CTLA-4结合分子及其用途制造技术

本发明专利技术涉及特异性CTLA

CTLA-4 binding molecule and its application

【技术实现步骤摘要】
CTLA-4结合分子及其用途
[0001]本专利技术涉及特异性CTLA-4结合分子以及含有所述CTLA-4结合分子的免疫缀合物、组合物。此外，本专利技术涉及编码所述CTLA-4结合分子的核酸及包含其的宿主细胞，以及制备所述CTLA-4结合分子的方法。本专利技术还涉及这些CTLA-4结合分子的治疗和诊断用途，特别地，本专利技术还涉及这些CTLA-4结合分子与其它疗法，例如治疗方式或治疗剂的联合治疗。

技术介绍

[0002]细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4，CTLA-4)，又称CD152，是一种白细胞分化抗原。作为免疫球蛋白超家族成员中的一种跨膜蛋白质，主要表达于活化的T淋巴细胞和B细胞表面。
[0003]在T细胞表面表达的CTLA-4和T细胞表面的共刺激分子CD28具有高度的同源性，它们拥有相同的配体CD80(B7-1)或CD86(B7-2)，但CTLA-4以比CD28更大的亲和力和亲合力结合CD80和CD86。CTLA-4与CD80(B7-1)或CD86(B7-2)结合后形成的CTLA-4/CD80和/或CTLA-4/CD86复合物负调节T细胞受体信号传导，导致随后的T细胞活化的下调、抗肿瘤免疫活性的抑制和肿瘤的免疫逃逸。CTLA-4在许多癌症组织中过表达，所述癌症包括多种实体瘤，诸如黑色素瘤、肾细胞癌、非小细胞肺癌、肝癌、乳腺癌等。活化的T淋巴细胞表面CTLA-4过表达可促进肿瘤侵袭，并且常常与不良预后相关。
[0004]单克隆抗体在癌症的检测及生物靶向治疗方面成功的应用，引起了肿瘤治疗的变革。然而，传统的单克隆抗体(150kD)分子质量过大，难穿透组织，造成肿瘤区域的有效浓度较低，治疗效果不充分。此外，完全人源化的传统抗体开发周期长，生产成本高，稳定性不够等诸多因素限制其在临床中的应用及普及。因此，需要开发新的分子量小的抗体分子。
[0005]单结构域抗体(single domain antibody,sdAb)是目前最小的抗体分子，其分子量是普通抗体的1/10。单结构域抗体除具备单克隆抗体的抗原反应性外，还拥有一些独特的功能特性，如分子质量小、稳定性强、可溶性好、易表达、免疫原性弱、穿透性强、靶向性强、人源化简单，制备成本低廉等，几乎完美克服了传统抗体开发周期长，稳定性较低，保存条件苛刻等缺陷。
[0006]目前现有技术中针对CTLA-4靶点的单结构域抗体药物不多，而且这些单结构域抗体药物的治疗效果也不甚理想。因此，本领域迫切需要开发新的包含有效针对CTLA-4的单结构域抗体的CTLA-4结合分子。
[0007]专利技术概述
[0008]本专利技术人通过锐意研究，开发了一组包含特异性识别CTLA-4的单结构域抗体(sdAb)部分的CTLA-4结合分子，其能够
[0009](1)以高亲和力结合CTLA-4，例如人CTLA-4，例如，所述CTLA-4结合分子与CTLA-4之间结合的Kd是约10-5
M至约10-12
M，优选地，约10-7
M至约10-12
M；
[0010](2)有效阻断CTLA-4的相关活性，例如，有效阻断CTLA-4与CD80和/或CD86的结合；
[0011](3)有效诱导IL-2的分泌和TNF-α的分泌；且
[0012](4)使T细胞保持活化状态。
[0013]因此，在第一方面，本专利技术提供了CTLA-4结合分子，其包含至少一个特异性结合CTLA-4的单结构域抗体(sdAb)部分，所述sdAb部分包含三个互补决定区，分别为CDR1、CDR2和CDR3，其中：
[0014](a)CDR1包含选自SEQ ID NO:1、4、8和11中的任一氨基酸序列、或SEQ ID NO:1、4、8和11中的任一氨基酸序列的不超过2个氨基酸变化的变体；
[0015](b)CDR2包含选自SEQ ID NO:2、5、9、12、14中的任一氨基酸序列、或SEQ ID NO:2、5、9、12、14中的任一氨基酸序列的不超过2个氨基酸变化的变体；和
[0016](c)CDR3包含选自SEQ ID NO:3、6、7、10、13中的任一氨基酸序列、或SEQ ID NO:3、6、7、10、13中的任一氨基酸序列的不超过2个氨基酸变化的变体，
[0017]其中所述氨基酸变化是氨基酸的添加、缺失或取代，优选地，所述sdAb部分是骆驼科动物VHH、部分人源化的或完全人源化的VHH、嵌合的VHH。
[0018]在一些实施方案中，本专利技术的CTLA-4结合分子中的所述sdAb部分包含
[0019](i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:1的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:2的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:3的不超过2个氨基酸变化的CDR3；
[0020](ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:4的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:5的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:6的不超过2个氨基酸变化的CDR3；
[0021](iii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:4的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:5的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:7的不超过2个氨基酸变化的CDR3；
[0022](iv)含有氨基酸序列SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:8的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:10的不超过2个氨基酸变化的CDR3；
[0023](v)含有氨基酸序列SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:11的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:12的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:13的不超过2个氨基酸变化的CDR3；或
[0024](vi)含有氨基酸序列SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:8的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:14的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:10的不超过2个氨基酸变化的CDR3。
[0025]在一些实施方案中，本专利技术的CTLA-4结合分子中的所述sdAb部分包含：含有氨基酸序列如ATIFDRSV本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CTLA-4结合分子，其包含至少一个特异性结合CTLA-4的单结构域抗体(sdAb)部分，所述sdAb部分包含三个互补决定区，分别为CDR1、CDR2和CDR3，其中：(a)CDR1包含选自SEQ ID NO:1、4、8和11中的任一氨基酸序列、或SEQ ID NO:1、4、8和11中的任一氨基酸序列的不超过2个氨基酸变化的变体；(b)CDR2包含选自SEQ ID NO:2、5、9、12、14中的任一氨基酸序列、或SEQ ID NO:2、5、9、12、14中的任一氨基酸序列的不超过2个氨基酸变化的变体；和(c)CDR3包含选自SEQ ID NO:3、6、7、10、13中的任一氨基酸序列、或SEQ ID NO:3、6、7、10、13中的任一氨基酸序列的不超过2个氨基酸变化的变体，其中所述氨基酸变化是氨基酸的添加、缺失或取代，优选地，所述sdAb部分是骆驼科动物VHH、部分人源化的或完全人源化的VHH、嵌合的VHH。2.根据权利要求1所述的CTLA-4结合分子，其中所述sdAb部分包含(i)含有氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:1的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:2的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:3的不超过2个氨基酸变化的CDR3；(ii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:4的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:5的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:6的不超过2个氨基酸变化的CDR3；(iii)含有氨基酸序列SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:4的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:5的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:7的不超过2个氨基酸变化的CDR3；(iv)含有氨基酸序列SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:8的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:9的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:10的不超过2个氨基酸变化的CDR3；(v)含有氨基酸序列SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:11的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:12的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:13的不超过2个氨基酸变化的CDR3；或(vi)含有氨基酸序列SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:8的不超过2个氨基酸变化的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:14的不超过2个氨基酸变化的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:10的不超过2个氨基酸变化的CDR3。3.根据权利要求1或2所述的CTLA-4结合分子，其中所述sdAb部分包含：含有如氨基酸序列ATIFDRSVMX1(SEQ ID NO:65)的CDR1、含有如氨基酸序列RITSGGNX2X3(SEQ ID NO:66)的CDR2和含有如氨基酸序列RGSVLLSX4YDY(SEQ ID NO:67)的CDR3,其中X1为A或者S；X2为I或者T；X3为Y或者N；X4为R或者Q。4.根据权利要求3所述的CTLA-4结合分子，其中所述sdAb部分包含：含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的CDR3。5.根据权利要求3所述的CTLA-4结合分子，其中所述sdAb部分包含：含有氨基酸序列SEQ ID NO:4的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的CDR3。
6.根据权利要求3所述的CTLA-4结合分子，其中所述sdAb部分包含：含有氨基酸序列SEQ ID NO:15的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:16的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的CDR3。7.根据权利要求3所述的CTLA-4结合分子，其中所述sdAb部分包含：含有氨基酸序列SEQ ID NO:15的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:17的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:7的CDR3。8.根据权利要求3所述的CTLA-4结合分子，其中所述sdAb部分包含：含有氨基酸序列SEQ ID NO:15的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:5的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的CDR3。9.根据权利要求3所述的CTLA-4结合分子，其中所述sdAb部分包含：含有氨基酸序列SEQ ID NO:15的CDR1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:17的CDR2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:6的CDR3。10.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚福家，孔超，郞国竣，刘婵娟，邓敏，
申请(专利权)人：三优生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：