唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-15蛋白的核酸适配体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素

【技术实现步骤摘要】
唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素
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15蛋白的核酸适配体及其应用


[0001]本专利技术涉及唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素
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15(Sialic acid
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binding immunoglobulin
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like lectin
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15，Siglec
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15)蛋白的核酸适配体及其应用。

技术介绍

[0002]癌症是是全球性的公共健康问题，是全人类健康的重大威胁。随着科学的进步及癌症相关学科的发展，肿瘤免疫研究和免疫治疗得到高速发展。其中以PD
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1/L1为代表的免疫抑制剂，在肿瘤免疫治疗中最引人瞩目，为广大肿瘤患者带来了新的希望，但这种免疫疗法并不是对所有肿瘤病人都有效，单用情况下PD
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1/L1抗体对实体瘤的总体有效率仍在只有20％左右。
[0003]唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素
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15(Sialic acid
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binding immunoglobulin
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like lectin
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15，Siglec
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15)可通过识别含有唾液酸的糖链结构，介导细胞与细胞或病原体间的相互作用，在固有免疫和适应性免疫中发挥重要的调控作用。研究表明Siglecl
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15mRNA在众多癌症中表达上调，包括肺癌、肾癌、肝癌、结肠癌、膀胱癌、子宫内膜癌等，Siglecl
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15在肿瘤细胞、与肿瘤相关的间质细胞、肿瘤浸润的巨噬细胞/骨髓细胞也均有检测到，其与T细胞表面受体相互作用会抑制T细胞增殖活性，最终导致肿瘤细胞发生“免疫逃逸”。同时Siglecl
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15的表达与PD
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L1相互排斥，提示这两种分子可能通过完全不同的机制介导免疫抑制。阻断Siglecl
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15可以让肿瘤微环境的免疫正常化，不会引起严重的自身免疫反应，且可能对抗PD
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L1治疗无效的患者有效。
[0004]目前，包括Siglec
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15在内的诸多免疫检查点抗体仍未上市，因为抗体的生产周期慢长，加上抗体存在不稳定、易失活以及成本高的缺点，因此亟需发展其他更稳定，更有效和更低成本免疫治疗药物。核酸适体，是从人工合成的随机寡核苷酸文库中体外筛选得到的能够高亲和性和高特异性地与靶标分子结合的寡核苷酸，大多数的核酸适体都是通过指数富集配体进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)筛选获得。核酸适体作为一种特异的识别分子，由于其对靶标具有较高特异性和亲和力，与抗体相比合成简单、修饰方便、体积小、免疫原性低、价格低廉，引起了基础研究和应用研究的广泛关注，在生物传感器、成像探针、疾病早期检测、药物制剂等方面具有巨大的应用潜力。因此，开发Siglecl
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15核酸适体用于肿瘤免疫治疗具有十分重要的意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的，在于提供Siglec
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15蛋白的核酸适配体，所述的核酸适配体包括如SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：7任一所示的核苷酸序列。
[0006]优选地，所述的核酸适配体为SEQ ID NO：3。
[0007]本专利技术的另一目的，在于提供所述的Siglec
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15蛋白的核酸适配体，在Siglec
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15蛋白识别中的应用。
[0008]本专利技术的另一目的，在于提供所述的Siglec
‑
15蛋白的核酸适配体，在表达Siglec
‑
15蛋白肿瘤细胞、与肿瘤相关的间质细胞、肿瘤浸润的巨噬细胞/骨髓细胞的检测方面的应用。
[0009]本专利技术的另一目的，在于提供所述的Siglec
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15蛋白的核酸适配体，在表达Siglec
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15蛋白肿瘤细胞、与肿瘤相关的间质细胞、肿瘤浸润的巨噬细胞/骨髓细胞的成像方面的应用。
[0010]本专利技术的另一目的，在于提供所述的Siglec
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15蛋白的核酸适配体，在制备相关免疫治疗药物方面的应用。
[0011]本专利技术通过提供以上核苷酸序列，作为核酸适配体，为Siglecl
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15高表达的肿瘤检测及Siglecl
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15介导的肿瘤免疫治疗提供新方法，补充现有肿瘤诊疗体系。
[0012]本专利技术SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列，其与Siglec
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15结合能力强。尤其是，SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，对Siglec
‑
15蛋白具有高亲和力，其中，对Siglec
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15蛋白琼脂糖微球解离常数为K
d
＝3.2
±
0.4nM。
[0013]SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，对高表达Siglec
‑
15的人脑胶质瘤细胞系(U87)也能保持良好的结合能力与亲和力，解离常数为K
d
＝34.1
±
4.3nM，且选择性最佳。
[0014]SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，能在复杂环境中识别Siglec
‑
15。
附图说明
[0015]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。
[0016]图1为His
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tag Siglec
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15修饰的Ni琼脂糖微球来监测富集的过程。随着筛选轮数的增加库与Siglec
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15
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Ni
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beads结合的荧光强度明显增加(图1A)，然而，Ni
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beads荧光强度未增加(图1B)。
[0017]图2为随机DNA序列，富集文库和筛选出的7条核酸适体与Siglec
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15
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Ni琼脂糖微球结合的荧光强度。表明了同浓度的不同核酸适体虽对Siglec
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15蛋白的结合能力不同，但均对Siglec
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15有结合(图2A)；同时筛选得到的核酸适体对高表达Siglec
‑
15的人脑胶质瘤细胞系(U87)也能保持良好的结合能力(图2B)，其中序列WXY3与U87细胞结合能力较好，且选择性最佳。
[0018]图3为WXY3在复杂体系中的与U87细胞结合能力。与缓冲液相比，在DMEM完全培养基条件下，与U87细胞结合的适体数量没有明显减少(图3A)；此外，在100％的人血清培养条件下，与缓冲液相比，约75％的结合适体保持不变(图3B)。
[0019]图4为WXY3与Sigle本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Siglec
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15蛋白的核酸适配体，其特征在于：所述的核酸适配体包括如SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：7任一所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的Siglec
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15蛋白的核酸适配体，其特征在于：所述的核酸适配体为SEQ ID NO：3。3.根据权利要求1至2任一项所述的Siglec
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15蛋白的核酸适配体，在Siglec
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15蛋白识别中的应用。4.根据权利要求1至2任一项所述的Siglec
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【专利技术属性】
技术研发人员：杨朝勇，宋彦龄，魏心语，陈福德，黄梦娇，吴秋月，周雷激，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：