递细胞与增强所述抗原呈递细胞的肿瘤归巢的所述药剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入抗原呈递细胞，从而生成增强的抗原呈递细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其中增强所述抗原呈递细胞的肿瘤归巢的所述药剂上调CXCR3、CCR5、VLA-4或LFA-1中的一种或多种的表达。
3.根据权利要求2所述的方法，其中上调CXCR3、CCR5、VLA-4或LFA-1中的一种或多种的表达的所述药剂是核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述核酸是DNA、mRNA、siRNA、shRNA或miRNA。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述核酸-蛋白质复合物是具有或不具有用于同源重组的ssODN的基因编辑复合物。
6.一种增强抗原呈递细胞的活力和/或功能的方法，所述方法包括：
a)使包含输入抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，使抗凋亡剂能够通入所述抗原呈递细胞中；以及
b)将所述扰动的输入抗原呈递细胞与所述抗凋亡剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入抗原呈递细胞，从而生成增强的抗原呈递细胞。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述抗凋亡剂上调XIAP、cIAP1/2、存活蛋白、生存蛋白、cFLIP、Hsp72或Hsp90中的一种或多种的表达。
8.根据权利要求7所述的方法，其中上调XIAP、cIAP1/2、存活蛋白、生存蛋白、cFLIP、Hsp72或Hsp90中的一种或多种的表达的所述药剂是核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述核酸是DNA、mRNA、siRNA、shRNA或miRNA。
10.根据权利要求8所述的方法，其中所述核酸-蛋白质复合物是具有或不具有用于同源重组的ssODN的基因编辑复合物。
11.一种增强抗原呈递细胞的功能的方法，所述方法包括：
a)使包含输入抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，使增强抗原加工的药剂能够通入所述抗原呈递细胞中；以及
b)将所述扰动的输入抗原呈递细胞与增强抗原加工的所述药剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入抗原呈递细胞，从而生成增强的抗原呈递细胞。
12.根据权利要求11所述的方法，其中增强抗原加工的所述药剂上调LMP2、LMP7、MECL-1或β5t中的一种或多种的表达。
13.根据权利要求12所述的方法，其中上调LMP2、LMP7、MECL-1或β5t中的一种或多种的表达的所述药剂是核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述核酸是DNA、mRNA、siRNA、shRNA或miRNA。
15.根据权利要求13所述的方法，其中所述核酸-蛋白质复合物是具有或不具有用于同源重组的ssODN的基因编辑复合物。
16.一种增强抗原呈递细胞的功能的方法，所述方法包括：
a)使包含输入抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，使增强抗原加工和/或加载至MHC分子上的药剂能够通入所述抗原呈递细胞中；以及
b)将所述扰动的输入抗原呈递细胞与增强抗原加工和/或加载至MHC分子上的所述药剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入抗原呈递细胞，从而生成增强的抗原呈递细胞。
17.根据权利要求16所述的方法，其中增强抗原加工和/或加载至MHC分子上的所述药剂上调TAP、泰帕森、ERAAP、钙网蛋白、Erp57或PDI中的一种或多种的表达。
18.根据权利要求17所述的方法，其中上调TAP、泰帕森、ERAAP、钙网蛋白、Erp57或PDI中的一种或多种的表达的所述药剂是核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述核酸是DNA、mRNA、siRNA、shRNA或miRNA。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述核酸-蛋白质复合物是具有或不具有用于同源重组的ssODN的基因编辑复合物。
21.一种调节抗原呈递细胞的免疫活性的方法，所述方法包括：
a)使包含输入抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，使调节免疫活性的药剂能够通入所述抗原呈递细胞中；以及
b)将所述扰动的输入抗原呈递细胞与调节免疫活性的所述药剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入抗原呈递细胞，从而生成增强的抗原呈递细胞。
22.根据权利要求21所述的方法，其中调节免疫活性的所述药剂上调I型干扰素、II型干扰素或III型干扰素中的一种或多种的表达。
23.根据权利要求22所述的方法，其中上调I型干扰素、II型干扰素或III型干扰素中的一种或多种的表达的所述药剂是核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述核酸是DNA、mRNA、siRNA、shRNA或miRNA。
25.根据权利要求21所述的方法，其中调节免疫活性的所述药剂下调干扰素β的表达。
26.根据权利要求25所述的方法，其中下调干扰素β的表达的所述药剂是核酸、蛋白质、肽、核酸-蛋白质复合物或小分子。
27.根据权利要求23所述的方法，其中所述核酸是DNA、mRNA、siRNA、shRNA或miRNA。
28.根据权利要求23所述的方法，其中所述核酸-蛋白质复合物是具有或不具有用于同源重组的ssODN的基因编辑复合物。
29.一种增强抗原呈递细胞的活力的方法，所述方法包括：
a)使包含输入抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，使增强所述抗原呈递细胞的活力的药剂能够通入所述抗原呈递细胞中；以及
b)将所述扰动的输入抗原呈递细胞与增强所述抗原呈递细胞的活力的所述药剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入抗原呈递细胞，从而生成增强的抗原呈递细胞。
30.根据权利要求29所述的方法，其中增强所述抗原呈递细胞的活力的所述药剂上调丝氨酸蛋白酶抑制蛋白的表达。
31.根据权利要求30所述的方法，其中上调丝氨酸蛋白酶抑制蛋白的表达的所述药剂是核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述核酸是DNA、mRNA、siRNA、shRNA或miRNA。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述核酸-蛋白质复合物是具有或不具有用于同源重组的ssODN的基因编辑复合物。
34.一种增强抗原呈递细胞的功能的方法，所述方法包括：
a)使包含输入抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，使增强归巢和/或触发选择性归巢的药剂能够通入所述抗原呈递细胞中；以及
b)将所述扰动的输入抗原呈递细胞与增强归巢和/或触发选择性归巢的所述药剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入抗原呈递细胞，从而生成增强的抗原呈递细胞。
35.根据权利要求34所述的方法，其中增强归巢和/或触发选择性归巢的所述药剂上调CCL2的表达。
36.根据权利要求35所述的方法，其中上调CCL2的表达的所述药剂是核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物。
37.根据权利要求34所述的方法，其中增强归巢和/或触发选择性归巢的所述药剂上调CD62L、CCR2、CCR7、CX3CR1或CXCR5中的一种或多种的表达。
38.根据权利要求37所述的方法，其中上调CD62L、CCR2、CCR7、CX3CR1或CXCR5中的一种或多种的表达的所述药剂包含核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物中的一种或多种。
39.根据权利要求37或38所述的方法，其中所述药剂增强所述增强的抗原呈递细胞归巢至淋巴结。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述抗原呈递细胞是树突细胞。
41.根据权利要求36和38-40中任一项所述的方法，其中所述核酸是DNA、mRNA、siRNA、shRNA或miRNA。
42.根据权利要求36和38-40中任一项所述的方法，其中所述核酸-蛋白质复合物是具有或不具有用于同源重组的ssODN的基因编辑复合物。
43.一种增强抗原呈递细胞的活力和/或功能的方法，所述方法包括：
a)使包含输入抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，使激活T细胞的药剂能够通入所述抗原呈递细胞中；以及
b)将所述扰动的输入抗原呈递细胞与激活T细胞的所述药剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入抗原呈递细胞，从而生成增强的抗原呈递细胞。
44.根据权利要求43所述的方法，其中激活T细胞的所述药剂上调CD27、CD28、CD40、CD122、4-1BB(CD137)、OX40(CD134)/OX40L(CD252)、GITR或ICOS中的一种或多种的表达。
45.根据权利要求44所述的方法，其中上调CD27、CD28、CD40、CD122、4-1BB(CD137)、OX40(CD134)/OX40L(CD252)、GITR或ICOS中的一种或多种的表达的所述药剂是核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物。
46.根据权利要求43所述的方法，其中激活T细胞的所述药剂上调CD70、CD80、CD86、CD40L、4-1BBL(CD137L)、OX40L(CD252)、GITRL或ICOSL中的一种或多种的表达。
47.根据权利要求46所述的方法，其中上调CD70、CD80、CD86、CD40L、4-1BBL(CD137L)、OX40L(CD252)、GITRL或ICOSL中的一种或多种的表达的所述药剂是核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物。
48.根据权利要求45或47所述的方法，其中所述核酸是DNA、mRNA、siRNA、shRNA或miRNA。
49.根据权利要求45或47所述的方法，其中所述核酸-蛋白质复合物是具有或不具有用于同源重组的ssODN的基因编辑复合物。
50.一种增强抗原呈递细胞的活力和/或功能的方法，所述方法包括：
a)使包含输入抗原呈递细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入抗原呈递细胞的直径而变，从而引起所述输入抗原呈递细胞的扰动，所述扰动足够大，使下调T细胞抑制的药剂能够通入所述抗原呈递细胞中；以及
b)将所述扰动的输入抗原呈递细胞与下调T细胞抑制的所述药剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入抗原呈递细胞，从而生成增强的抗原呈递细胞。
51.根据权利要求50所述的方法，其中下调T细胞抑制的所述药剂下调LAG3、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA中的一种或多种的表达。
52.根据权利要求51所述的方法，其中下调LAG3、VISTA、TIM1、B7-H4(VTCN1)或BTLA中的一种或多种的表达的所述药剂是核酸、蛋白质、肽、核酸-蛋白质复合物或小分子。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述核酸是siRNA、shRNA或miRNA。
54.根据权利要求52所述的方法，其中所述核酸-蛋白质复合物是具有或不具有用于同源重组的ssODN的基因编辑复合物。
55.一种促进来自单核细胞或单核细胞-树突祖细胞的DC形成的方法，所述方法包括：
a)使包含输入单核细胞或单核细胞-树突祖细胞的细胞悬浮液通过细胞变形缩窄部，其中所述缩窄部的直径随所述悬浮液中输入单核细胞或单核细胞-树突祖细胞的直径而变，从而引起所述输入单核细胞的扰动，所述扰动足够大，使促进DC形成的药剂能够通入所述单核细胞或单核细胞-树突祖细胞中；以及
b)将所述扰动的输入单核细胞与促进DC形成的所述药剂一起孵育足够时间，以允许所述药剂进入所述扰动的输入单核细胞或单核细胞-树突祖细胞。
56.根据权利要求55所述的方法，其中促进DC形成的所述药剂上调PU.1、Flt3、Flt3L或GMCSF中的一种或多种的表达。
57.根据权利要求56所述的方法，其中上调PU.1、Flt3、Flt3L或GMCSF中的一种或多种的表达的所述药剂是核酸、蛋白质或核酸-蛋白质复合物。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述核酸是DNA、mRNA、siRNA、shRNA或miRNA。
5...
【专利技术属性】
技术研发人员：H·伯恩斯坦，M·布蒂，L·卡塞罗，J·周，K·赫拉瓦蒂，S·洛克希德，M·麦因特，S·萨奥尔，A·索尔，V·维贾古玛，
申请(专利权)人：SQZ生物技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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