一种均相化学发光检测试剂盒及其应用制造技术

技术编号:29283293 阅读:17 留言:0更新日期:2021-07-16 23:36
本发明专利技术涉及一种均相化学发光检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括供体试剂和受体试剂,供体试剂含有供体颗粒,受体试剂含有受体颗粒,所述供体颗粒包括第一载体,所述第一载体的内部填充有敏化剂,所述第一载体的表面直接或间接连接有特异性结合配对成员中的一员,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不高于25ug;所述受体颗粒包括第二载体,所述第二载体的内部填充有发光组合物,所述第二载体的表面包被有包覆层,所述包覆层的表面连接报告分子,所述报告分子能够与待测目标分子特异性结合,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不低于40ug。利用所述试剂盒进行的POCT检测方法具有高灵敏度、高精密度和宽范围以及快速、便携等特点。便携等特点。便携等特点。

A homogeneous chemiluminescence detection kit and its application

【技术实现步骤摘要】
一种均相化学发光检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于均相化学发光
,具体涉及一种均相化学发光检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]均相化学发光分析是指无须对结合后生成的复合物以及剩余的游离反应物进行分离既可进行化学发光检测的方法。
[0003]现有的均相化学发光分析存在以下缺点:
[0004]A、仪器系统体积庞大,占地面积大,同时,由于测试通量大,试剂卡采用以100测试为整单位,对实验室样本规模有要求;
[0005]B、仪器系统及试剂价格昂贵,维护成本高,不适用于基层医疗机构;
[0006]C、仪器体积大,不能随身携带进入诊疗现场;
[0007]D、化学发光系统主要采用血清和血浆作为样本,一般不能采用全血,限制了其使用范围。
[0008]同时,近年来新兴起一种在病人旁边进行的临床检测(床边检测bedside testing)的即时检验(point-of-care testing)技术,简称POCT检测技术,POCT检测技术主流是荧光定量层析或者胶体金,主要是包裹荧光物质的荧光微球或胶体金通过膜层析的方法进行免疫检测的快诊技术。但是由于这两种技术主要是在NC膜上进行释放检测,由于膜本身的CV就有5%以上,因此固相膜法的POCT检测CV—般都要在10%以上,检测精密度很差,对于灵敏度要求很高的项目如cTnI,定量就变得极其困难。另外,采用新型技术如微流控芯片类型POCT检测技术,具有反应速度快,样本需求量小等优点,但也因为反应不充分,造成检测灵敏度低的问题。
[0009]因此,亟需提供一种高灵敏度、高精密度和宽范围,同时具有快速、便携等特点的均相化学发光POCT检测试剂盒及方法。

技术实现思路

[0010]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种均相化学发光POCT检测试剂盒和方法,利用所述试剂盒进行的POCT检测方法兼有化学发光分析技术的高灵敏度、高精密度和宽范围,同时具有POCT检测技术快速、便携等特点。
[0011]为此,本专利技术第一方面提供了一种均相化学发光检测试剂盒,其包括供体试剂和受体试剂,所述供体试剂含有供体颗粒,所述供体颗粒被激发后能够产生活性氧,所述受体试剂含有第二缓冲溶液和受体颗粒,所述受体颗粒能够与接收到的活性氧反应产生化学发光信号,
[0012]所述供体颗粒包括第一载体,所述第一载体的内部填充有敏化剂,所述第一载体的表面直接或间接连接有特异性结合配对成员中的一员,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不高于25ug;
[0013]所述受体颗粒包括第二载体,所述第二载体的内部填充有发光组合物,所述第二载体的表面包被有包覆层,所述包覆层的表面连接报告分子,所述报告分子能够与待测目标分子特异性结合,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不低于40ug。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中,所述第一载体的表面直接键合有特异性结合配对成员中的一员。
[0015]在本专利技术的另一些实施方式中,所述第一载体的表面没有包被或连接有多糖物质,其直接键合特异性结合配对成员中的一员。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中,所述第一载体的表面带有键合官能团,所述键合官能团用于将特异性结合配对成员中的一员直接键合在所述第一载体的表面。
[0017]在本专利技术的另一些实施方式中,所述键合官能团选自胺基、酰胺基、羟基、醛基、羧基、马来酰亚胺基和巯基;优选选自醛基和/或羧基。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中,所述特异性结合配对成员选自抗体、抗体片段、配体、寡核苷酸、寡核苷酸结合蛋白、凝集素、半抗原、抗原、免疫球蛋白结合蛋白、抗生物素蛋白、亲和素或生物素所组成的一对能够相互特异性结合的物质。
[0019]在本专利技术的另一些实施方式中,所述特异性结合配对成员为亲和素-生物素,所述亲和素选自卵白亲和素、链霉亲和素、卵黄亲和素、中性亲和素和类亲和素,优选为中性亲和素和/或链霉亲和素。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中,所述亲和素通过氨基与所述第一载体表面的醛基反应形成席夫碱的方式化学键合在所述第一载体的表面。
[0021]在本专利技术的另一些实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%。
[0022]在本专利技术的一些优选的实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥8%;优选地,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥10%。
[0023]在本专利技术的另一些优选的实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤40%;更进一步优选地,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤20%。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布呈现多分散性。
[0025]在本专利技术的另一些实施方式中,所述粒径分布变异系数C.V值是通过Gaussian分布计算得到。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中,利用Gaussian分布分析法,所述受体颗粒在受体试剂中Gaussian分布曲线呈现两个或两个以上的峰。
[0027]在本专利技术的另一些实施方式中,所述受体试剂中包含至少两种平均粒径分布的受体颗粒。
[0028]在本专利技术的一些实施方式中,所述包覆层中的包覆物选自多糖、高分子聚合物或生物大分子,优选为多糖;
[0029]进一步优选地,所述第二载体的表面包被有至少两个连续多糖涂层,所述连续多糖涂层的表面连接有特异性结合配对成员中的一员。
[0030]在本专利技术的另一些实施方式中,所述连续多糖涂层中的每一多糖层自发地与前一
多糖层相关联。
[0031]在本专利技术的一些实施方式中,所述多糖具有侧基官能团,所述连续多糖层中的任一多糖层的所述侧基官能团与前一多糖层的所述侧基官能团所带电荷相反。
[0032]在本专利技术的另一些实施方式中,所述多糖具有侧基官能团,并且所述连续多糖涂层中的任一多糖层通过所述侧基官能团与前一多糖层的所述侧基官能团之间的化学键合反应实现与所述前一多糖层共价连接。
[0033]在本专利技术的一些实施方式中,所述连续多糖涂层的所述侧基官能团在胺官能团和胺反应性官能团之间交替。
[0034]在本专利技术的另一些实施方式中,所述胺反应性官能团是醛基或羧基。
[0035]在本专利技术的一些实施方式中,所述连续多糖涂层的最外一层多糖层具有至少一个侧基官能团。
[0036]在本专利技术的另一些实施方式中,所述侧基官能团选自醛基、羧基、巯基、氨基、羟基和马来胺基中的至少一种;优选选自醛基和/或羧基。
[0037]在本专利技术的一些实施方式中,所述连续多糖涂层侧基官能团直接地或间接地化学键合特异性结合配对成员中的一员。
[0038]在本专利技术的另一些实施方式中,所述多糖选自含有三个或更多个未修饰或修饰的单糖单元的碳水化合物;优选选自葡聚糖、淀粉、糖原、菊粉、果聚糖、甘露聚糖、琼脂糖、半乳聚糖、羧基葡聚糖和氨基葡聚糖;更优选选本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种均相化学发光检测试剂盒,其包括供体试剂和受体试剂,所述供体试剂含有供体颗粒,所述供体颗粒被激发后能够产生活性氧,所述受体试剂含有第二缓冲溶液和受体颗粒,所述受体颗粒能够与接收到的活性氧反应产生化学发光信号,其特征在于,所述供体颗粒包括第一载体,所述第一载体的内部填充有敏化剂,所述第一载体的表面直接或间接连接有特异性结合配对成员中的一员,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不高于25ug;所述受体颗粒包括第二载体,所述第二载体的内部填充有发光组合物,所述第二载体的表面包被有包覆层,所述包覆层的表面连接报告分子,所述报告分子能够与待测目标分子特异性结合,且每毫克所述供体颗粒中的糖含量不低于40ug。2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述第一载体的表面直接键合有特异性结合配对成员中的一员。3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述第一载体的表面没有包被或连接有多糖物质,其直接键合特异性结合配对成员中的一员。4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述第一载体的表面带有键合官能团,所述键合官能团用于将特异性结合配对成员中的一员直接键合在所述第一载体的表面。5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述键合官能团选自胺基、酰胺基、羟基、醛基、羧基、马来酰亚胺基和巯基;优选选自醛基和/或羧基。6.根据权利要求1~5中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述特异性结合配对成员选自抗体、抗体片段、配体、寡核苷酸、寡核苷酸结合蛋白、凝集素、半抗原、抗原、免疫球蛋白结合蛋白、抗生物素蛋白、亲和素或生物素所组成的一对能够相互特异性结合的物质。7.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述特异性结合配对成员为亲和素-生物素,所述亲和素选自卵白亲和素、链霉亲和素、卵黄亲和素、中性亲和素和类亲和素,优选为中性亲和素和/或链霉亲和素。8.根据权利要求6或7所述的试剂盒,其特征在于,所述亲和素通过氨基与所述第一载体表面的醛基反应形成席夫碱的方式化学键合在所述第一载体的表面。9.根据权利要求1~8中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥5%。10.根据权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥8%;优选地,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≥10%。11.根据权利要求9或10所述的试剂盒,其特征在于,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤40%;更进一步优选地,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布变异系数C.V值≤20%。12.根据权利要求9~11中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述受体颗粒在受体试剂中的粒径分布呈现多分散性。13.根据权利要求9~12中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述粒径分布变异系数C.V值是通过Gaussian分布计算得到。14.根据权利要求9~13中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,利用Gaussian分布分析法,所述受体颗粒在受体试剂中Gaussian分布曲线呈现两个或两个以上的峰。
15.根据权利要求9~14中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述受体试剂中包含至少两种平均粒径分布的受体颗粒。16.根据权利要求1~15中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述包覆层中的包覆物选自多糖、高分子聚合物或生物大分子,优选为多糖;进一步优选地,所述第二载体的表面包被有至少两个连续多糖涂层,所述连续多糖涂层的表面连接有特异性结合配对成员中的一员。17.根据权利要求16所述的试剂盒,其特征在于,所述连续多糖涂层中的每一多...

【专利技术属性】
技术研发人员:康蔡俊李临
申请(专利权)人:科美诊断技术股份有限公司
类型:发明
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