一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺制造技术

本申请涉及微生物发酵领域，更具体地说，它涉及一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺，包括如下步骤：步骤（1）、制备菌液：分别制备多粘类芽孢杆菌液、酵母菌液、嗜热链球菌液；步骤（2）、融合共生发酵：往发酵设备中加入发酵培养基，控制发酵培养基pH值、温度，边搅拌发酵培养基边加入多粘类芽孢杆菌液，继续搅拌发酵；然后控制体系pH值、温度，边搅拌边加入酵母菌液，继续搅拌发酵；再控制体系pH值、温度，边搅拌边加入嗜热链球菌液，继续搅拌发酵，制得多菌融合共生发酵液。本申请的多菌融合共生发酵工艺，将促生的根际益生菌和抗病的根际益生菌的混合发酵，降低菌剂的生产成本，菌群多样，对环境适应能力强，应用范围广泛。

【技术实现步骤摘要】
一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺
本申请涉及微生物发酵领域，更具体地说，它涉及一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺。
技术介绍
在自然生态系统中，不同微生物间在生存空间和养分需求上相互制约平衡。而在土壤环境中，人为地施肥用药干预，破坏了原有的微生物种类和数量，打破平衡，使作物的病原菌生物量增加，从而导致了土传病害及细菌真菌性病害的发生，继而对植物的生长、产量、质量产生影响。而目前的技术中有通过人为地添加植物根际有益微生物，改变微生物的群落系统，起到抑制病原菌，对植物起到促生抗逆的作用。目前植物根际有益微生物的常规发酵工艺采用分批发酵或补料分批发酵，通过这种工艺生产制得的微生物菌剂中菌种比较单一，单一的菌株由于代谢类型、呼吸类型及作用功能都较为单一，对环境适应能力弱，很难形成优势菌群，在后期作为微生物菌剂时通常需要进行合理复配菌剂。针对上述的相关技术，专利技术人认为目前分批发酵或补料分批发酵制得的菌种单一，后期作为微生物菌剂时需要复配添加，使得发酵工艺成本高，使用工序复杂。
技术实现思路
为了解决目前发酵工艺制得的菌落单一、工艺成本高的问题，本申请提供一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺。本申请提供的一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺，采用如下的技术方案：一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺，包括如下步骤：步骤(1)、制备菌液：将活化后的多粘类芽孢杆菌接入至培养基A中，摇匀、培养，制得多粘类芽孢杆菌液；将活化后的酵母菌接入至培养基B中，摇匀、培养，制得酵母菌液；将活化后的嗜热链球菌接入至培养基C中，摇匀、培养，制得嗜热链球菌液；步骤(2)、融合共生发酵：往发酵设备中加入发酵培养基，控制发酵培养基pH值为7.0-7.2、温度为35-37℃，边搅拌发酵培养基边加入多粘类芽孢杆菌液，继续搅拌，发酵24-36h后得到发酵液A；然后控制体系pH值为6.0-6.5、温度为35-37℃，边搅拌发酵液A边加入酵母菌液，继续搅拌，发酵45-50h后得到发酵液B；再控制体系pH值为5.0-5.5、温度为30-32℃，边搅拌发酵液B边加入嗜热链球菌液，继续搅拌，发酵3-4天后得到多菌融合共生发酵液。本申请采用上述多菌融合共生发酵工艺，将促生的根际益生菌和抗病的根际益生菌的混合发酵，一次性投入、一次性产出，改变传统的分批发酵工艺，降低菌剂的生产成本，且混合生产制得的菌群多样，对环境适应能力强，解决了传统分批发酵工序菌株及效果较为单一的问题，应用范围广泛，缩短作为微生物菌剂使用时的处理工序，对植物起到抗病促生的作用。其中，多粘类芽孢杆菌以芽孢形式存在，耐温性好，质量稳定，“以菌治菌”，药效持久，“药肥兼能”，不仅是防治青枯病、枯萎病、根腐病、软腐病等土传病害的理想药剂，而且具有明显的促进生长、提高产量、改善品质的作用，无药害和残留，是无公害、绿色、有机蔬菜生产的首选微生物制剂。酵母菌及嗜热链球菌可以促进作物生长，分泌代谢活性物质，刺激作物生长发育，调节作物平衡，吸收营养，诱导抗性基因的表达，增加作物的抗病抗逆能力，促进有效物质合成，改善农产品的品质等功能。通过上述多菌融合共生发酵工艺，将多粘类芽孢杆菌、酵母菌及嗜热链球菌混合发酵，并控制每种菌落加入前的体系条件参数，使制得的混合发酵菌剂可以改善土壤菌群平衡，三种菌株通过协同培养共生发酵，一方面为复合型菌种的规模化生产提供了可行的发酵培养工艺，另一方面提高了各菌株的协同效应，提高植物的抗御病虫害作用，并能促进根系生长，提高作物的抗逆性。最后多菌种混合发酵至多菌融合共生发酵液中多粘类芽孢杆菌的活菌数大于20亿/mL，酵母菌液的活菌数大于20亿/mL，嗜热链球菌液的活菌数大于20亿/mL，则停罐，停止发酵。优选的，所述步骤(1)中，培养基A通过如下步骤制得：称取1-5g牛肉膏、8-12g蛋白胨、3-8g氯化钠和15-25g琼脂，加入至蒸馏水中，混合均匀，并补充蒸馏水至体系为1000mL，调节pH值至7.0-7.3，然后在温度为118-123℃、压强为0.08-0.12MPa的条件下灭菌28-32min，制得培养基A。通过上述物料混合制备培养基A，为多粘类芽孢杆菌提供培养养分，多粘类芽孢杆菌接种至培养基A后，摇瓶培养，接种之后每两个小时进行一次生长曲线OD600的检测，绘制生长曲线，达到对数生长期中期或后期，即多粘类芽孢杆菌液达到了接种至发酵罐的标准。而培养基A在接种多粘类芽孢杆菌前，在高温及压力下灭菌处理，减少其他菌种或微生物对多粘类芽孢杆菌培养造成影响，保证培养的菌种洁净、单一。优选的，所述步骤(1)中，培养基B通过如下步骤制得：称取180-220g土豆滤液、18-22g葡萄糖和15-25g琼脂，加入至蒸馏水中，混合均匀，并补充蒸馏水至体系为1000mL，然后在温度为118-123℃、压强为0.08-0.12MPa的条件下灭菌28-32min，制得培养基B。通过上述物料混合制备培养基B，为酵母菌提供培养养分，酵母菌接种至培养基B后，摇瓶培养，接种之后每两个小时进行一次生长曲线OD600的检测，绘制生长曲线，达到对数生长期中期或后期，即酵母菌液达到了接种至发酵罐的标准。而培养基B在接种酵母菌前，在高温及压力下灭菌处理，减少其他菌种或微生物对酵母菌培养造成影响，保证培养的菌种洁净、单一。其中，所述土豆滤液是将土豆蒸熟后，过滤得到的滤液。优选的，所述步骤(1)中，培养基C通过如下步骤制得：称取8-12g蛋白胨、8-12g牛肉浸取物、3-8g酵母提取物、18-22g葡萄糖、3-8g乙酸钠、1-3g柠檬酸二胺、0.8-1.2g吐温-80、1.5-2.5g磷酸氢二钾、0.5-0.6g硫酸镁、0.20-0.30g硫酸锰、18-22g碳酸钙和15-25g琼脂，加入至蒸馏水中，混合均匀，并补充蒸馏水至体系为1000mL，然后在温度为118-123℃、压强为0.08-0.12MPa的条件下灭菌28-32min，制得培养基C。通过上述物料混合制备培养基C，为嗜热链球菌提供培养养分，嗜热链球菌接种至培养基C后，摇瓶培养，接种之后每两个小时进行一次生长曲线OD600的检测，绘制生长曲线，达到对数生长期中期或后期，即嗜热链球菌液达到了接种至发酵罐的标准。而培养基C在接种嗜热链球菌前，在高温及压力下灭菌处理，减少其他菌种或微生物对嗜热链球菌培养造成影响，保证培养的菌种洁净、单一。优选的，所述步骤(2)中，发酵培养基通过如下步骤制得：称取1-3g红糖、1-3g玉米淀粉、1.5-2.5g磷酸二氢钾、8-12g蛋白胨、3-8g酵母粉、1-5g牛肉膏、18-22g葡萄糖、1-2g微量元素、1-2g生长因子、1-2g维生素加入至蒸馏水中，混合均匀，并补充蒸馏水至体系为1000mL，然后在温度为115-125℃、压力为0.10-0.15MPa的条件下蒸汽灭菌30-40min，制得发酵培养基。通过上述物料混合制备发酵培养基，为多粘类芽孢杆菌、酵母菌、嗜热链球菌提供充足的发酵养分，且发酵培养基先本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺，其特征在于：包括如下步骤：/n步骤（1）、制备菌液：将活化后的多粘类芽孢杆菌接入至培养基A中，摇匀、培养，制得多粘类芽孢杆菌液；将活化后的酵母菌接入至培养基B中，摇匀、培养，制得酵母菌液；将活化后的嗜热链球菌接入至培养基C中，摇匀、培养，制得嗜热链球菌液；/n步骤（2）、融合共生发酵：往发酵设备中加入发酵培养基，控制发酵培养基pH值为7.0-7.2、温度为35-37℃，边搅拌发酵培养基边加入多粘类芽孢杆菌液，继续搅拌，发酵24-36h后得到发酵液A；然后控制体系pH值为6.0-6.5、温度为35-37℃，边搅拌发酵液A边加入酵母菌液，继续搅拌，发酵45-50h后得到发酵液B；再控制体系pH值为5.0-5.5、温度为30-32℃，边搅拌发酵液B边加入嗜热链球菌液，继续搅拌，发酵3-4天后得到多菌融合共生发酵液。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺，其特征在于：包括如下步骤：
步骤（1）、制备菌液：将活化后的多粘类芽孢杆菌接入至培养基A中，摇匀、培养，制得多粘类芽孢杆菌液；将活化后的酵母菌接入至培养基B中，摇匀、培养，制得酵母菌液；将活化后的嗜热链球菌接入至培养基C中，摇匀、培养，制得嗜热链球菌液；
步骤（2）、融合共生发酵：往发酵设备中加入发酵培养基，控制发酵培养基pH值为7.0-7.2、温度为35-37℃，边搅拌发酵培养基边加入多粘类芽孢杆菌液，继续搅拌，发酵24-36h后得到发酵液A；然后控制体系pH值为6.0-6.5、温度为35-37℃，边搅拌发酵液A边加入酵母菌液，继续搅拌，发酵45-50h后得到发酵液B；再控制体系pH值为5.0-5.5、温度为30-32℃，边搅拌发酵液B边加入嗜热链球菌液，继续搅拌，发酵3-4天后得到多菌融合共生发酵液。


2.根据权利要求1所述的一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺，其特征在于：所述步骤（1）中，培养基A通过如下步骤制得：称取1-5g牛肉膏、8-12g蛋白胨、3-8g氯化钠和15-25g琼脂，加入至蒸馏水中，混合均匀，并补充蒸馏水至体系为1000mL，调节pH值至7.0-7.3，然后在温度为118-123℃、压强为0.08-0.12MPa的条件下灭菌28-32min，制得培养基A。


3.根据权利要求1所述的一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺，其特征在于：所述步骤（1）中，培养基B通过如下步骤制得：称取180-220g土豆滤液、18-22g葡萄糖和15-25g琼脂，加入至蒸馏水中，混合均匀，并补充蒸馏水至体系为1000mL，然后在温度为118-123℃、压强为0.08-0.12MPa的条件下灭菌28-32min，制得培养基B。


4.根据权利要求1所述的一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺，其特征在于：所述步骤（1）中，培养基C通过如下步骤制得：称取8-12g蛋白胨、8-12g牛肉浸取物、3-8g酵母提取物、18-22g葡萄糖、3-8g乙酸钠、1-3g柠檬酸二胺、0.8-1.2g吐温-80、1.5-2.5g磷酸氢二钾、0.5-0.6g硫酸镁、0.20-0.30硫酸锰、18-22g碳酸钙和15-25g琼脂，加入至蒸馏水中，混合均匀，并补充蒸馏水至体系为1000mL，然后在温度为118-123℃、压强为0.08-0.12MPa的条件下灭菌28-32min，制得培养基C。


5.根据权利要求1所述的一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺，其特征在于：所述步骤（2）中，发酵培养基通过如下步骤制得：称取1-3g红糖、1-3g玉米淀粉、1.5-2.5g磷酸二氢钾、8-12g蛋白胨、3-8g酵母粉、1-5g牛肉膏、18-22g葡萄糖、1-2g微量元素、1-2g生长因子、1-2g维生素加入至蒸馏水中，混合均匀，并补充蒸馏水至体系为1000mL，然后在温度为115-125℃、压力为0.10-0.15MPa的条件下蒸汽灭菌30-40min，制得发酵培养基。


6.根据权利要求1所述的一种用于抗病促生的多菌融合共生发酵工艺，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨建国，赵猛，屈峰，
申请(专利权)人：山东黎昊源生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37