新型冠状病毒（COVID-19）中和抗体检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒(COVID‑19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，包括：检测卡，所述检测卡包括卡壳及设置于所述卡壳中的试纸条，所述试纸条包括样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫及背衬板，所述荧光结合垫上包含检测线荧光偶合物和质控线荧光偶合物，检测线荧光偶合物为荧光微球标记的重组新型冠状病毒棘突糖蛋白(RBD)，硝酸纤维素膜上包被有血管紧张素转化酶2(ACE2)构成的检测线，所述硝酸纤维素膜上还包被有IgY、IgG或DNP抗体构成的质控线。该试剂盒通过与荧光免疫分析仪结合，进行对样本的检测，该试剂盒检验灵敏度高、重现性好、稳定性强、操作便捷。

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒及检测方法
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
新型冠状病毒(COVID-19)有四种主要的结构蛋白：棘突蛋白(Spikeprotein，S蛋白)，核衣壳蛋白(Nucleocapsid，N蛋白)，膜蛋白(Membraneprotein，M蛋白)，包膜蛋白(Envelopeprotein，E蛋白)。棘突蛋白S蛋白有两个亚基：S1和S2，其中受体结合结构域(RBD)位于S1亚基上。RBD是棘突蛋白抗原的独特区域，可与人类的ACE2受体结合，COVID-19通过RBD与ACE-2受体的结合，介导病毒进入细胞内部繁殖，从而出现症状，导致发病。新冠病毒中和抗体可以特异性识别并且结合新冠病毒的RBD位点，在血液中和病毒结合，抢先阻断病毒与人ACE-2结合，从而防止病毒进入细胞繁殖产生症状。对新冠病毒中和抗体检测可以为疫苗研发和效果评价提供有力支撑，可以指导检测人群是否需要加强针、加强接种等。当然，新冠病毒中和抗体检测结果仅供临床参考，不能单独作为诊断或排除病例的依据。目前，常规的抗体检测(IgG、IgM)方法不能用于新冠疫苗接种人群中和抗体的检测问题。对新冠中和抗体的检测的主要可分为胶体金、免疫荧光法(层析法，LFA)，酶联免疫吸附检测(ELISA)和化学发光法。其中胶体金法和免疫荧光法的灵敏度和精密度较差，准确度低，容易受到其他杂光的干扰。ELISA和化学发光法具有更高的检测灵敏性和特异性，但操作复杂、耗时长、需要大型设备和专业操作人员，在灵活性、使用便捷性、检测及时性上存在不足，而且相关试剂需要冷藏保存，在运输及保存条件上要求较高。CN112051400A公开了一种POCT检测中的胶体金技术，其试纸条上包被鼠抗人IgG抗体的检测线和羊抗鼠IgG抗体的控制线，结合垫上喷涂标记有鼠IgG、新冠病毒RBD或NTD中和位点蛋白的胶体金，通过与胶体金免疫分析读数仪结合，进行待测物含量的检测。此测试方法准确性及灵敏度较差，精密度较难控制。CN112485436A公开了一种POCT检测中的胶体金技术，其试纸条上包被血管紧张素转化酶2(ACE2)的检测线和鼠抗鸡IgG抗体的控制线，胶体金垫上喷涂标记有胶体金标记的重组新型冠状病毒RBD蛋白，通过肉眼观察检测线显色情况判断是否含有待测物。此该方法只能进行定性检测，不能进行定量检测，不能为临床提供较多的检测信息。因此，在POCT检测新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体领域，仍需开发一种检验灵敏度高、重现性好、稳定性强、操作便捷的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种检验灵敏度高、重现性好、稳定性强、操作便捷的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒及检测方法。为实现上述目的，本专利技术提供了一种新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，采取以下技术方案：一种新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，包括检测卡，所述检测卡包括卡壳及设置于所述卡壳中的试纸条，所述试纸条包括样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫及背衬板，所述样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接粘贴在所述背衬板上，所述荧光结合垫上包含检测线荧光偶合物和质控线荧光偶合物，检测线荧光偶合物为荧光微球标记的重组新型冠状病毒棘突糖蛋白(RBD)，所述硝酸纤维素膜上包被有血管紧张素转化酶2(ACE2)构成的检测线,所述硝酸纤维素膜上还包被有IgY、IgG或DNP抗体构成的质控线，所述卡壳上设有加样孔和观察窗。进一步的，所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述质控线荧光偶合物为荧光微球标记的鸡IgY抗体、兔IgG抗体、鼠IgG抗体或DNP抗体中的一种。进一步的，所述检测线血管紧张素转化酶2(ACE2)的浓度为0.5-2mg/mL，所述质控线为鸡IgY，或兔IgG抗体或鼠IgG抗体、BSA-DNP中的一种抗体，浓度为0.5-1mg/mL，包被量均为0.5-2μL/cm。进一步的，所述试剂盒还包括样品稀释液，所述样品稀释液包括10mM-20mM的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液、浓度为0.1％-1％的表面活性剂和浓度为0.01％-0.05％的防腐剂，所述表面活性剂选自吐温20或曲拉通x-100，所述防腐剂选自proclin300、山梨酸或苯甲酸中的一种。进一步的，所述荧光微球为时间分辨荧光微球，所述时间分辨荧光微球表面修饰有氨基、羧基或羟基中至少一种功能基团，所述时间分辨荧光微球内部包埋镧系元素离子，所述镧系元素选自Sm钐、Eu铕、Gd钆、Tb铽、Dy镝中的至少一种。进一步的，所述新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒还包括ID卡，所述ID卡存储有产品的项目名称、批号等信息。进一步的，所述荧光结合垫的材质为玻璃纤维、无纺布或聚酯膜中的至少一种，所述材质经过结合垫预处理液浸泡，置于鼓风干燥箱烘干，再采用偶合物稀释液将荧光微球标记的新型冠状病毒棘突糖蛋白(RBD)和荧光微球标记的鸡IgY多克隆抗体稀释，荧光微球标记的新型冠状病毒棘突糖蛋白(RBD)稀释5-20倍，荧光微球标记的鸡IgY多克隆抗体稀释20-200倍，稀释并混合后，均匀喷涂至已处理的材质上，置于鼓风干燥箱烘干。进一步的，所述结合垫预处理液含有缓冲液、保护蛋白、糖类、表面活性剂；所述缓冲液选自磷酸盐、硼酸盐或Tris缓冲液中至少一种，浓度为10mM-50mM；所述保护蛋白选自牛血清白蛋白，卵清蛋白或酪蛋白中的至少一种，浓度为0.1％-3％；所述糖类选自海藻糖、蔗糖、乳糖中的至少一种，浓度为0.1％-10％；所述表面活性剂选自曲拉通x-100、吐温20、S16、S9中的至少一种，浓度为0.1％-1％。进一步的，所述偶合物稀释液含有缓冲液、保护蛋白、糖类、表面活性剂、防腐剂；所述缓冲液选自磷酸盐、硼酸盐或Tris缓冲液中至少一种，浓度为10mM-50mM；所述保护蛋白选自牛血清白蛋白，卵清蛋白或酪蛋白中的至少一种，浓度为0.1％-3％；所述糖类选自海藻糖、蔗糖、乳糖中的至少一种，浓度为0.1％-10％。所述表面活性剂选自曲拉通x-100、吐温20、S16、S9中的至少一种，浓度为0.1％-1％；所述防腐剂选自山梨酸、苯甲酸或proclin300中的至少一种，浓度为0.01％-0.1％。进一步的，一种用于检测新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体的荧光免疫定性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)启动仪器：开启荧光免疫分析仪，仪器进入初始界面；2)准备：将包装盒内ID卡插入ID卡端口，并点击“读ID”，确认ID卡与检测试剂卡的批号相匹配；3)加样：用加样枪吸取待测样本(血清、血浆、全血)20μL，加入到一管样品稀释液中，混匀。取80μL混合液至检测卡上的样本孔内；<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，包括检测卡，所述检测卡包括卡壳及设置于所述卡壳中的试纸条，所述试纸条包括样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫及背衬板，所述样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接粘贴在所述背衬板上，所述荧光结合垫上包含检测线荧光偶合物和质控线荧光偶合物，检测线荧光偶合物为荧光微球标记的重组新型冠状病毒棘突糖蛋白(RBD)，所述硝酸纤维素膜上包被有血管紧张素转化酶2(ACE2)构成的检测线,所述硝酸纤维素膜上还包被有IgY、IgG或DNP抗体构成的质控线，所述卡壳上设有加样孔和观察窗。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，包括检测卡，所述检测卡包括卡壳及设置于所述卡壳中的试纸条，所述试纸条包括样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫及背衬板，所述样品垫、荧光结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接粘贴在所述背衬板上，所述荧光结合垫上包含检测线荧光偶合物和质控线荧光偶合物，检测线荧光偶合物为荧光微球标记的重组新型冠状病毒棘突糖蛋白(RBD)，所述硝酸纤维素膜上包被有血管紧张素转化酶2(ACE2)构成的检测线,所述硝酸纤维素膜上还包被有IgY、IgG或DNP抗体构成的质控线，所述卡壳上设有加样孔和观察窗。


2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述质控线荧光偶合物为荧光微球标记的鸡IgY抗体、兔IgG抗体、鼠IgG抗体或DNP抗体中的一种。


3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测线血管紧张素转化酶2(ACE2)的浓度为0.5-2mg/mL，所述质控线为鸡IgY，或兔IgG抗体或鼠IgG抗体、BSA-DNP中的一种抗体，浓度为0.5-1mg/mL，包被量均为0.5-2μL/cm。


4.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样品稀释液，所述样品稀释液包括10mM-20mM的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液、浓度为0.1％-1％的表面活性剂和浓度为0.01％-0.05％的防腐剂，所述表面活性剂选自吐温20或曲拉通x-100，所述防腐剂选自proclin300、山梨酸或苯甲酸中的一种。


5.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述荧光微球为时间分辨荧光微球，所述时间分辨荧光微球表面修饰有氨基、羧基或羟基中至少一种功能基团，所述时间分辨荧光微球内部包埋镧系元素离子，所述镧系元素选自Sm钐、Eu铕、Gd钆、Tb铽、Dy镝中的至少一种。


6.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒还包括ID卡，所述ID卡存储有产品的项目名称、批号等信息。


7.根据权利要求6所述的新型冠状病毒(COVID-19)中和抗体检测试剂盒，其特征在于，所述荧光结合垫的材质为玻璃纤维、无纺布或聚酯膜中的至少一种，所述材质经过结合垫预处理液浸泡，置于鼓风干...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈雪，肖宇强，陈粤秀，张平，
申请(专利权)人：深圳市爱康试剂有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44