一种焦土链霉菌的代谢产物和应用制造技术

本发明专利技术请求保护一种焦土链霉菌的代谢产物和应用，本发明专利技术属于微生物工程技术领域，具体涉及从焦土链霉菌(Streptomyces showdoensis)液体发酵物中提取的一种生物碱化合物izumiphenazine A及其制法和应用。具体而言，本发明专利技术公开了一种生物碱类化合物，其化学结构式为：该生物碱类化合物izumiphenazine A能用于抑制金黄色葡萄球菌和四联球菌的生长。金黄色葡萄球菌和四联球菌的生长。

Metabolites and application of a Streptomyces scorched earth

【技术实现步骤摘要】
一种焦土链霉菌的代谢产物和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及从焦土链霉菌(Streptomyces showdoensis)液体发酵物中提取的一种化合物izumiphenazine A及其制法和抗菌活性应用。

技术介绍

[0002]抗生素常用于治疗微小病原体等引起的感染，为人类健康做出重大的贡献。随着青霉素的发现，抗生素成为了20世纪最伟大的发现之一，它的使用令人类的平均寿命延长15年以上。然而近年来，致病菌对抗生素的耐药性越来越严重，有些致病菌甚至出现了多重耐药性和交叉耐药性，具有耐药性的致病菌数量也呈现出较快的增长趋势。如果这一问题不能尽快解决，那我们将很可能进入无药可用的“后抗生素时代”。为了避免人类的健康受到威胁，寻找具有新结构特征或新作用特点的药源化合物成为应对病原菌快速变化的主要方法。昆虫共生菌在与宿主长期的进化过程中，具备了特殊的代谢途径，是新型抗生素研发的宝贵资源库。因此，从昆虫共附生放线菌中分离得到结构新颖的抗菌活性物质则是当前对抗致病菌耐药性的手段之一。

技术实现思路

[0003]本专利技术要解决的技术问题是提供一种生物碱类化合物及其制备方法和用途—作为抗菌剂。
[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种焦土链霉菌的生物碱类化合物izumiphenazine A，其结构式为：
[0005][0006]本专利技术所述焦土链霉菌具体可为中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC4.1757的菌株。
[0007]本专利技术还同时提供了上述生物碱类化合物的制备方法，包括如下步骤：
[0008]1)、将焦土链霉菌接种于高氏一号培养基中，在28
±
0.5℃的恒温培养箱中，培养3d；
[0009]2)、之后将新鲜的菌丝接种于有100mL高压灭菌的液体高氏一号培养基中，在温度28
±
0.5℃，转速180rpm的摇床上培养3d，得种子液；
[0010]3)、将种子液按照10％～15％的接种量转接至发酵培养基中，按照步骤1摇床条件发酵培养7d；
[0011]4)、将步骤3所得发酵液过滤，滤液用乙酸乙酯萃取，真空浓缩干燥，得粗浸膏；
[0012]5)、使用步骤4的粗浸膏用10倍质量的硅胶制作硅胶柱，刚开始以纯二氯甲烷洗脱，然后以二氯甲烷和甲醇比值为100:1、100:2、100:4依次洗脱，得到不同的洗脱部分；
[0013]6)将步骤5的100:1洗脱部分干燥处理后经凝胶柱层析分离，以甲醇为洗脱剂，所得的沉淀在甲醇中重结晶；得到生物碱类化合物。
[0014]本专利技术还同时提供了上述生物碱类化合物在抗菌剂中的应用，具体为：用于抑制病原细菌的生长，所述菌为金黄色葡萄球菌和四联球菌。
[0015]本专利技术具有如下有益效果：
[0016]1.本专利技术的生物碱类化合物可以作为具有抗菌剂或其先导物使用。
[0017]2.本专利技术的生物碱类化合物可以利用微生物进行液体发酵生产，工艺简便，周期短，成本低，来源有保证。
[0018]3.本专利技术利用生物法合成生物碱类化合物对环境无污染。
具体实施方式
[0019]下面结合具体实施案例对本专利技术做进一步的解释。
[0020]实施例1、焦土链霉菌的液体发酵
[0021]焦土链霉菌菌株(保藏编号为CGMCC4.1757)获自中国普通微生物菌种保藏管理中心，将焦土链霉菌菌株接种于高氏一号培养基中，在28
±
0.5℃的恒温培养箱中，培养3d；之后将新鲜的菌丝接种于有100mL高压灭菌的液体高氏一号培养基中，在温度28
±
0.5℃，转速180rpm的摇床上培养3d，得种子液；将种子液按照10％
‑
15％的接种量转接至发酵培养基中，在温度28
±
0.5℃，转速180rpm的摇床上培养7d。
[0022]实施例2、焦土链霉菌的生物碱类化合物提取和分离
[0023]将实施例1制备而得的20L发酵液经3层纱布过滤，得到滤液，将该滤液用中等极性有机溶剂乙酸乙酯进行1:1萃取数次，直到有机相无萃取物得到为止，合并所有萃取液，使用旋转蒸发仪高压浓缩，得到相应菌株的粗提物9.5g；将上述粗提物与等质量100
‑
200目的硅胶拌匀，于40℃烘箱中将样品烘干，进一步研磨成粉末状，备用；使用粗提物10倍质量的硅胶制作硅胶柱，以不同比例的二氯甲烷和甲醇为以洗脱剂，极性从低到高进行洗脱。刚开始以纯二氯甲烷洗脱，然后以二氯甲烷和甲醇比值为100:1、100:2、100:4依次洗脱(每种洗脱液的用量均为约10倍柱体积)，最后得到100:1洗脱部分为1.2g，干燥处理后经凝胶柱层析分离，以甲醇为洗脱剂，所得的沉淀在甲醇中重结晶得到聚酮类化合物45mg。其结构式为：
[0024][0025]实施例3、焦土链霉菌的生物碱类化合物结构鉴定
[0026]焦土链霉菌的生物碱类化合物的结构是基于它们的性状、质谱、核磁共振谱数据分析而确定的。性状和光谱学数据如下：
[0027]红色无定形粉末，易溶于二甲基亚砜。化合物的核磁共振波谱数据如下：1H NMR(DMSO
‑
d6)δ:3.69(1H,dd,7.2Hz14.8Hz),4.19(1H,dd,6.5Hz14.8Hz),4.80(1H,m),5.34(1H,dd,3.3Hz 6.1Hz),5.59(1H,dd,6.1Hz10.4Hz),6.33(1H,d,3.3Hz),7.11(1H,d,7.9Hz),7.32(1H,d,7.7Hz),7.38(1H,d,7.9Hz),7.59(1H,t,7.9Hz),7.71(1H,d,7.7Hz),7.81(1H,t,7.7Hz),8.12(1H,s),10.30(1H,s),10.77(1H,s),14.34(1H,brs)；13CNMR(DMSO
‑
d6)δ:33.3,39.1,39.2,39.4,39.5,39.6,39.8,39.9,71.5,88.6,111.6,111.7,118.0,118.3,130.5,131.2,137.3,138.7,142.2,149.7,153.1,153.4,153.5,158.7,165.7。
[0028]实施例3、焦土链霉菌的生物碱类化合物对病原菌的抑制作用
[0029]采用滤纸片法对焦土链霉菌的生物碱类化合物进行抗菌活性测试。将三种致病细菌接种于PDA液体培养基，30℃，180r/min摇床培养过夜。然后用无菌水把菌液浓度调到0.5
‑
1个麦氏。化合物和阳性对照(庆大霉素)用DMSO配置成浓度为6mg/mL。无菌条件下，用移液枪吸取200μL稀释好的菌悬液打到PDA固体平板上并涂布均匀，然后用移液枪吸取5μL配置好的化合物和阳性对照溶液，分别滴于灭直径5mm无菌滤纸片上，待DMSO挥发干后，将滤纸片放入到涂满病原菌的平板中央，将培养皿倒置放于恒温培养箱中孵本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种焦土链霉菌的生物碱类化合物izumiphenazine A，其特征是结构式为：2.如权利要求1所述的焦土链霉菌化合物izumiphenazine A的制备方法，其特征是包括如下步骤：1)、将焦土链霉菌接种于高氏一号培养基中，在28
±
0.5℃的恒温培养箱中，培养3d；2)、之后将新鲜的菌丝接种于有100mL高压灭菌的液体高氏一号培养基中，在温度28
±
0.5℃，转速180rpm的摇床上培养3d，得种子液；3)、将种子液按照10％～15％的接种量转接至...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴菲，张应烙，黄忠迪，尹彩萍，操玮，李前航，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：