动物组织中镇静类药物代谢残留的检测方法技术

本发明专利技术揭示了一种动物组织中镇静类药物代谢残留的检测方法，采用分散固相萃取‑高效液相色谱三重四极杆质谱联用法同时测定猪肉、猪肝、猪肾、猪心和猪肺中氯丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪及其代谢物氯丙嗪亚砜、2‑氯吩噻嗪、异丙嗪亚砜、2，6‑二甲基苯胺等，优化了检测条件，能够精准的测出动物组织中镇静类药物，测定结果准确可靠，为镇静类药物代谢残留的测量提供了可靠的数据，具有显著的经济效益，具有广阔的市场前景。对于指导药物残留的测量具有很好的参考价值。

【技术实现步骤摘要】
动物组织中镇静类药物代谢残留的检测方法
本专利技术涉及检测
，具体涉及一种动物组织中镇静类药物代谢残留的检测方法。
技术介绍
氯丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪等吩噻嗪类药物被发现除临床治疗镇静用外的一些特殊效用，如改善肉类品质(类“瘦肉精”)、保水等。为减轻猪在运输、屠宰过程中的应激反应，一些屠宰场给猪使用镇静剂，消除躁动不安。一些生产者受经济利益驱使，在饲养过程中添加此类药物，以起到增重催肥、缩短出栏时间、减少应激带来的损失、协同注水等。此类药物及其代谢物不可避免地会残留于猪体内，而该类药物残留通过食物链进入人体达到一定浓度会出现恶心、呕吐、头晕、无力、四肢及口舌麻木等症状,严重者有短时间的精神失常。氯丙嗪的主要代谢物包括氯丙嗪亚砜、2-氯吩噻嗪，异丙嗪的主要代谢物异丙嗪亚砜，甲苯噻嗪的主要代谢物为2,6-二甲基苯胺(DMA)。国内外氯丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪的研究主要存在以下几个方面的不足：一、相关研究主要集中于原药的残留检测，对其代谢物的定量检测关注不足。据报道氯丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪在体内吸收、代谢和分解速度很快，仅有少量以原体形式从尿液排出，故鲜少有畜禽产品中检出原药的报道。但据报道，对动物源性食品镇静类药物及其代谢物残留量普查时发现，部分猪肉内可能含有微量异丙嗪亚砜。二、对氯丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪代谢物残留危害认识不足。据报道，氯丙嗪、异丙嗪代谢物部分具有原药活性，能引起白细胞减少和粒细胞缺乏症，从而引起人体肝脏、肾脏的病变、眼部并发症等，甲苯噻嗪主要代谢产物2,6-二甲基苯胺(DMA)，具有基因毒性及致癌作用。我国目前尚未有关于氯丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪代谢物限量的规定，且缺少相关代谢物的具体研究报道。三、由于缺乏检测技术手段，对氯丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪原药及代谢物暴露风险研究缺乏。目前尚未见有关于氯丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪及代谢物膳食暴露风险的研究报道，但鉴于已有关于肉中氯丙嗪、甲苯噻嗪引起的急性中毒事件相关案例报道，该类药物残留风险应当引起高度重视。综上，建立高效可靠的上述药物检测方法，对于发现氯丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪原药与代谢物的潜在风险以及开展有关研究具有十分重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种动物组织中镇静类药物代谢残留的检测方法，以解决现有技术中存在的不足。为实现上述目的，本专利技术提出一种动物组织中镇静类药物代谢残留的检测方法，包括：样品制备，解冻后的待测动物组织清洗后剔去毛、皮、淤血、筋腱、骨，切块、捣碎，分装样品容器中，保存备用；样品提取，称取样品5g试样于50mL离心管中，加入50μL混合内标工作液涡旋混匀30s，并静止10min，加入15mL乙腈旋涡混匀1min后，加入15g无水硫酸钠，旋涡混匀1min后，35℃～55℃超声提取10min，取出所述离心管，将所述离心管内的混合液体冷却至室温，4500r/min离心5min，得到第一次的上清液转移至100mL鸡心瓶中；将所述离心管内的去除上清液后的固体进行二次提取，得到第二次的上清液，将两次的上清液合并，加入10mL异丙醇，45℃，旋转蒸发至近干，得到残渣。样品净化，向所述残渣内加入100μL甲醇，少量水，溶解残渣，转移至2ml离心管中，用水定容至1.0mL加入1mL正己烷，加入吸附剂，涡旋振荡1min，12000r/min离心5min，下层清液过滤后待用；样品检测，将所述过滤后的下层清液上机检测，检测条件包括：色谱柱：AgilentEclipseXDB-C18色谱柱；流速，0.2mL/min；流动相：A相为0.1％氨水；B相为甲醇，梯度洗脱；柱温：40℃；进样量：10μL；内外标法定量；质谱离子源:ESI离子源温度:100℃；干燥气流量:10L/h；毛细管电压:4000V；气流温度:350℃；雾化气压力:40psi；碰撞气类型:氮气；扫描方式:正离子；检测方式:质谱多反应监测。优选地，所述吸附剂为50mgC18,10mgPSA,50mg中性氧化铝。优选地，所述梯度洗脱条件以体积分数计，流速为0.2ml/min，在0～0.5min，流动相A相为95％，流动相B相为5％；在0.5～3min，流动相A相为95％～60％，流动相B相为5％～40％；在3～4min，流动相A相为60％～20％，流动相B相为40％～80％；在4～5min，流动相A相为20％～5％，流动相B相为80％～95％；在5～17min，流动相A相为5％，流动相B相为95％；在17～17.1min，流动相A相为5％～95％，流动相B相为95％～5％；在17.1～18min，流动相A相为95％，流动相B相为5％。优选地，将所述离心管内的去除上清液后的固体进行二次提取，包括：将所述离心管内的所述固体震散，加入15mL乙腈，手摇上下震荡30s后，35℃～55℃超声提取10min，取出所述离心管，将所述离心管内的混合液体冷却至室温，4500r/min离心5min，得到第二次的上清液。优选地，所述下层清液过滤，包括：将所述下层清液经0.22μm滤膜过滤。优选地，所述镇静类药物包括：氯丙嗪、盐酸异丙嗪、甲苯噻嗪、氯丙嗪亚砜、异丙嗪亚砜、2，6-二甲基苯胺、2-氯吩噻嗪、氯丙嗪-D6盐酸盐、盐酸异丙嗪-D6和甲苯噻嗪-D6中的一种或多种。优选地，本专利技术的检测方法还包括：标准储备液制备：分别制备盐酸异丙嗪、氯丙嗪亚砜、异丙嗪亚砜、2，6-二甲基苯胺、2-氯吩噻嗪、氯丙嗪-D6盐酸盐、盐酸异丙嗪-D6、甲苯噻嗪-D6的质量浓度为1000μg/mL标准储备液；移取异丙嗪、氯丙嗪亚砜、异丙嗪亚砜、2，6-二甲基苯胺标准储备液，以及氯丙嗪、质量浓度为1000μg/mL的甲苯噻嗪标准品100μL，用甲醇定容于10mL棕色容量瓶中,制备为质量浓度为1000ng/mL混合中间液，避光冷冻保存；移取氯丙嗪-D6、异丙嗪-D6、甲苯噻嗪-D6标准储备液，用甲醇定容于10mL棕色容量瓶中,制备为质量浓度为1000ng/mL混合内标使用液，避光冷冻保存。优选地，所述制备为质量浓度为1000ng/mL混合中间液，避光冷冻保存的温度为-16～20℃，所述制备为质量浓度为1000ng/mL混合内标使用液，避光冷冻保存的温度为-16～20℃。优选地，待测动物组织为猪肉、猪肝、猪肾、猪心或猪肺。本专利技术实施例的检测方法至少具有以下有益效果：根据本专利技术实施例的动物组织中镇静类药物代谢残留的检测方法，能够精准的测出动物组织中镇静类药物，测定结果准确可靠，为镇静类药物代谢残留的测量提供了可靠的数据，具有显著的经济效益，具有广阔的市场前景。对于指导药物残留的测量具有很好的参考价值。附图说明图1是本专利技术的甲苯噻嗪及内标特征离子质量相关谱图；图2是本专利技术的2，6-二甲基苯胺及内标特征离子质量相关谱图；图3是本专利技术的氯丙嗪亚砜及内标特征离子质量相关谱图；图4是本专利技术的氯丙嗪及内本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种动物组织中镇静类药物代谢残留的检测方法，其特征在于，包括：/n样品制备，解冻后的待测动物组织清洗后剔去毛、皮、淤血、筋腱、骨，切块、捣碎，分装样品容器中，保存备用；/n样品提取，称取样品5g试样于50mL离心管中，加入50μL混合内标工作液涡旋混匀30s，并静止10min，加入15mL乙腈旋涡混匀1min后，加入15g无水硫酸钠，旋涡混匀1min后，35℃～55℃超声提取10min，取出所述离心管，将所述离心管内的混合液体冷却至室温，4500r/min离心5min，得到第一次的上清液转移至100mL鸡心瓶中；/n将所述离心管内的去除上清液后的固体进行二次提取，得到第二次的上清液，将两次的上清液合并，加入10mL异丙醇，45℃，旋转蒸发至近干，得到残渣；/n样品净化，向所述残渣内加入100μL甲醇，少量水，溶解残渣，转移至2ml离心管中，用水定容至1.0mL加入1mL正己烷，加入吸附剂，涡旋振荡1min，12000r/min离心5min，下层清液过滤后待用；/n样品检测，将所述过滤后的下层清液上机检测，检测条件包括：/n色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱；流速，0.2mL/min；流动相：A相为0.1％氨水；B相为甲醇，梯度洗脱；柱温：40℃；进样量：10μL；内外标法定量；/n质谱离子源:ESI离子源温度:100℃；干燥气流量:10L/h；毛细管电压:4000V；气流温度:350℃；雾化气压力:40psi；碰撞气类型:氮气；扫描方式:正离子；检测方式:质谱多反应监测。/n...

【技术特征摘要】
1.一种动物组织中镇静类药物代谢残留的检测方法，其特征在于，包括：
样品制备，解冻后的待测动物组织清洗后剔去毛、皮、淤血、筋腱、骨，切块、捣碎，分装样品容器中，保存备用；
样品提取，称取样品5g试样于50mL离心管中，加入50μL混合内标工作液涡旋混匀30s，并静止10min，加入15mL乙腈旋涡混匀1min后，加入15g无水硫酸钠，旋涡混匀1min后，35℃～55℃超声提取10min，取出所述离心管，将所述离心管内的混合液体冷却至室温，4500r/min离心5min，得到第一次的上清液转移至100mL鸡心瓶中；
将所述离心管内的去除上清液后的固体进行二次提取，得到第二次的上清液，将两次的上清液合并，加入10mL异丙醇，45℃，旋转蒸发至近干，得到残渣；
样品净化，向所述残渣内加入100μL甲醇，少量水，溶解残渣，转移至2ml离心管中，用水定容至1.0mL加入1mL正己烷，加入吸附剂，涡旋振荡1min，12000r/min离心5min，下层清液过滤后待用；
样品检测，将所述过滤后的下层清液上机检测，检测条件包括：
色谱柱：AgilentEclipseXDB-C18色谱柱；流速，0.2mL/min；流动相：A相为0.1％氨水；B相为甲醇，梯度洗脱；柱温：40℃；进样量：10μL；内外标法定量；
质谱离子源:ESI离子源温度:100℃；干燥气流量:10L/h；毛细管电压:4000V；气流温度:350℃；雾化气压力:40psi；碰撞气类型:氮气；扫描方式:正离子；检测方式:质谱多反应监测。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述吸附剂为50mgC18,10mgPSA,50mg中性氧化铝。


3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件以体积分数计，流速为0.2ml/min，在0～0.5min，流动相A相为95％，流动相B相为5％；在0.5～3min，流动相A相为95％～60％，流动相B相为5％～40％；在3～4min，流动相A相为60％～20％，流动相B相为40％～80％；在4～5min，流动相A相为20％～5％，流动相B相为80％～95％；在5～17min，流动相A相为5％...

【专利技术属性】
技术研发人员：张惠峰，魏春雁，范宏，刘笑笑，孟繁磊，宋志峰，张慧，郑妍婕，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：吉林;22