一种特异性结合TIMP1蛋白的核酸适配体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性结合TIMP1蛋白的核酸适配体及其应用，所述核酸适配体序列包含以下四种核苷酸序列中的至少一种：A、如SEQ ID No.1－8所示的DNA序列；B、与SEQ ID No.1－8所示DNA序列具有60％以上同源性的DNA序列；C、与SEQ ID No.1－8所示DNA序列杂交的DNA序列；D、由SEQ ID No.1－8所示DNA序列转录的RNA序列；其中，上述四种核苷酸序列均能够特异性结合TIMP1蛋白；本发明专利技术还公开了一种核酸适配体衍生物；本发明专利技术还公开了上述核酸适配体或核酸适配体衍生物的应用。本发明专利技术的核酸适配体能与TIMP1蛋白特异性结合，具有分子量小、化学性质稳定、易于合成、生产时间短、成本低、易于保存和标记、无批次间差异等优点。无批次间差异等优点。无批次间差异等优点。

Aptamer specifically binding to TIMP1 protein and its application

【技术实现步骤摘要】
一种特异性结合TIMP1蛋白的核酸适配体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种特异性结合TIMP1蛋白的核酸适配体及其应用。

技术介绍

[0002]TIMP1蛋白是一种糖蛋白，可以从生物的多种组织中表达出来。该蛋白是基质金属蛋白酶的抑制酶。TIMP
‑
1主要分泌细胞为多种结缔组织细胞，被认为是组织中MMPs活性的主要调节者，它可以和MMPs家族成员以共价键方式形成1：1的复合物，从而发挥其抑制作用。两者共同维护细胞外基质稳态。目前，多项研究表明TIMP1蛋白与结直肠癌、肺癌、胰腺癌等多种癌症和肿瘤的发生和发展相关，因此，TIMP1蛋白能够作为相关肿瘤和癌症的诊断标志物和肿瘤治疗药物的靶点。
[0003]核酸适配体是一种类似于与抗体的、能够特异性识别特定靶标的单链DNA或RNA序列，一般通过SELEX技术获得。已被广泛应用于多种类型靶标的识别、检测以及治疗药物。
[0004]TIMP1核酸适配体可以用于开发多种类型的检测试剂盒和肿瘤治疗药物。
[0005]针对TIMP1的核酸适配体的序列信息目前还没有报道，因此本领域对与TIMP1有高亲和力的核酸适配体存在需求。

技术实现思路

[0006]本申请的主要目的在于提供一种特异性结合TIMP1蛋白的核酸适配体及其应用。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种特异性结TIMP1的核酸适配体及其应用，本专利技术的核酸适配体对TIMP1具有高度特异性，且分子量小，化学性质稳定，易于保存、易于标记。
[0009]本专利技术提出的一种特异性结合TIMP1蛋白的核酸适配体，所述核酸适配体序列包含以下核苷酸序列中的至少一种：
[0010]A、如SEQ ID No.1
‑
8所示的任一DNA序列，其中：
[0011]SEQ ID No.1序列为：
[0012]5’‑
GAACGACACCATACACTGCCAGTGAGACGAGATGAA
‑3’
；
[0013]SEQ ID No.2序列为：
[0014]5’‑
CACGCACGCTACAGATTCCAACGTATTAATACGTGC
‑3’
；
[0015]SEQ ID No.3序列为：
[0016]5’‑
CGAGTGACACAAGTCGATAAAATCGCATCTAACTGT
‑3’
；
[0017]SEQ ID No.4序列为：
[0018]5’‑
TCACAACACATCGTGTTCCTGTTCAGTCATATCTCAAG
‑3’
；
[0019]SEQ ID No.5序列为：
[0020]5’‑
ACCAAACCTCTCCTATGATTCATCGAGTCACGTGT
‑3’
；
[0021]SEQ ID No.6序列为：
[0022]5’‑
TTCACTCACATGGCACATCACACGACTCTCACTTTT
‑3’
；
[0023]SEQ ID No.7序列为：
[0024]5’‑
CCTATGTCTACCTTGCTCTTTCGTTGTCTGCTCACT
‑3’
；
[0025]SEQ ID No.8序列为：
[0026]5’‑
GGATATACTTGGCGTGTGTCGATACGAATGTCTCGG
‑3’
；
[0027]B、与SEQ ID No.1
‑
8所示的任一DNA序列具有60％以上同源性的DNA序列；
[0028]C、与SEQ ID No.1
‑
8所示的任一DNA序列杂交的DNA序列；
[0029]D、由SEQ ID No.1
‑
8所示的任一DNA序列转录的RNA序列；
[0030]其中，上述核苷酸序列均能够特异性结合TIMP1蛋白。
[0031]优选地，上述与SEQ ID No.1
‑
8所示的任一DNA序列具有60％以上同源性的DNA序列，其同源性可以为60％以上、70％以上、80％以上、85％以上、90％以上、92％以上、94％以上、96％以上、98％以上或99％以上。
[0032]优选地，所述核酸适配体序列被修饰，所述修饰包括磷酸化、甲基化、氨基化、羧基化、醛基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或同位素化。
[0033]优选地，所述核酸适配体序列上连接荧光标记物、淬灭基团、叠氮基团、炔基基团、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、马来酰亚胺、纳米材料、聚乙二醇、小肽、siRNA或酶。
[0034]上述荧光标记物、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、马来酰亚胺、纳米材料、小肽、siRNA、酶为常用的标记、检测、诊断或治疗的物质。
[0035]以上经修饰或连接处理后的核酸适配体，都具有与原核酸适配体基本相同或类似的分子结构、理化性质和功能，都能与TIMP1蛋白结合；经修饰或连接处理后的核酸适配体可以保持或提高核酸适配体与TIMP1蛋白的亲和力，或可以提高核酸适配体的稳定性。
[0036]本专利技术还提出了一种核酸适配体衍生物，所述核酸适配体衍生物是由上述核酸适配体序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列，或者使用核酸变体(如锁核酸、人工碱基、镜像核酸等)替换由权利要求1
‑
3任一项中所述核酸适配体序列中的碱基，或者是由上述核酸适配体改造成的肽核酸。
[0037]换言之，以上不论是经部分取代或经过修饰后的核酸适配体序列，都具有原核酸适配体基本相同或类似的分子结构、理化性质和功能，且都与TIMP1蛋白结合。
[0038]上述硫代磷酸酯骨架序列、核酸变体序列和肽核酸可用核酸适配体按照本领域常规方法制得。
[0039]本专利技术还提出了上述核酸适配体或上述核酸适配体衍生物在制备抗肿瘤或炎症药物中的应用。
[0040]TIMP1的纯化方法有多种，如：将上述核酸适配体或上述核酸适配体衍生物与含有TIMP1蛋白的样品液孵育，使得二者特异性结合形成复合物，回收复合物，通过高盐或者其他方法将结合的TIMP1蛋白洗脱下来，即纯化得到TIMP1蛋白；
[0041]或者，先将上述核酸适配体或上述核酸适配体衍生物固定到固相基质上，将含有TIMP1蛋白的样品液缓慢流经固相基质，二者会特异性结合，且不会与其它无关蛋白结合，然后用缓冲液清洗固相基质，去除未结合的无关蛋白，再用高盐或者其他方法将结合的
TIMP1蛋白洗脱并收集，即纯化得到TIMP1蛋白。本领域技术人员能够依据实际需要选择适当的纯化方法。
[0042]本专利技术还提出了上述核酸适配体或上述核酸适本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合TIMP1蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体序列包含以下四种核苷酸序列中的至少一种：A、如SEQ ID No.1－8所示的任一DNA序列，其中：SEQ ID No.1序列为：5
’
－GAACGACACCATACACTGCCAGTGAGACGAGATGAA－3
’
；SEQ ID No.2序列为：5
’
－CACGCACGCTACAGATTCCAACGTATTAATACGTGC－3
’
；SEQ ID No.3序列为：5
’
－CGAGTGACACAAGTCGATAAAATCGCATCTAACTGT－3
’
；SEQ ID No.4序列为：5
’
－TCACAACACATCGTGTTCCTGTTCAGTCATATCTCAAG－3
’
；SEQ ID No.5序列为：5
’
－ACCAAACCTCTCCTATGATTCATCGAGTCACGTGT－3
’
；SEQ ID No.6序列为：5
’
－TTCACTCACATGGCACATCACACGACTCTCACTTTT－3
’
；SEQ ID No.7序列为：5
’
－CCTATGTCTACCTTGCTCTTTCGTTGTCTGCTCACT－3
’
；SEQ ID No.8序列为：5
’
－GGATATACTTGGCGTGTGTCGATACGAATGTCTCGG－3
’
；B...

【专利技术属性】
技术研发人员：高俊顺，高俊莉，李学明，
申请(专利权)人：杭州广科安德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：