一种羟胺及其盐的检测方法技术

本发明专利技术属分析化学领域，具体涉及一种羟胺及其盐的检测方法。在碱的存在下，待测样品中的羟胺或其盐在反应溶剂中与式(C)化合物发生反应生成式(D)化合物，衍生反应快速完成，通过液相色谱‑质谱联用仪对式(D)化合物进行检测，从而计算出羟胺或其盐的含量。本发明专利技术的检测方法高效、便捷、灵敏度高、专属性好、准确度高，特别适用于羟胺或其盐的限度低的样品的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种羟胺及其盐的检测方法
本专利技术涉及分析化学领域，具体涉及一种羟胺及其盐的检测方法。
技术介绍
盐酸羟胺主要用作还原剂和显像剂，有机合成中用于制备肟，也用作合成抗癌药(羟基脲)、磺胺药(新诺明)和农药(灭多威)的原料。近年来用于合成抗生素如：阿奇霉素，克拉霉素，罗红霉素等药物。羟胺及其盐具有很强的遗传毒性和致基因突变作用，检测其在药物中的残留、控制其限度是确保用药安全、有效，保证药物质量的一个重要方面。关于羟胺的检测，目前的方法有：共振光散射法、气相色谱法、液相色谱法、离子色谱法等。共振光散射法为常量光谱分析方法，对于微量物质无法达到检测的要求。衷明华发表的《共振光散射法测定盐酸羟胺》中公开了使用共振光散射法检测盐酸羟胺的方法，其检测限为0.04μg/ml，对于限度很低的样品，灵敏度无法达到要求，只适用于限度较高的样品的分析。丁宏伟发表的《利培酮中盐酸羟胺的柱前衍生化-GC法测定》公开了一种用气相色谱法检测盐酸羟胺的方法，但该方法检测限为1.85μg/ml，定量限为3.70μg/ml，对于限度很低的样品，灵敏度无法达到要求，只适用于限度较高的样品的分析。赵坦，毛亚南等人发表的《高效液相色谱法测定硝酸羟胺溶液含量》中公开了一种用液相色谱法检测硝酸羟胺的方法，该方法的检出限为82.78ng/g(即约为0.08μg/ml)，对于限度很低的样品，灵敏度无法达到要求，只适用于限度较高的样品的分析。潘思、施超欧等人发表的《离子色谱柱后补液-脉冲安培法检测米卡芬净钠中残留盐酸羟胺》中公开了一种用离子色谱法检测盐酸羟胺的方法，该方法检测限为0.012μg/ml，离子色谱(安培检测器)对样品基质及有机物的承受力较脆弱，对进样的溶液要求较高，样品前处理繁杂，适用于溶液中仅含少量有机物的体系，对于样品的检测要求较高。由于羟胺及其盐具有很强的遗传毒性和致基因突变作用，需要在药物中严格控制其含量在限度水平以下。对于日剂量大的药物，羟胺及其盐的控制限度低，当现有技术难以对羟胺及其盐限度低的样品进行定量检测时，需要一种方便简捷、灵敏度高的羟胺及其盐、羟胺衍生物的检测方法。
技术实现思路
本专利技术提供了一种羟胺及其盐的检测方法：在碱的存在下，待测样品中的羟胺或其盐在反应溶剂中与式(C)化合物发生反应生成式(D)化合物；再采用以十八烷基硅烷键合相作为固定相的色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，其中以含可挥发性酸的水溶液为流动相A，以有机溶剂作为流动相B；在液相色谱-质谱联用仪系统中进行梯度洗脱，并记录谱图；其中R选自取代的或未取代的C1-C30烷基、取代的或未取代的C1-C30氧烷基、取代的或未取代的C3-C10的环烷基、取代的或未取代的C6-C14芳基、取代的或未取代的C1-C9的杂芳基。在一些实施例中，所述式(C)化合物为N-苯基-4-哌啶酮。在一些实施例中，所述式(C)化合物为N-苄基-4-哌啶酮。在一些实施例中，所述式(C)化合物为N-乙基-4-哌啶酮。在一些实施例中，所述式(C)化合物为N-丙基-4-哌啶酮。在一些实施例中，所述式(C)化合物为N-丁基-4-哌啶酮。在一些实施例中，所述碱为氨水溶液。在一些实施例中，所述反应溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃、丙酮、异丙醇中至少一种。在一些实施例中，所述色谱柱为2.1*150mm，3.5μm。在一些实施例中，所述色谱柱为WatersXBridgeTMC18，2.1*150mm，3.5μm。在一些实施例中，所述可挥发性酸为甲酸。在一些实施例中，所述可挥发性酸为三氟乙酸。在一些实施例中，所述可挥发性酸为甲酸和三氟乙酸。在一些实施例中，所述可挥发性酸的体积含量为0.05％-0.2％。在一些实施例中，所述可挥发性酸的体积含量为0.1％。在一些实施例中，所述流动相的流速为0.1ml/min-0.5ml/min。在一些实施例中，所述流动相的流速为0.2ml/min-0.4ml/min。在一些实施例中，所述流动相的流速为0.3ml/min。在一些实施例中，所述梯度洗脱的洗脱程序见下表：在一些实施例中，所述式(D)化合物的检测条件为：色谱柱：WatersXBridgeTMC18，2.1*150mm，3.5μm；流动相A：0.1％甲酸水溶液；流动相B：乙腈；洗脱方式：梯度洗脱；流动相比例：流速：0.3mL/min；柱温：不控制；样品盘温度：不控制；进样量：1μL-10μL；检测器：质谱检测器；质谱条件：电喷雾离子源，正离子检测，SIM模式，提取离子数为衍生产物[M+H]+峰，m/z＝205.0，运行时间为5.00min-11.00min；干燥气温度为300℃-400℃；干燥气流速为10L/min-15L/min；雾化气压力为1500Torr-2320Torr；毛细管电压为2500V-3500V；峰宽为0.1min；增益因子1.0；碰撞诱导解离70V。在一些实施例中，所述进样量为2μL-8μL。在一些实施例中，所述进样量为3μL-5μL。在一些实施例中，所述进样量为4μL。在一些实施例中，所述干燥气温度为350℃。在一些实施例中，所述干燥气流速为12.0L/min。在一些实施例中，所述雾化气压力为1811Torr。在一些实施例中，所述毛细管电压为3000V。相比现有技术，本专利技术的优点为：灵敏度高、专属性好、准确度高，特别适用于羟胺或其盐的限度低的样品的检测。术语说明：本专利技术中，mg表示毫克，g表示克，％表示百分比，mm表示毫米，pH表示酸碱度，min表示分钟，h表示小时，℃表示摄氏度，HPLC表示高效液相色谱，MS表示质谱，Torr表示压强单位“托”，V表示电压单位“伏”，μL表示微升，μg表示微克，ppm表示百万分比，S/N表示信噪比，EP管为微量离心管，RSD表示相对标准偏差，N/A表示无数据，MΩ表示兆欧；APSTB03表示1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺，其CAS号为：253168-94-4。在本专利技术的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本专利技术的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。在本说明书的描述中，参考术语“一些实施方式”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本专利技术的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种羟胺及其盐的检测方法，其特征在于，在碱的存在下，待测样品中的羟胺或其盐在反应溶剂中与式(C)化合物发生反应生成式(D)化合物；采用以十八烷基硅烷键合相作为固定相的色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，其中以含可挥发性酸的水溶液为流动相A，以有机溶剂作为流动相B；在液相色谱-质谱联用仪系统中进行梯度洗脱；/n

【技术特征摘要】
1.一种羟胺及其盐的检测方法，其特征在于，在碱的存在下，待测样品中的羟胺或其盐在反应溶剂中与式(C)化合物发生反应生成式(D)化合物；采用以十八烷基硅烷键合相作为固定相的色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，其中以含可挥发性酸的水溶液为流动相A，以有机溶剂作为流动相B；在液相色谱-质谱联用仪系统中进行梯度洗脱；



其中R选自取代的或未取代的C1-C30烷基、取代的或未取代的C1-C30氧烷基、取代的或未取代的C3-C10的环烷基、取代的或未取代的C6-C14芳基、取代的或未取代的C1-C9的杂芳基。


2.根据权利要求1所述的方法，所述式(C)化合物为N-苯基-4-哌啶酮、N-苄基-4-哌啶酮、N-乙基-4-哌啶酮、N-丙基-4-哌啶酮或N-丁基-4-哌啶酮。


3.根据权利要求1所述的方法，所述碱为氨水溶液。


4.根据权利要求1所述的方法，所述反应溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃、丙酮、异丙醇中至少一种。


5.根据权利要求1所述的方法，所述色谱柱为2.1*150mm，3.5μm，或者所述色谱柱为WatersXBridgeTMC18，2.1*150mm，3.5μm。


6.根据权利要求1所述的方法，所述可挥发性酸选自甲酸和三氟乙酸中的至少一种。


7.根据权利要求1所述的方法，所述可挥发性酸在流动相A中的体积含量为0.05％-0.2％，或者所述可挥发性酸在流动相A中的体积含量为0...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊学武，陆秀丽，刘国柱，
申请(专利权)人：东莞市东阳光仿制药研发有限公司，广东东阳光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44