具有与HPGI结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种有利于提高亲和力和活性的具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白及其制备方法和应用。本发明专利技术根据部分已有的能特异地结合HPG I的抗体序列，对其中部分氨基酸序列、特别是可变区的数个氨基酸序列进行修改、突变，从而得到上述结合蛋白。通过实验验证，上述结合蛋白能特异性的结合HPG I，其特异性强，灵敏度高，活性和亲和力均达到或高于当前市场产品，可用于科研或检测领域对HPG I的特异性检测。I的特异性检测。I的特异性检测。

Isolated binding protein with antigen binding domain binding to HPGI and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程和生物检测领域，尤其是涉及一种具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]胃蛋白酶原(PG)是由细胞合成，并以不具有活性的酶原颗粒形式贮存在细胞内。当细胞内充满酶原颗粒时，其对新的酶原的产生具有负反馈作用。分泌进入胃腔内的胃蛋白酶原在胃酸的作用下，从分子中解离出一个小分子多肽，转变为具有生物活性的胃蛋白酶。已激活的胃蛋白酶对胃蛋白酶原也有激活作用。
[0003]根据胃蛋白酶原的生化性质和免疫原性可将其分成2个亚群，组分1～5的免疫原性相同，称为胃蛋白酶原I(PG I)，主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；组分6和7被称为胃蛋白酶原II(PG II)，除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外，贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段也能产生。
[0004]通常情况下，人体约有1％的胃蛋白酶原透过胃黏膜毛细血管进入血液循环，进入血液循环的胃蛋白酶原在血液中含量非常稳定。血清中PG I和PG II可以反映胃黏膜腺体和细胞的数量，也间接反映胃黏膜不同部位的分泌功能。当胃黏膜发生病理变化时，血清中胃蛋白酶原的含量也随之改变。因此，监测血清中胃蛋白酶原的浓度可以作为监测胃黏膜状态的手段。
[0005]血清中PG I是检测胃泌酸腺细胞功能的指标之一，胃酸分泌增多则PG I升高，分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PG I降低；PG II与胃底粘膜病变的相关性较大，PG II升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关；PG I/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关。因此，测定PG I、PG II及其比值有重要的作用，PG I和PG II可作为胃炎、胃癌等多种胃部疾病的诊断标志物，相比胃钡餐造影、胃镜等传统检测手段，具有准确、无创、安全的优势。
[0006]目前临床上用于检测HPG I(人PG I)的方法有酶联免疫吸附法、化学发光法、流式荧光发光法、时间分辨荧光免疫分析法、光激化学发光免疫分析法、胶体金等，不同方法都有各自的优缺点，但是都需要针对于HPG I的特异性单克隆抗体。目前国内用于检测HPG I的单克隆抗体大都自外国采购，用于配对检测时可选择的不多，市场上对于活性和亲和力好的单克隆抗体存在强烈的需求。

技术实现思路

[0007]基于此，有必要提供一种高活性和亲和力的具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白及其制备方法和应用。
[0008]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下。
[0009]一种具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其抗原结合结构域
包括下述至少一个互补决定区，或者其抗原结合结构域与下述至少一个互补决定区具有至少80％的序列同一性且与HPG I具有K
D
≤8.36E-09mol/L的亲和力：
[0010]互补决定区CDR-VH1是G-N-X1-F-T-X2-S-X3-M-H，其中：X1是S或T；X2是T或S；X3是W或F；
[0011]互补决定区CDR-VH2是I-H-X1-H-S-G-N-X2-N-Y-X3-E-K-F，其中：X1是A或P；X2是T或S；X3是Q、D或N；
[0012]互补决定区CDR-VH3是R-X1-T-G-X2-F-X3-Y，其中：X1是N或Q；X2是A或P；X3是E或D；
[0013]互补决定区CDR-VL1是Q-X1-V-X2-S-X3-V-A，其中：X1是T或S；X2是S或T；X3是E或D；
[0014]互补决定区CDR-VL2是S-A-X1-N-X2-Y-T-G-X3-P-D，其中：X1是S或T；X2是R或K；X3是A或V；
[0015]互补决定区CDR-VL3是Q-D-X1-S-S-P-X2-T，其中：X1是F或Y；X2是R或K。
[0016]一种检测试剂或检测试剂盒，含有上述任一实施例所述的结合蛋白。
[0017]一种核酸，含有用于编码上述任一实施例所述的结合蛋白的核酸序列。
[0018]一种表达载体，其特征在于，含有上述核酸。
[0019]一种宿主细胞，其特征在于，转染或转化有含有上述核酸或如上述表达载体。
[0020]一种具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白的制备方法，包括如下步骤：
[0021]从能够分泌抗HPG I单克隆抗体的细胞中提取RNA；
[0022]对提取的RNA使用碱基序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的两种引物进行cDNA的合成；
[0023]将上述合成的cDNA作为模板，以序列如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示的三种引物进行扩增，获得轻链基因，并以序列如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.12所示的三种引物进行扩增，获得重链基因；
[0024]分别将所述轻链基因和所述重链基因插入表达载体中，并转化或转染宿主细胞，挑选阳性克隆进行所述结合蛋白的表达。
[0025]本专利技术根据部分已有的能特异地结合HPG I的抗体序列进行设计特异性的抗原结合结构域，尤其是对其中部分氨基酸序列、特别是可变区的数个氨基酸序列进行修改、突变，从而得到上述结合蛋白。通过实验验证，上述结合蛋白能特异性的结合HPG I，其活性和亲和力均达到或高于当前市场产品，可用于科研或检测领域对HPG I的特异性检测。
附图说明
[0026]图1为纯化的单克隆抗体的电泳鉴定结果。
具体实施方式
[0027]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0028]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0029]具体地，本文术语“分离的结合蛋白”是这样的蛋白，其由于衍生起源或来源不与天然结合的组分结合，所述天然结合的组分在其天然状态下与其伴随；基本上不含来自相同物种的其他蛋白；由来自不同物种的细胞表达；或在自然界中不存在。因此，化学合成或在不同于其天然起源的细胞系统中合成的蛋白将是与其天然结合的组分“分离的”；还可以通过分离，使用本领域众所周知的蛋白纯化技术，使得蛋白基本上不含天然结合的组分。
[0030]本文术语“抗原结合结构域的分离的结合蛋白”泛指包含CDR区(互补决定区)的一切蛋白/蛋白片段。“抗体”此用语包括多克隆抗体及单克隆抗体以及这些抗体的抗原化合物结合本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有与HPG I结合的抗原结合结构域的分离的结合蛋白，其特征在于，其抗原结合结构域包括下述至少一个互补决定区，或者其抗原结合结构域与下述至少一个互补决定区具有至少80％的序列同一性且与HPG I具有K
D
≤8.36E-09mol/L的亲和力：互补决定区CDR-VH1是G-N-X1-F-T-X2-S-X3-M-H，其中：X1是S或T；X2是T或S；X3是W或F；互补决定区CDR-VH2是I-H-X1-H-S-G-N-X2-N-Y-X3-E-K-F，其中：X1是A或P；X2是T或S；X3是Q、D或N；互补决定区CDR-VH3是R-X1-T-G-X2-F-X3-Y，其中：X1是N或Q；X2是A或P；X3是E或D；互补决定区CDR-VL1是Q-X1-V-X2-S-X3-V-A，其中：X1是T或S；X2是S或T；X3是E或D；互补决定区CDR-VL2是S-A-X1-N-X2-Y-T-G-X3-P-D，其中：X1是S或T；X2是R或K；X3是A或V；互补决定区CDR-VL3是Q-D-X1-S-S-P-X2-T，其中：X1是F或Y；X2是R或K。2.如权利要求1所述的结合蛋白，其特征在于，所述互补决定区CDR-VH1中X1是T，所述互补决定区CDR-VH2中X2是T，所述互补决定区CDR-VH3中X2是P，所述互补决定区CDR-VL1中X3是D，所述互补决定区CDR-VL2中X1是S，所述互补决定区CDR-VL3中X1是Y；优选的，所述互补决定区CDR-VH1中X2是T；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VH1中X2是S；优选的，所述互补决定区CDR-VH1中X3是W；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VH1中X3是F；优选的，所述互补决定区CDR-VH2中X1是A；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VH2中X1是P；优选的，所述互补决定区CDR-VH2中X3是Q；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VH2中X3是D；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VH2中X3是N；优选的，所述互补决定区CDR-VH3中X1是N；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VH3中X1是Q；优选的，所述互补决定区CDR-VH3中X3是E；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VH3中X3是D；优选的，所述互补决定区CDR-VL1中X1是T；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VL1中X1是S；优选的，所述互补决定区CDR-VL1中X2是S；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VL1中X2是T；优选的，所述互补决定区CDR-VL2中X2是R；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VL2中X2是K；优选的，所述互补决定区CDR-VL2中X3是A；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VL2中X3是V；优选的，所述互补决定区CDR-VL3中X2是R；另一个优选的，所述互补决定区CDR-VL3中X2是K。3.如权利要求1所述的结合蛋白，其特征在于，所述互补决定区CDR-VH1...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟媛，钟冬梅，周全兴，游辉，范凌云，
申请(专利权)人：东莞市朋志生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：