一种牛骨小分子活性肽的生物制备方法技术

本发明专利技术涉及食品加工领域，具体公开了一种牛骨小分子活性肽的生物制备方法，本发明专利技术是以牛软骨、整粒糯米酒糟、完整鲜茉莉花和果葡糖浆为原料经前期原料处理、混合、蜜蜂生物转化、分离干燥而制成的牛骨小分子活性肽。本发明专利技术所得的牛骨小分子活性肽干基纯度＞91%，其中189‑1000道尔顿的牛骨小分子活性肽占总肽段质量分数的69%以上，能作为大众人群的一种功能膳食补充剂，尤其对于运动少的群体有明显的强精壮骨的功效。

【技术实现步骤摘要】
一种牛骨小分子活性肽的生物制备方法
本专利技术涉及食品加工领域，具体涉及一种牛骨小分子活性肽的生物制备方法。
技术介绍
目前小分子肽的制备通常使用的手段是使用酸解或酶解的方式将蛋白质水解获得小分子肽，制备方法大多集中在酸水解和酶水解结合以获得得率较高的肽含量，进一步通过酶切位点的精准控制以获得有活性的肽类物质，而使用蜜蜂这类昆虫作为工具实现蛋白质的降解和生物转化是尚未见报道的。蜜蜂不仅能降解标的蛋白质，而且还能完成部分小分子肽、酶的重构，从而实现小分子肽、酶的生成、合成及生物转化。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术的主要目的在于，提供一种牛骨小分子活性肽的生物制备方法，具体步骤如下：(1)将新鲜的牛软骨洗净，加水没过牛软骨，煮沸后除去浮渣和残油，捞出牛软骨，冷却后重复上述加水、煮沸、除浮渣和残油、捞出牛软骨的步骤至少三次；牛软骨沥干后，置于-10℃～-5℃进行缓慢冷冻，冷冻完全后再进行解冻处理，如此冷冻解冻至少三次后，收集牛软骨和牛软骨解冻液；(2)取步骤(1)收集的牛软骨，按牛软骨：水＝200～250：800～1200的质量比加水混合，用锤片式粉碎机(型号：CSM-H系列机械粉碎机)高速剪切打浆，胶体磨(型号：JMF-280)磨浆，高压均质机(型号：GYB60-6S)剪切后，得到牛软骨混浆；然后按牛软骨混浆：完整鲜茉莉花：整粒糯米酒糟＝10～12：0.6～1：0.4～0.8的质量比加入完整鲜茉莉花、整粒糯米酒糟混合，再向其中加入步骤(1)收集的牛软骨解冻液，文火常压煮沸后保持40～60min(去除牛软骨的腥杂味，使牛软骨混浆具有浓郁的茉莉花香，同时避免将茉莉花和整粒糯米酒糟煮烂而保持完整形态)，捞出完整茉莉花和整粒糯米酒糟后，得到牛软骨液；将牛软骨液抽真空密封包装，再经132～140℃、0.22～0.25MPa高温加压条件下作用1.5～2.5小时，完成牛软骨的解聚；(3)将步骤(2)所得解聚后的牛软骨液拆包，用60目滤布过滤去除不溶性物质，收集牛骨滤液；按牛骨滤液：果葡糖浆＝60～65：35～40的质量比加入果葡糖浆混合均匀得骨糖液，骨糖液经真空低温(真空度：-0.08～-0.10MPa，温度控制在50～58℃)浓缩至原体积的1/3～1/2，得骨糖膏；(4)将干丝瓜瓤固定在蜂箱底部，再将步骤(3)所得骨糖膏分散滴落于丝瓜瓤上使其不聚集成块，便于蜜蜂采食；待骨糖膏被蜜蜂采食完后收集蜂糖蜜(本专利技术中：蜂糖蜜是人工喂食蜜蜂由果葡糖浆制备而成的骨糖膏而产生；蜂蜜是蜜蜂采食花蕊而产生)；将蜂糖蜜加水(优选加2～5倍体积水)稀释，用200目滤布过滤去除不溶性物质，再经滤膜(例如：纳滤膜及超滤膜)分离去除包括果糖和葡萄糖在内的小分子，其主要截留分子量在189～1000道尔顿的牛骨小分子活性肽；(5)步骤(4)所得截留物经速冻、真空冷冻干燥，即得牛骨小分子活性肽。进一步，步骤(1)所述新鲜的牛软骨是以牦牛为原料生产的。进一步，步骤(2)所述整粒糯米酒糟为湖北孝感地区用糯米制备的甜米酒新鲜压干的整粒糯米酒糟，干基质量百分比高于50％。进一步，步骤(3)所述果葡糖浆为F42型。进一步，步骤(3)和步骤(4)所用滤布为尼龙滤布。进一步，步骤(5)所述速冻、真空冷冻干燥步骤为：速冻的温度低于-30℃，真空冷冻干燥的冷阱温度低于-40℃，真空度10Pa，干燥时间不低于48h。进一步，步骤(5)所得牛骨小分子活性肽：干基纯度(蛋白肽含量)＞91％，其主要截留分质量在189-1000道尔顿的牛骨小分子活性肽占总肽段质量分数的69％以上(所制得的牛骨小分子活性肽的检测方法参考《GB/T22729-2008食品安全国家标准海洋鱼低聚肽粉》进行检测)。上述制备方法所得的牛骨小分子活性肽能作为大众人群的一种功能膳食补充剂，尤其对于运动少的群体有明显的强精壮骨的功效。本专利技术基于蜜蜂生物转化的牛骨小分子活性肽的生物制备方法的创新之处在于：(1)利用缓冻和解冻工艺对牛软骨进行初步分子解聚，利用高温高压实现牛软骨的高效解聚，解聚后的牛软骨才有可能实现蜜蜂的生物转化过程；(2)利用蜜蜂自身的分泌的酶系将牛软骨催化转化成牛骨肽，而且肽分子分布相较普通酶解更为集中，以2～8个氨基酸构成的牛骨小分子活性肽占总肽段质量分数的69％以上；同时牛骨活性肽的产生刺激了蜜蜂生成了大量活性酶，如此生物转化的正反馈效应生成了大量的牛骨小分子活性肽，凸显了终产品的独有功能活性；(3)蜜蜂独有的采食特性对原料十分敏感，不能直接采食牛软骨，浓郁的整粒糯米酒糟和茉莉花香能有效去除牛软骨的腥杂异味，产生的糟香和花香能吸引蜜蜂的采食；同时完整茉莉花、整粒糯米酒糟的选择和文火不破坏加热均是为了既能保留风味，又能很好的除去茉莉花和整粒糯米酒糟而不影响终产品的纯度；果葡糖浆的高比例加入为蜜蜂提供了充足的食物，蜜蜂不直接采食牛软骨，但混合后的骨糖膏能有效吸引蜜蜂采食；(4)使用丝瓜瓤分散骨糖膏不至于结块，便于蜜蜂高效采食和生物转化，否则高蛋白原料的结块骨糖膏在没有被快速采食的情况下易滋生杂菌和腐败变质，影响产品品质和安全性；未经浓缩的牛软骨糖液极易腐败，而经浓缩的骨糖膏有抑菌效果，避免了在蜜蜂采食之前就染菌腐败了；(5)因蜂糖蜜中含有大量的果糖、葡萄糖和牛骨活性肽等物质，采用稀释后的蜂糖蜜经纳滤膜及超滤膜过滤分离截留处理可主要获得189～1000道尔顿的物质，能较好的截留离子型化合物，不带电荷且分子量仅为180道尔顿的果糖、葡萄糖基本上能被精准分离，被蜜蜂彻底生物转化成氨基酸等小分子物质基本上也能被精准分离，同时截留了带电荷及分子量大于189道尔顿的牛骨活性肽，而没有被蜜蜂生物转化或转化不够的牛骨大分子蛋白和肽因分子量大于1000道尔顿，基本上也能被精准地分离；(6)真空冷冻干燥最大限度的保存了牛骨肽的活性，而常规的高温干燥会因高温效应和羰氨反应对牛骨肽的活性造成极大的损失，最终破坏产品功能。附图说明图1为本专利技术实施例1制备的牛骨小分子活性肽粉的外观图。图2为本专利技术实施例2制备的牛骨小分子活性肽片的外观图。图3为本专利技术实施例1制备过程中蜜蜂在丝瓜瓤上的采食图。具体实施方式下面申请人将结合具体实施例，对本专利技术作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本专利技术。但以下内容不应理解为是对本专利技术的权利要求书请求保护范围的限制。以下实施例所用原料：牛软骨为西藏藏北地区的牦牛为原料生产的；茉莉花采自广西壮族自治区的东南部横县新鲜完整茉莉花；整粒糯米酒糟为湖北孝感地区用糯米制备的甜米酒新鲜压干的整粒糯米酒糟，干基质量百分比含量为60％±5％；果葡糖浆选用无色纯净无杂味的F42型；蜂蜜来自湖北神农架百花蜜蜂蜜；以下实施例中，所述蜂糖蜜为了与蜂蜜(蜜蜂采食花蕊而产生)有所区分，将人工喂食蜜蜂由果葡糖浆制备而成的骨糖膏而产生的叫做蜂糖蜜；<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牛骨小分子活性肽的生物制备方法，其特征在于，其步骤如下：/n（1）将新鲜的牛软骨洗净，加水没过牛软骨，煮沸后除去浮渣和残油，捞出牛软骨，冷却后重复上述加水、煮沸、除浮渣和残油、捞出牛软骨的步骤至少三次；牛软骨沥干后，置于-10℃～-5℃进行缓慢冷冻，冷冻完全后再进行解冻处理，如此冷冻解冻至少三次后，收集牛软骨和牛软骨解冻液；/n（2）取步骤（1）收集的牛软骨，按牛软骨：水=200～250：800～1200的质量比加水混合，打浆，磨浆，剪切后，得到牛软骨混浆；/n然后按牛软骨混浆：完整鲜茉莉花：整粒糯米酒糟=10～12：0.6～1：0.4～0.8的质量比加入完整鲜茉莉花、整粒糯米酒糟混合，再向其中加入步骤（1）收集的牛软骨解冻液，文火常压煮沸后保持40～60min，捞出完整茉莉花和整粒糯米酒糟后，得到牛软骨液；/n将牛软骨液抽真空密封包装，再经132～140℃、0.22～0.25MPa高温加压条件下作用1.5～2.5小时；/n（3）将步骤（2）所得解聚后的牛软骨液拆包，用60目滤布过滤去除不溶性物质，收集牛骨滤液；/n按牛骨滤液：果葡糖浆=60～65：35～40的质量比加入果葡糖浆混合均匀得骨糖液，骨糖液经50～58℃低温浓缩至原体积的1/3～1/2，得骨糖膏；/n（4）将干丝瓜瓤固定在蜂箱底部，再将步骤（3）所得骨糖膏分散滴落于丝瓜瓤上使其不聚集成块，便于蜜蜂采食；待骨糖膏被蜜蜂采食完后收集蜂糖蜜；将蜂糖蜜加水稀释，用200目滤布过滤去除不溶性物质，再经滤膜分离去除包括果糖和葡萄糖在内的小分子，其主要截留分子量在189～1000道尔顿的牛骨小分子活性肽；/n（5）步骤（4）所得截留物经速冻、真空冷冻干燥，即得牛骨小分子活性肽。/n...

【技术特征摘要】
1.一种牛骨小分子活性肽的生物制备方法，其特征在于，其步骤如下：
（1）将新鲜的牛软骨洗净，加水没过牛软骨，煮沸后除去浮渣和残油，捞出牛软骨，冷却后重复上述加水、煮沸、除浮渣和残油、捞出牛软骨的步骤至少三次；牛软骨沥干后，置于-10℃～-5℃进行缓慢冷冻，冷冻完全后再进行解冻处理，如此冷冻解冻至少三次后，收集牛软骨和牛软骨解冻液；
（2）取步骤（1）收集的牛软骨，按牛软骨：水=200～250：800～1200的质量比加水混合，打浆，磨浆，剪切后，得到牛软骨混浆；
然后按牛软骨混浆：完整鲜茉莉花：整粒糯米酒糟=10～12：0.6～1：0.4～0.8的质量比加入完整鲜茉莉花、整粒糯米酒糟混合，再向其中加入步骤（1）收集的牛软骨解冻液，文火常压煮沸后保持40～60min，捞出完整茉莉花和整粒糯米酒糟后，得到牛软骨液；
将牛软骨液抽真空密封包装，再经132～140℃、0.22～0.25MPa高温加压条件下作用1.5～2.5小时；
（3）将步骤（2）所得解聚后的牛软骨液拆...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪超，刘雅颀，尹晓清，
申请(专利权)人：湖北工业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42