一种复合生物菌剂及其在防治水稻稻瘟病和促进水稻生长中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种复合生物菌剂及其在防治水稻稻瘟病和促进水稻生长中的应用，该复合生物菌剂RBG2包括解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌复合生物菌剂，具体地，采用解淀粉芽胞杆菌JC65和蜡质芽胞杆菌AT31，其菌株保藏号分别为：CGMCC No.4475、CGMCC No.3128。上述菌剂RBG2采用预定比例的2种细菌制备成混合制剂，该制剂中活菌总浓度为5×10

【技术实现步骤摘要】
一种复合生物菌剂及其在防治水稻稻瘟病和促进水稻生长中的应用
本专利技术涉及农业生物防治
，尤其涉及一种复合生物菌剂及其在防治水稻稻瘟病和促进水稻生长中的应用。
技术介绍
水稻(OryzasativaL.)作为一种谷类作物，在全世界拥有最广泛的消费。我国是以大米为主食的发展中国家，大米提供了20％的膳食蛋白质，水稻生产对我国的粮食安全尤其重要。水稻除了可以作为主食食用，在工业上及医药领域也发挥着很大的价值，因此在国民经济中同样具有举足轻重的作用。稻瘟病是水稻主要病害之一，常引起水稻大幅度减产，控制不当可导致颗粒无收。稻瘟病严重影响了水稻生产，降低了稻米产量及品质，严重威胁到国家的粮食安全。目前，稻瘟病害防治的主要措施还是使用化学药剂。尽管化学药剂可在一定程度上控制水稻稻瘟病，但是在杀灭病菌的同时，环境中的有益生物及土壤中的有益微生物也会受到化学药剂的损害。某些化学药剂的使用不当或滥用甚至会造成土壤污染和化学农药残留超标等一系列严重的后果。选育抗病品种和加强田间管理措施对防治稻瘟病害具有一定的作用。然而抗病品种选育周期长，加之稻瘟病菌小种分化繁多，抗性品系种植限制大且抗性易丧失。如何在不对环境造成负面影响的条件下有效控制稻瘟病的发生并提升水稻产量，是保障我国粮食安全并进一步实现乡村振兴过程中的卡脖子问题。生物防治避免了化学防治带来的一系列问题，与其他方法相比具有安全、有效、持久的特点。生防制剂对病害防治效果好，对人畜无毒，不污染环境，无残留；对病虫害的杀伤特异性强，不伤害天敌，有益生物，能保持生态平衡；生产原料和有效成分为天然产物易降解，可回归大自然，保证可持续发展；可用生物技术和基因工程的方法对微生物进行改良；多种因素和成分发挥作用，病原菌难以产生抗药性等众多优越性。因此，近年来利用生防微生物，尤其是生防芽胞杆菌，对田间稻瘟病进行防治已成为研究热点并形成多种产品。而生防菌株通过复配，能够起到扬长补短的作用，综合多种生防菌株优势，并进一步通过菌株之间相互作用提质增效。但目前对于防止水稻稻瘟病的复合菌剂鲜有报道。
技术实现思路
为了克服现有技术中的缺陷，本专利技术分离并筛选了两种生防菌株，其分别为解淀粉芽胞杆菌JC65和蜡质芽胞杆菌AT31，采用上述两种生防菌株制备的复合生物菌剂RBG2，绿色环保，可有效得防治稻瘟病并在没有稻瘟病自然爆发条件下促进水稻的生长及结实。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一个方面是提供一种复合生物菌剂(以RBG2表示)，其包括解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌；其中，以活菌数量计，所述解淀粉芽胞杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)和蜡质芽胞杆菌(Bacilluscereus)的配制比例为3:1～1:3。进一步地，以活菌数量计，所述解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌的配制比例为2:1～1:2，更优选配制比例为1:1。进一步地，所述解淀粉芽胞杆菌为JC65，其保藏编号为：CGMCCNo.4475；和/或，所述蜡质芽胞杆菌为AT31，其保藏编号为：CGMCCNo.3128。具体地，解淀粉芽胞杆菌JC65的分类命名为芽胞杆菌Bacillussp.，其保藏编号为CGMCCNo.4475，保藏日期为2010年12月15日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；蜡质芽胞杆菌AT31的分类命名为蜡状芽胞杆菌Bacilluscereus.，其保藏编号为CGMCCNo.3128，保藏日期为2009年06月18日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏单位地址为北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所。进一步地，所述复合生物菌剂的活菌总浓度为5×109～1×1010CFU/mL。更进一步地，所述复合生物菌剂稀释至1×107～9×107CFU/mL进行应用，更优选稀释至5×107CFU/mL进行应用。本专利技术的第二个方面是提供一种含有任一上述的复合生物菌剂的生防菌剂或由任一上述的复合生物菌剂制备的生防菌剂。进一步地，所述生防菌剂还包括农药学上可接受的助剂，包括但不限于：分散剂、稳定剂、载体等，可选的，上述生防菌剂也可包括其他类型的生防菌株。上述复合生物菌剂或生防菌剂的剂型包括但不限于：液体制剂、固体制剂(如粉剂)等。更进一步地，所述生防菌剂由所述复合生物菌剂和菌体保藏液进行制备，菌体保藏液的组成及含量为本领域常规使用形式。本专利技术的第三个方面是提供一种任一上述的复合生物菌剂的制备方法，其包括步骤：将解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌分别进行培养，以获得解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌的发酵液，将两种发酵液分别稀释至预定浓度后以预定比例进行混合复配，获得所述复合生物菌剂。进一步地，所述发酵液的稀释浓度为5×109～1×1010CFU/mL；以活菌数量计，所述解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌的发酵液的配制比例为3:1～1:3，优选2:1～1:2，更优选1:1。进一步地，所述解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌培养过程中使用的培养基或培养液的配方包括：氯化钠10g/L、胰蛋白胨10g/L、酵母浸粉5g/L，高温灭菌前调节pH值为7.2。具体地，所述配方为LB配方。进一步地，所述培养方法具体步骤包括：将JC65和AT31菌株分别在平板上划线，25～32℃恒温培养箱中培养12-18h，待长出单菌落后，挑取单菌落接入LB培养液，置于25～32℃，150～250rpm的摇床中培养，制成种子液；将各自的种子液分别接种于LB培养液里，置于25～32℃，150～250rpm摇床中培养36～60h，获得JC65和AT31菌株的发酵液；将2种发酵液均稀释至5×109～1×1010CFU/mL以1:3～3:1比例均匀混合复配，获得复合生物菌剂RBG2。具体地，将JC65和AT31菌株分别在平板上划线，28℃恒温培养箱中培养14-16h，待长出单菌落后，挑取单菌落接入含有5mL的LB培养液的试管中，置于28℃，200rpm的摇床中培养，制成种子液；以1wt％接种量将种子液分别接种于装有500mL的LB培养液的三角瓶里，置于28℃，200rpm摇床中培养48h，制得发酵液，将2种发酵液稀释至5×109～1×1010CFU/mL以1:1比例均匀混合复配，获得复合生物菌剂RBG2。本专利技术的第四个方面是提供一种任一上述的复合生物菌剂或任一上述的生防菌剂在防治水稻病害和/或促进水稻生长中的应用。进一步地，所述水稻病害包括水稻稻瘟病。本专利技术的第五个方面是提供一种防治水稻病害和/或促进水稻生长的方法，其包括步骤：采用任一上述的复合生物菌剂或任一上述的生防菌剂进行稀释浸种或秧盘喷施，插秧后灌根。进一步地，在上述方法中，还包括步骤：在水稻病害关键防治节点将所述复合生物菌剂或生防菌剂稀释后喷施使用。进一步地，所述复合生物菌剂或生防菌剂采用清水进行稀释，稀释后的菌液中的活菌量为1×107～9×107CF本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合生物菌剂，其特征在于，所述复合生物菌剂包括解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌；其中，以活菌数量计，所述解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌的配制比例为3:1～1:3。/n

【技术特征摘要】
1.一种复合生物菌剂，其特征在于，所述复合生物菌剂包括解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌；其中，以活菌数量计，所述解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌的配制比例为3:1～1:3。


2.根据权利要求1所述的复合生物菌剂，其特征在于，所述解淀粉芽胞杆菌为JC65，其保藏编号为：CGMCCNo.4475；和/或，所述蜡质芽胞杆菌为AT31，其保藏编号为：CGMCCNo.3128。


3.根据权利要求1所述的复合生物菌剂，其特征在于，所述复合生物菌剂的活菌总浓度为5×109～1×1010CFU/mL。


4.一种含有权利要求1～3中任一项所述的复合生物菌剂的生防菌剂或由权利要求1～3中任一项所述的复合生物菌剂制备的生防菌剂。


5.一种如权利要求1～3中任一项所述的复合生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括步骤：将解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌分别进行培养，以获得解淀粉芽胞杆菌和蜡质芽胞杆菌的发酵液，将两种...

【专利技术属性】
技术研发人员：俞仪阳，蒋春号，金雨，牛冬冬，郭坚华，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32