纳米载体及含其的药物递送系统技术方案

本发明专利技术提供了载药用纳米载体，所述纳米载体的靶向配体包括特异性靶向M2型巨噬细胞的多肽。本发明专利技术还提供了含其的药物递送系统。本发明专利技术的载体成功实现了特异性靶向M2型巨噬细胞，载体的毒性/免疫原性低,稳定性、缓释好，载重极化M2的药后，能大幅提高M2重极化率，提高抗肿瘤效果。抗肿瘤效果。

【技术实现步骤摘要】
纳米载体及含其的药物递送系统


[0001]本专利技术涉及一种纳米载体及其应用。

技术介绍

[0002]纳米载体是一种具有纳米尺度的亚微粒药物载体输送系统，可以通过包载等方式将药物分子包封在保护性壳状结构内。经检索，尽管目前利用纳米载体将药物递送至M2型巨噬细胞的研究已有很多，但是这些药物载体的递送并不是特异性递送因此存在药效差的问题,抑或是此类纳米药物存在引起全身性免疫反应等毒副作用的风险。

技术实现思路

[0003]本专利技术克服了现有技术的不足，一方面提供了一种药物纳米载体，所述纳米载体的靶向配体包括特异性靶向M2型巨噬细胞的多肽，多肽的序列可为YEQDPWGVKWWY。
[0004]可选地，所述纳米载体载药用的递送材料为聚乳酸
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羟基乙酸共聚物(PLGA)。
[0005]可选地，所述纳米载体包含有用于助其减少被给药对象的网状内皮系统RES捕获的囊泡，载药用的递送材料被内置在该囊泡中；当然，使用载体时，药物亦随递送材料内含在所述囊泡中。
[0006]囊泡在本专利中为本领域常见涵义，意指类似于细胞膜那样，由两亲性分子形成的具有封闭双层结构的分子有序组合体。
[0007]任选地，所述囊泡的膜表面含有CD47蛋白。
[0008]任选地，所述囊泡源于高表达CD47蛋白细胞的细胞膜，高表达意指该细胞比给药对象正常细胞，在细胞膜表面含有更高水平的CD47，多为癌细胞，如黑色素瘤细胞的细胞膜，可选为B16
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OVA细胞的细胞膜。具体制备时，可直接使用细胞匀浆裂解得到的细胞膜，将其挤成泡状。
[0009]任选地，所述多肽通过与其共价连接(如通过形成酰胺键而相连)的疏水链而嵌接在囊泡膜的外表面，该疏水链可为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)的碳链，如共价连接通过所述多肽与DSPE
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PEG
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NH2反应实现，DSPE
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PEG
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NH2为DSPE、聚乙二醇PEG(PEG可为PEG2000)、
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NH2依序相连的结构。
[0010]任选地，所述给药对象为哺乳动物，如人。
[0011]另一方面，本专利技术提供了递送系统，该系统包含被递送的药物及上述纳米载体。
[0012]任选地，所述药物能够重极化M2型巨噬细胞，如为瑞喹莫德(resiquimod)R848。
[0013]可补充地，所述系统中药物与其递送材料形成的纳米颗粒NP可为水包油(O/W)结构，制备可用水包油乳化法液，乳化剂可为聚乙烯醇，所述递送材料与药物接触以包载药物前，递送材料可用二氯甲烷预溶解，药物可用DMSO预溶解，所投药物与所投递送材料的质量比可为1：10
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400，如为1：10
‑
100。递送材料与药物接触后，可通过超声混匀，离心得到NP。NP制成后，用囊泡包裹NP，将所述多肽通过与其共价连接的疏水链嵌接在囊泡膜外表，该疏水链可为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺DSPE碳链，共价连接可为形成酰胺键而相连，如通过所述
多肽与DSPE
–
PEG
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NH2缩合实现，缩合可使用碳二亚胺，如EDC。
[0014]本专利技术的有益效果为：
[0015]本专利技术的载体成功实现了特异性靶向M2型巨噬细胞，载体的毒性/免疫原性低,稳定性、缓释好，载重极化M2的药后，能大幅提高M2重极化率，提高抗肿瘤效果。
附图说明
[0016]图1示范本专利载体NP
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R@M
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T各模块的结构及其制备；
[0017]图2比较了本专利载体与其他对照组对M2型巨噬细胞表型转化的影响(细胞水平)；
[0018]图3比较了本专利载体与其他对照组处理后，M1型巨噬细胞因子分泌的水平；
[0019]图4比较了本专利载体与其他对照组对M2型巨噬细胞表型转化的影响(mRNA水平)；
[0020]图5比较了对小鼠体内各给药形式的抗肿瘤效果，其中5A为M1/M2型巨噬细胞浸润比例的流式统计，5B、5C均是组织中分泌IFN
‑
γ的CD8
+
T细胞的比例的统计，分别涉及脾脏、引流淋巴结；
[0021]各图中涉及的统计学标识含义：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
具体实施方式
[0022]为节约篇幅，对本领域技术人员公知、熟悉或惯常操作的技术细节，本专利有所省略，如无特别说明，下面所用试剂、生物材料、培养基和溶液均为本领域常用、公众可以得到或市售，或者通过常规制备能够得到的物品。下面为详细示例说明本专利技术，而不应该为限制本专利技术的范围，分章节描述如下：
[0023]第1章可能涉及的英文缩写表
[0024][0025][0026]续表1
[0027][0028]第2章NP
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R@M
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T纳米载体的制备与表征
[0029]2.1部分试剂来源
[0030]DSPE
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PEG
(2000)
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NH2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
Avanti Polar Lipids
[0031]M2pep(YEQDPWGVKWWY)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
本实验室合成
[0032]ScM2pep(WEDYQWPVYKGW)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
本实验室合成
[0033]2.2实验方法
[0034]2.2.1合成PLGA纳米颗粒(NP)以及该NP包载R848的复合物NP
‑
RPLGA纳米颗粒的合成采用“水包油”的乳化方法，具体合成步骤如下：
[0035](1)用分析天平称取10mg的PLGA粉末溶于含400μL DCM的EP管中，充分震荡至PLGA完全溶解，将PLGA溶液转移至15mL离心管里。
[0036](2)继续加入3.6mL的2.5％的PVA水溶液。若制备包载R848的NP
‑
R，则另加入DMSO溶解好的0.1mg R848(细胞实验用量)或1mg R848(动物实验用量)，比例平衡实验见后。
[0037](3)将15mL离心管固定在盛有冰的200mL烧杯里，放进超声波细胞破碎仪里，以3s on/3s off的工作频率超声1分钟后，补加2mL 2.5％的PVA水溶液。
[0038](4)放入磁力搅拌转子，置于磁力搅拌器上，以500rpm/min的频率过夜搅拌至DCM完全挥发。
[0039](5)DCM挥发完后，4000rpm/min,10min,4℃离心去掉大颗粒(沉淀)，取上清至干净的1.5mL EP管里，14000rpm/min，30min，4℃，离心，弃上清，收集纳米颗粒沉淀，并用200μL双蒸水超声重悬,补加体积至1m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.载药用纳米载体，所述纳米载体的靶向配体包括特异性靶向M2型巨噬细胞的多肽。2.如权利要求1所述的纳米载体，其特征是，所述多肽的序列为YEQDPWGVKWWY，所述纳米载体可包含有用于助其减少被给药对象的网状内皮系统捕获的囊泡，载药用的递送材料被内置在该囊泡中；独立可选地，纳米载体载药用的递送材料为聚乳酸
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羟基乙酸共聚物PLGA。3.如权利要求2所述的纳米载体，其特征是，所述囊泡的膜表面含有CD47蛋白。4.如权利要求2或3所述的纳米载体，其特征是，所述囊泡源于高表达CD47蛋白细胞的细胞膜，如黑色素瘤细胞的细胞膜，优选为B16
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OVA细胞的细胞膜。5.如权利要求2所述的纳米载体，其特征是，所述多肽通过与其共价连接(如通过形成酰胺键而相连)的疏水链而嵌在囊泡膜外表，该疏水链可为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺DSPE碳链，如共价连接通过所述多肽与DSPE
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PEG
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NH2缩合实现，DSPE

【专利技术属性】
技术研发人员：朱平平，陈真真，张韵，陈亚兰，李佳浩，朱雪芹，王小惜，李柄豫，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：