一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽及其合成方法技术

本发明专利技术属于生物多肽的技术领域，具体涉及一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽及其合成方法。所述多肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，所述多肽具有较高的靶标亲和力，活性高，在很低的剂量和浓度下即可表现出显著的高活性，通过发挥竞争凝集素，抑制凝集素与甾醇O

【技术实现步骤摘要】
一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽及其合成方法


[0001]本专利技术属于生物多肽的
，具体涉及一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽及其合成方法。

技术介绍

[0002]随著经济发展，非酒精脂肪肝病已经成为世界上最常见的肝病，根据流行病学统计，非酒精脂肪肝病患者约占全球人口的25%。特别是在经济发达国家，如美国，约有30%～40%成年人患有非酒精脂肪肝病，在2016年，非酒精脂肪肝病给美国造成的年度经济损失大约有1030亿美元。非酒精脂肪肝病是一种由代谢综合症引起慢性肝脏疾病，主要特征为肝脏细胞大量累积脂肪，虽然早期可通过控制饮食及规律运动缓解甚至逆转病理进程，但大多数患者没有达到或维持饮食目标和体重减轻，并随着脂质积累的不断增加，肝损伤加剧，非酒精性肝病可发展为肝炎、肝硬化甚至肝癌，极大地威胁人类生命健康。由于非酒精脂肪肝病早期病征不明显，难以早期发现，因此及时缓解肝脏脂质积累显得尤为必要。

技术实现思路

[0003]针对上述问题，本专利技术的目的在于提供一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽及其合成方法，所属多肽具有较高的靶标亲和力，活性高，具有缓解脂质在肝细胞中的积累，对抗肿瘤发生以及协助抗癌药物抑制肿瘤生长的作用。
[0004]本专利技术的
技术实现思路
如下：本专利技术提供了一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽，所述多肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，其中，氨基酸序列的1
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41号肽段为功能肽段，发挥抑制脂肪积累功用；氨基酸序列的42
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53号肽段为穿膜肽，协助多肽进入细胞，任何可协助1
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41号功能肽段进入细胞的方式，如转基因工艺及携带不同穿膜肽等，都可以达到抑制细胞脂肪积累的作用。
[0005]本专利技术还提供了一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽用于制备多肽药物。
[0006]本专利技术还提供了一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽的合成方法，包括如下步骤：1）将树脂浸泡于有机溶液中，清洗抽掉有机溶液，用去保护剂去除树脂上的保护基团（脱帽），清洗；2）取游离羧基端的第2个氨基酸，加入缩合剂、DMF放入以上树脂中反应，之后取树脂进行验色；3）用去保护剂去除第2个氨基酸上的保护基团（脱帽），清洗；4）重复步骤2）和步骤3）进行氨基酸的连接，直到最后一个氨基酸；5）用去保护剂去除最后一个氨基酸上的保护基团（脱帽），清洗，验色；6）反应结束之后，采用溶液对多肽产物进行洗涤收缩，用裂解液切得到的多肽，最后进行分析和纯化；
步骤1）所述树脂包括Fmoc
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lys（boc）Wang resin；步骤1）所述有机溶液包括DCM二氯甲烷；步骤1）、步骤3）以及步骤5）所述去保护剂包括胺碱类溶剂，具体包括哌啶、浓氨水、二氧六环/4M NaOH、乙醇胺、环已胺、吗啡啉、吡咯烷酮以及DBU中的一种，优选为20%的哌啶；步骤1）、步骤3）以及步骤5）所述清洗的试剂为DMF N,N
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二甲基甲酰胺；步骤2）所述验色为茚三酮验色反应，颜色结果为溶液亮黄，树脂透明，无杂色；步骤5）所述为茚三酮验色反应，验色为蓝色则表明保护基团成功去掉，如无色则表示没反应上，需要重新进行脱帽的操作；步骤6）所述溶液包括DCM和MeOH；所述裂解液为三氟乙酸、1,2
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乙二硫醇和水的混合溶液。
[0007]多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成顺序一般从C端（羧基端）向N端（氨基端）合成。采用固相合成法，从而大大的减轻了每步产品纯化的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是被保护的，而羧基端是游离的，并且在反应之前必须活化。C端指的是羧基端，羧基端开始数，羧基端游离是第一个氨基酸。
[0008]相比现有技术，本专利技术的有益效果如下：本专利技术的一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽，具有较高的靶标亲和力，活性高，在很低的剂量和浓度下即可表现出显著的高活性，并且其水解产物为氨基酸，无毒；本专利技术的多肽通过发挥竞争凝集素，抑制凝集素与甾醇O
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酰基转移酶结合，降低甾醇O
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酰基转移酶活性，达到控制生物体内生理代谢功能，如缓解脂质在肝细胞中的积累，对抗肿瘤发生以及协助抗癌药物抑制肿瘤生长等；本专利技术的多肽通过抑制肝脏脂质积累，从而缓解及治疗非酒精脂肪肝病，防止肝硬化或肝癌发生，保护患者生命健康，同时缓解了由非酒精性脂肪肝病造成的社会经济负担，本专利技术的多肽的代谢产物是无毒性的，可通过蛋白水解降解和肾过滤来清除；本专利技术的多肽的合成工艺简单，多肽分子量小，人工合成的效率高，通过固相合成法，大大的减轻了每步产品纯化的难度，过程自动化，易于控制，成本低。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是被保护的。
附图说明
[0009]图1为实施例1反应产物的MS测试分析图；图2为实施例1反应产物的HLPC测试分析图；图3为实施例1的多肽进行肝细胞脂质定量测定结果图；图4为实施例1的多肽进行肝细胞荧光染色实验图；图5为肝细胞中转入多肽
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DsRed和Mito
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DsRed质粒的western blot结果图；图6为肝细胞中转入多肽
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DsRed和Mito
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DsRed质粒的SOAT activity assay结果图；图7为肝细胞中转入多肽
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DsRed和Mito
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DsRed质粒的脂质测定结果图；图8为肝细胞中转入多肽
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DsRed和Mito
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DsRed质粒后Lipid Droplet（LD）荧光染色实验结果图。
具体实施方式
[0010]以下通过具体的实施案例以及附图说明对本专利技术作进一步详细的描述，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的保护范围，在阅读了本专利技术之后，本领域技术人员对本专利技术的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定。
[0011]若无特殊说明，本专利技术的所有原料和试剂均为常规市场的原料、试剂。
[0012]实施例1一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽及其合成：1）将1g Fmoc
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lys（boc）Wang resin树脂放入反应柱中，加入1.5g DCM浸泡5min，采用2g DMF清洗抽掉DCM，用2g 20%的哌啶的去保护剂去除树脂上的Fmoc保护基团，脱帽时间20min，之后用DMF洗6次，验色为蓝色则Fmoc成功去掉，如无色则表示没反应上，需要重新脱帽；2）取游离羧基端的第2个氨基酸（arg），加入2g 缩合剂DIC、2g DMF放入以上树脂反应柱中反应（鼓气），之后取树脂进行茚三酮验色反应，颜色结果是溶液亮黄，树脂透明，无杂色；3）用2g 20%的哌啶的去保护剂去除第2个氨基酸上的Fmoc保护基团，DMF清洗洗6次，验色为蓝色则Fmoc成功去掉，如无色则表示没反应上，需要重新脱帽；4）重复步骤2）和步骤3）进行氨基酸的连接，直到最后一个氨基酸；5）用2g 20本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。2.一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽用于制备多肽药物。3.一种应用于抑制细胞内脂质积累的多肽的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：1）将树脂浸泡于有机溶液中，清洗抽掉有机溶液，用去保护剂去除树脂上的保护基团，清洗；2）取游离羧基端的第2个氨基酸，加入缩合剂、DMF放入以上树脂中反应，之后取树脂进行验色；3）用去保护剂去除第2个氨基酸上的保护基团，清洗；4）重复步骤2）和步骤3）进行氨基酸的连接，直到最后一个氨基酸；5）用去保护剂去除最后一个氨基酸上的保护基团，清洗，验色；6）反应结束之后，采用溶液对多肽产物进行洗涤收缩，用裂解液切得到的多肽，最后进行分析和纯化。4.由权利要求3所述的多肽的合成方法，其特征在于，步骤1）所述树脂包括Fmoc
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lys（boc）Wang res...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙宏羽，秦侬，庄咏钧，郑又玮，
申请(专利权)人：湖南大学，
类型：发明
国别省市：