一种复合水溶性动物疫苗佐剂和疫苗以及疫苗的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种复合水溶性动物疫苗佐剂和疫苗以及疫苗的制备方法，涉及疫苗佐剂技术领域。所述复合水溶性动物疫苗佐剂，包括：乳酸

【技术实现步骤摘要】
一种复合水溶性动物疫苗佐剂和疫苗以及疫苗的制备方法


[0001]本专利技术涉及疫苗佐剂
，特别涉及一种复合水溶性动物疫苗佐剂和疫苗以及疫苗的制备方法的


技术介绍

[0002]疫苗佐剂是指先于疫苗抗原或同时应用，能非特异性地增强机体对该疫苗抗原的特异性免疫应答，增强抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身无抗原性的物质，在疫苗的研发和生产中具有重要的作用。对于多种动物传染病，由于没有合适的疫苗佐剂而影响了菌苗、毒苗、重组蛋白、多肽和DNA疫苗等的发展。因此，动物传染病的防控除了研发出高效安全的疫苗外，佐剂的研发也起着至关重要的作用。
[0003]目前动物疫苗佐剂主要分为非油乳佐剂和油乳佐剂两大类。非油乳佐剂主要包括铝盐佐剂等。铝盐佐剂主要有氢氧化铝胶和磷酸铝等，广泛用于人用和兽用疫苗的制备，主要诱导体液免疫应答，但皮下注射时常有肿胀或结块，抗原免疫原性弱时不足以提高其免疫原性，无法用于亚单位等新型疫苗，而且铝佐剂不能冷冻或冻干。因此，油乳佐剂逐渐被广泛用于人用和兽用疫苗的制备。
[0004]油乳佐剂包括矿物油佐剂、非矿物油佐剂。其中，弗氏完全佐剂(FCA)和不完全佐剂(FIA)是最为人熟悉矿物油佐剂；但是，FCA毒性较大，FIA又活性较差。同时，除了矿物油，其他油脂也可以制成油乳佐剂，比较常用的有角鲨烯和角鲨烷等。与矿物油佐剂相比，以角鲨烯和角鲨烷为油相的新型油乳剂既有良好的免疫效果，又没有严重的不良反应。但是，由于其原料价格较高，疫苗的成本会比传统矿物油佐剂疫苗高得多，影响其推广使用。
[0005]因此，研制一种即可提高动物疫苗的免疫应答效果，又没有严重的不良反应的新的油佐剂，是目前疫苗佐剂
需要解决的技术问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术针对上述技术问题，提出一种复合水溶性动物疫苗佐剂和疫苗以及疫苗的制备方法。
[0007]本专利技术采用技术方案为：一种复合水溶性动物疫苗佐剂，其特征在于，包括：乳酸
‑
羟基乙酸共聚物PLGA，树突状细胞靶向诱导肽DCpep，桔梗皂苷D，脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的B细胞抗原肽BP
‑
8和T细胞抗原肽TP
‑
7。
[0008]在上述方案的基础上，所述脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的B细胞抗原肽BP
‑
8氨基酸序列为：GNVTPRVS；所述脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的T细胞抗原肽TP
‑
7氨基酸序列为：SKRTSAL。
[0009]在上述方案的基础上，所述复合水溶性动物疫苗佐剂各成份的质量配比满足以下条件：总质量份按100份计，所述乳酸
‑
羟基乙酸共聚物PLGA为1.0
‑
2.5份；所述树突状细胞靶向诱导肽DCpep为0.05
‑
0.1份；所述脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的B细胞抗原肽BP
‑
8为0.08
‑
0.16份；所述脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的T细胞抗原肽TP
‑
7为0.08
‑
0.16份。
[0010]一种疫苗，其特征在于，包括权利要求1
‑
3任一项所述的复合水溶性动物疫苗佐剂和抗原。
[0011]在上述方案的基础上，所述复合水溶性动物疫苗佐剂和抗原的质量比为4：1
‑
5：1。
[0012]在上述方案的基础上，所述抗原为PCV2 Cap蛋白。
[0013]一种上述所述的疫苗制备方法，包括以下步骤：
[0014]S1:按成分配比，分别称取配制复合水溶性动物疫苗佐剂配方的各成分；
[0015]S2:取乳酸
‑
羟基乙酸共聚物PLGA，用纯净水将其溶解配置成乳酸
‑
羟基乙酸共聚物PLGA溶液；
[0016]S3:将所述的树突状细胞靶向诱导肽DCpep，桔梗皂苷D，脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的B细胞抗原肽BP
‑
8和脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的T细胞抗原肽TP
‑
7添加到乳酸
‑
羟基乙酸共聚物PLGA溶液中，组成复合水溶性动物疫苗佐剂；
[0017]S4:将复合水溶性动物疫苗佐和抗原，按质量比4：1
‑
5：1进行混合均匀，制备疫苗。
[0018]具体的，所述抗原为水相抗原，其浓度可根据具体情况实际配置。
[0019]本专利技术实施例提供的一种复合水溶性动物疫苗佐剂和疫苗以及疫苗的制备方法，具有以下有益效果：本专利技术与常规油佐剂相比，不仅能够刺激IgG、IgG1和IgG2a体液免疫应答，还能够促进T细胞增殖，提高细胞因子(IFN
‑
γ、IL
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6)水平，激发细胞免疫应答，同时避免了因油佐剂疫苗引起的注射部位肉芽肿等不良反应，有效提高动物疫苗免疫效果。
附图说明
[0020]图1为免疫仔猪外周血淋巴细胞刺激指数(SI)检测结果；
[0021]图2为免疫仔猪外周血中IL
‑
6浓度检测结果；
[0022]图3为免疫仔猪外周血中IFN
‑
γ浓度检测结果；
[0023]图4为免疫仔猪PCV2中和抗体检测结果。
具体实施方式
[0024]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]本专利技术专利技术构思如下：
[0026]通过研究发现，树突状细胞靶向分子DCpep是树突状细胞靶向分子之一，由12个氨基酸(FYPSYHSTPQRP)组成，在诱导体液免疫和细胞免疫过程中发挥着重要作用，能特异性结合DC并促进递呈作用。
[0027]进一步研究发现，脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白与卵白蛋白(OVA)混合配制的疫苗可诱导多种抗原特异性抗体亚类和效应分子(MIG，MCP
‑
1，IP
‑
10，MIP
‑
1α，KC和IL
‑
2)，以及抗原刺激后Th1和Th2型细胞因子水平升高，其有作为新型疫苗佐剂的潜力。
[0028]同时，某些氨基酸残基数小于50的小分子多肽具有增强机体免疫活性的能力，这类小分子多肽类佐剂具有安全性好、生物相容性佳、易合成、纯度高和制备成本低等优点。
[0029]因此，专利技术人尝试将树突状细胞靶向分子DCpep和脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白，以
PCV2 QD株且体积为100μL的病毒悬液。在37℃下孵育1小时后，每个孔中均添加100μL PK
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15细胞悬液。置37℃5％CO2培养3天后，计算PCV2特异性中和抗体的滴度，并表示为当抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合水溶性动物疫苗佐剂，其特征在于，包括：乳酸
‑
羟基乙酸共聚物PLGA，树突状细胞靶向诱导肽DCpep，桔梗皂苷D，脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的B细胞抗原肽BP
‑
8和T细胞抗原肽TP
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7。2.根据权利要求1所述的复合水溶性动物疫苗佐剂，其特征在于，所述脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的B细胞抗原肽BP
‑
8氨基酸序列为：GNVTPRVS；所述脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的T细胞抗原肽TP
‑
7氨基酸序列为：SKRTSAL。3.根据权利要求2所述的复合水溶性动物疫苗佐剂，其特征在于，所述复合水溶性动物疫苗佐剂各成份的质量配比满足以下条件：总质量份按100份计，所述乳酸
‑
羟基乙酸共聚物PLGA为1.0
‑
2.5份；所述树突状细胞靶向诱导肽DCpep为0.05
‑
0.1份；所述脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋白的B细胞抗原肽BP
‑
8为0.08
‑
0.16份；所述脑膜炎奈瑟氏球菌PorB蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洪亮，单虎，宋晓明，温永俊，刁志凯，黄娟，秦志华，蔡秀磊，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：