新的人C型外源凝集素样受体、其编码序列及用途制造技术

本发明专利技术涉及了一种新型Ｃ型外源凝集素样受体。本发明专利技术提供编码此蛋白分子的多核苷酸和经重组技术产生这种蛋白分子的方法。本发明专利技术还公开了编码这种新型Ｃ型外源凝集素样受体分子的多核苷酸的用途。本发明专利技术还公开了此种蛋白分子在人自然杀伤细胞表面表达的特征。本发明专利技术还公开了抗此蛋白分子的拮抗剂及其治疗作用，特别是可用于肿瘤的治疗。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和医学领域，具体地说，本专利技术涉及新的编码人C型外源凝集素样受体(C lectin-like molecule，简称为“CLL-1”)的多核苷酸，以及此多核苷酸编码的多肽。这种受体为Ⅱ型穿膜糖蛋白，在自然杀伤细胞(natural killer cell，NK细胞)上表达。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的用途和制备。具体地说，本专利技术的多肽是一种新的与肿瘤和病毒感染的治疗有关的细胞表面分子。NK细胞是淋巴细胞的一种，主要存在于血液和淋巴样组织中，能对肿瘤细胞和病毒感染的细胞进行杀伤。由于NK细胞无特异性抗原识别受体，这种杀伤是非特异性的。近年的研究表明，NK细胞的杀伤受主要组织相容性复合物(majorhistocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子作用，NK细胞无需致敏即能杀伤不表达或低表达主要组织相容性抗原的肿瘤细胞(Yokoyama and Seaman,1993)，对于可下调MHCⅠ类分子表达的病毒感染或肿瘤细胞，NK细胞的作用是对T细胞免疫调节作用的重要补充。NK细胞受体是在NK细胞上表达的一系列表面分子，在NK细胞与靶细胞的识别，NK细胞介导的靶向性杀伤作用和信号传导的过程中发挥重要作用。NK细胞受体可根据不同的角度进行分类(Yokoyama et al,1995):1．按NK细胞受体的配体是否为MHCⅠ类分子，可将NK细胞受体分为MHCⅠ类分子受体和非MHCⅠ类分子受体；2．按受体结构特征可分为免疫球蛋白超家族(IgSF)和C型外源凝集素超家族(C-lectin SF)；3．以NK细胞受体基因定位可分为KIR家族、CD94/NKG2家族、Ly家族和NKR-P1家族等；4．按功能可分为抑制性受体和激活性受体。C型外源凝集素(C-type lectin)受体家族是NK细胞受体家族的一个重要部分，目前发现的C型外源凝集素类NK细胞受体包括小鼠的Ly49家族、NKR-P1家族及人的NKG2家族等，由NK基因复合物编码，小鼠的编码基因位于第6号染色体，人的编码基因位于第12号染色体。还有一些由单拷贝基因编码的NK细胞C型外源凝集素受体，包括CD94,CD69,AICL(activation-induced C-type lectin)等。这些基因产物均为表达在NK细胞上的Ⅱ型穿膜蛋白，有Ca2+依赖糖基识别区，在Ca2+存在的条件下可与配体结合，在激活或抑制NK细胞杀伤作用过程中发挥作用(Lanier et al,1998)。NK细胞可表达一种或多种C型外源凝集素样NK细胞受体，可与相应的MHCⅠ类分子配体结合。抑制性受体与配体结合后传递抑制信号，即可抑制NK细胞对靶细胞的杀伤，而激活性受体与配体结合后，则可刺激NK细胞对靶细胞进行杀伤。NK细胞受体与配体的结合具有广泛性，例如，Ly49C可与多种H-2分子结合，且与其他Ly49分子具有交叉反应(Brennan et al,1 995)。因此，发现NK细胞受体家族的新成员对于NK细胞受体与配体的结合，信号传导等机制研究具有重要意义。Ly49家族和CD94/NKG2家族产物多为NK细胞抑制性受体，也有一些为激活性受体；而NKR-P1家族产物多为NK细胞激活性受体。目前为止，Ly49家族至少有9个成员，NKG2家族至少有5个成员，与CD94共价结合发挥作用。迄今为止已发现多个NKR-P1基因，每个均有等位基因。随着分子生物学技术的发展，不断有新的C型外源凝集素样NK细胞受体被发现。这对于进一步了解NK非特异性免疫机制并应用NK细胞对肿瘤及病毒感染进行治疗有很大帮助。研究已表明，C型外源凝集素样受体的异常或缺失与许多疾病相关，因此，为治疗目的研究和开发人C型外源凝集素样受体有重要意义。本专利技术的目的是提供一种新的人C型外源凝集素样受体(C lectin-like molecule，简称为“CLL-1”)蛋白以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一目的是提供编码这些多肽的多核苷酸。本专利技术的另一目的是提供生产这些多肽的方法以及该多肽和编码序列的用途。在本专利技术的第一方面，提供新颖的分离出的CLL-1多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。在本专利技术的第二方面，提供编码分离的这些多肽的多核苷酸，该多核苷酸包含一核苷酸序列，该核苷酸序列与选自下组的一种核苷酸序列有至少70％相同性(a)编码上述人CLL-1多肽的多核苷酸；和(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸。较佳地，该多核苷酸编码具有SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的多肽。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中170-967位的序列；(b)具有SEQ ID NO:1中1-1566位的序列。在本专利技术的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的载体，以及被该载体转化或转导的宿主细胞或者被上述多核苷酸直接转化或转导的宿主细胞。在本专利技术的第四方面，提供了制备具有人CLL-1蛋白活性的多肽的方法，该方法包含(a)在适合表达人CLL-1蛋白的条件下，培养上述被转化或转导的宿主细胞；(b)从培养物中分离出具有人CLL-1蛋白活性的多肽。在本专利技术的第五方面，提供了与上述的人CLL-1多肽特异性结合的抗体。还提供了可用于检测的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中连续的10-3018个核苷酸。在本专利技术的第六方面，提供了模拟、促进、拮抗人CLL-1多肽活性的化合物，以及抑制人CLL-1多肽的表达的化合物。还提供了筛选和/或制备这些化合物的方法。较佳地，该化合物是人CLL-1多肽的编码序列或其片段的反义序列。在本专利技术的第七方面，提供了检测样品中是否存在CLL-1蛋白的方法，它包括将样品与CLL-1蛋白的特异性抗体接触，观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样品中存在CLL-1蛋白。在本专利技术的第八方面，提供了一种检测与人CLL-1多肽异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，该方法包括检测编码所述多肽的核酸序列中是否存在突变。在本专利技术的第九方面，提供了本专利技术多肽和编码序列的用途。例如本专利技术多肽可被用于筛选促进人CLL-1多肽活性的激动剂，或者筛选抑制人CLL-1多肽活性的拮抗剂、或者被用于肽指纹图谱鉴定。本专利技术的人CLL-1蛋白的编码序列或其片段，可被作为引物用于PCR扩增反应，或者作为探针用于杂交反应，或者用于制造基因芯片或微阵列。在本专利技术的第十方面，提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本专利技术的人CLL-1多肽或其激动剂、拮抗剂以及药学上可接受的载体。这些药物组合物可治疗肿瘤等病症。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。下列附图用于说明本专利技术的具体实施方案，而不用于限定由权利要求书所界定的本专利技术范围。附图说明图1是本专利技术的人CLL-1的cDNA序列，其中非编码序列用小写字母表示，编码序列用大写字母表示。图2是本专利技术的人CLL-1蛋白的全长氨基酸序列。图3是本专利技术的人CLL-1蛋白与小鼠KLR2(aaf36830)和人CD94蛋白(q60660)的氨基酸序列同源性比较图。上方序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人ＣＬＬ－１多肽，其特征在于，它包含：具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曹雪涛，章卫平，万涛，陈涛涌，
申请(专利权)人：上海华晨生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]