一种含有凝结芽孢杆菌HALO178的复合益生菌和饲料添加剂制造技术

本发明专利技术提供了一种含有凝结芽孢杆菌HALO178的复合益生菌，包括以下组分：凝结芽孢杆菌HALO178菌粉、丁酸梭菌粉、枯草芽孢杆菌粉、地衣芽孢杆菌粉；所述凝结芽孢杆菌HALO178其于2021年1月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.21689。本发明专利技术提供了包括所述复合益生菌的饲料添加剂。本发明专利技术复合益生菌克服了传统乳酸菌难以在常温下贮存的缺点，为下游饲料、动保企业提供了一种厌氧、兼性、好氧益生菌互相结合、互相协同、互相促进的益生菌制剂。本发明专利技术提供的包含HALO178凝结芽孢杆菌的饲料添加剂，利用了往常丢弃的罗汉果渣，抑制动物肠道致病菌，降低肠道疾病的发生率，提高农场经济效益，从而起到了替代抗生素的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种含有凝结芽孢杆菌HALO178的复合益生菌和饲料添加剂
本专利技术涉及微生物学和益生菌领域，具体涉及一种含有凝结芽孢杆菌HALO178的复合益生菌和饲料添加剂。
技术介绍
随着我国经济的不断发展，人们对饮食健康和食品安全的需求不断提高，以乳酸菌为主的益生菌已经为消费者所熟知。益生菌是一类能够改善有机体胃肠道生态平衡，能提高免疫力和新陈代谢，提高对营养物质的吸收和利用，是一种有益食品或饲料添加剂。目前市场上的活菌型益生菌基本都需要在全冷链条件下运输、贮存和上架，保质期一般不超过1个月，常温食品中基本上不含有活菌。而当今食品行业对益生菌的需求越来越大，对益生菌可适用的范围提出更多的要求，尤其是可以适应烘焙、压片、造粒、喷雾、开水冲饮等应用场景的益生菌已经成为市场迫切需求。另外，即使是冷链食品中的普通乳酸菌在进入消化道后，经过胃中胃酸、胆汁中胆汁酸钠环境因素的影响，存活率往往极低，最终对肠道健康的帮助十分有限。其次，在畜牧养殖业中，由于抗生素过量使用带来的负面影响，人们逐渐寻找含有益生菌的饲料来替代常规的促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)。在食品和饲料中添加益生菌及其制剂是目前大健康产业发展的趋势，利用益生菌来替代抗生素是一个走可持续发展的优质解决方案，对食品、农牧行业有着重大的意义。以往在农牧生产过程中，为了提高生产效率，养殖和饲料从业单位普遍在动物饲料中添加促生长类药物，例如抗生素，但在抗生素的滥用过程中，不可避免会出现耐药性强的超级细菌，直接对人类的生物安全构成威胁。根据中国农业农村部公告第194号，2020年7月1日起，饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂(中药类除外)的商品饲料。在饲料全面禁药后，寻找稳定、高效的替代方案成了农牧行业的共同目标。复合益生菌是饲料添加剂中代替抗生素的很好的代替品。科学合理的复合益生菌制剂配伍可以更好的发挥各益生菌的特点，达到相互补充、协同促进的效果，在饲料中添加后可替代抗生素，起到降低料肉比、缩短养殖周期、降低肠道疾病发病率、改善棚舍异味等作用。人们已经对复合益生菌制剂展开相关研究，例如：1)申请号202010371335.X，公开了一种耐胆盐耐胃酸益生菌制剂及其制备方法和应用，所述益生菌制剂包括四层结构，分别为核心多孔糊精结构、油包水结构、耐胆盐结构和耐胃酸结构，制备时，通过先制备益生菌乳化液，再制备益生菌油包水反胶束乳液，接着制备耐胆盐益生菌胶束乳液，最后制备耐胃酸益生菌胶束乳液。2)申请号202010651991.5，公开了一种复合型益生菌制剂及其制备方法和应用。所述复合型益生菌制剂包括益生菌粉、鱿鱼膏、蚯蚓提取物、二甲基-β-丙酸噻亭、大豆寡糖、螺旋藻粉。3)申请号202011255449.4，提供了一种仔猪腹泻益生菌制剂，其按重量份计，由如下组分组成：枯草芽孢杆菌的冻干菌粉10～15份、地衣芽孢杆菌的冻干菌粉4～6份，艾叶发酵冻干粉1～3份；所述枯草芽孢杆菌的保藏号为CGMCCNo.9660，所述枯草芽孢杆菌的冻干菌粉中，活菌含量≥40亿个/g；所述地衣芽孢杆菌的保藏号为CGMCCNo.5686，所述地衣芽孢杆菌的冻干菌粉中，活菌含量≥50亿个/g。该专利提供了制备上述制剂的方法和在制备防止仔猪腹泻方面药物的应用，能显著的降低仔猪腹泻的发生率。4)申请号202011595609.X，提供了一种具有增强免疫功能的多效益生菌制剂及其应用。所述多效益生菌制剂包括：药用植物提取物和益生菌剂；所述药用植物提取物包括如下重量份数的组分：姜黄提取物10～20份、朝鲜蓟提取物10～15份、铁皮石斛提取物5～10份和黄芪提取物5～10份；所述益生菌剂包括如下组分：保加利亚乳杆菌剂、动物双歧杆菌剂、瑞士乳杆菌剂、鼠李糖乳杆菌剂、副干酪乳杆菌剂、干酪乳杆菌剂和罗伊氏乳杆菌剂。所述多效益生菌制剂可以有效改善益生菌定植抗性、调节肠道微生态环境、增强机体免疫力，具有减少胃肠道等消化系统疾病、抗皮炎、抗肿瘤、降血脂、降胆固醇的作用。但是，优异的复合益生菌制剂在益生菌的需氧类型、产酶特性，配方中的生长因子、效果保持剂上的选择尤为重要，选择科学合理的复合益生菌制剂配伍可以更好的发挥各益生菌的特点，达到相互补充、协同促进的效果，不仅可以起到降低料肉比、缩短养殖周期、降低肠道疾病发病率、改善棚舍异味等作用，还能降低养殖场同类产品的使用成本。凝结芽孢杆菌是目前发现的唯一一种孢子型乳酸菌，具有优异的生物学特征，已经广泛应用到养殖业。其具有良好抗逆性，通过产生的乳酸来抑制肠道病原菌的繁殖，进而维持肠道的健康。人们已经对凝结芽孢杆菌展开相关研究，例如：1)申请号CN202010361948.5，其公开了一株凝结芽孢杆菌(Bacilluscoagulans)JA845及其应用，其中该凝结芽孢杆菌JA845具有多种功效，特别是调控代谢综合征大鼠的体质、改善机体的胰岛素抵抗、降低血浆中血脂含量、缓解肝损伤以及降低脂质代谢蛋白SREBP的含量等，从而能够预防和治疗代谢综合征。2)申请号CN201310093459.6，其公开了凝结芽孢杆菌HM-09，保藏号为CGMCCNo.6729，其中所述菌株能够调节微生态平衡、增强免疫功能，从而促进育肥猪对饲料的消化吸收。3)申请号CN201510649951.6，其公开了一种凝结芽孢杆菌菌株FM603，其保藏号为CGMCCNO.10221。该菌株能够产生细菌素类抗菌物质，对多种革兰氏阳性病原菌具有抗菌活性。所述凝结芽孢杆菌菌株的发酵物能够提高仔猪采食量和日增重、肉鸡日增重和血清溶菌酶含量，降低料肉比和死亡率。4)申请号CN201611025225.8，其公开了一株拮抗链球菌的凝结芽孢杆菌及其应用，其中该菌株可制成菌粉添加到动物饲料中，且可有效防治链球菌病。该菌株的发酵液可以用作养殖环境改良剂来降低养殖水体中链球菌的数量，同时在低氧条件下还可清除水体中的亚硝酸盐。5)申请号CN201911113013.9，其公开了一种凝结芽孢杆菌L-H7及其应用，其中该菌株L-H7能够耐受高浓度的氯化钠、亚硝酸钠，有效抑制食源性致病菌的生长，且蛋白酶、酯酶、糖苷酶等活性较强。在消化环境中的凝结芽孢杆菌L-H7的存活率更高，从而有效发挥益生功效。然而，上述专利申请并没有很好地解决凝结芽孢杆菌菌株在食品和饲料添加剂领域实际复杂环境下的有效存活问题。在实际生产应用中，生产加工环境带来的高温、人和动物消化道中胃酸的低pH和胆汁中的胆酸盐均会极大影响凝结芽孢杆菌的有效存活，因此在实际应用中难以达到实验室中取得的效果。因此，如何筛选得到一株具有强抗逆性能的凝结芽孢杆菌并实现其高密度发酵，对于解决凝结芽孢杆菌在复杂环境下的有效存活问题显得尤为重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对上述现有技术的不足，本专利技术提供了一种含有含有凝结芽孢杆菌HALO178的复合益生菌，所述凝结芽孢杆菌HALO178是一株具有强抗逆和高产乳酸性能的芽孢乳酸菌，相比传统需要全冷链运输和贮存的乳酸菌具有显著优势。本专利技术还针对性了选择了好氧菌、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有凝结芽孢杆菌HALO178的复合益生菌，包括以下组分：凝结芽孢杆菌HALO178菌粉、丁酸梭菌粉、枯草芽孢杆菌粉、地衣芽孢杆菌粉；所述凝结芽孢杆菌HALO178是于2021年1月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.21689。/n

【技术特征摘要】
1.一种含有凝结芽孢杆菌HALO178的复合益生菌，包括以下组分：凝结芽孢杆菌HALO178菌粉、丁酸梭菌粉、枯草芽孢杆菌粉、地衣芽孢杆菌粉；所述凝结芽孢杆菌HALO178是于2021年1月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.21689。


2.根据权利要求1所述的复合益生菌，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌HALO178的16SrDNA的序列如序列表中SEQIDNO:1所示。


3.根据权利要求1所述的复合益生菌，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌HALO178菌粉，每克所述微生物菌剂的芽胞含量1.2×1011-2.5×1011CFU，且芽孢率为至少98％。


4.根据权利要求1所述的复合益生菌，其特征在于，所述复合益生菌，包括以下质量份的组分：凝结芽孢杆菌HALO178菌粉1～5份、枯草芽孢杆菌菌粉1～5份、地衣芽孢杆菌菌粉1～5份、丁酸梭菌菌粉5～10份。优选地，所述复合益生菌，包括以下质量份的组分：凝结芽孢杆菌HALO178菌粉1～2份、枯草芽孢杆菌菌粉1～3份、地衣芽孢杆菌菌粉2～4份、丁酸梭菌菌粉5～10份。


5.根据权利要求1所述的复合益生菌，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌HALO178菌株是通过包括以下步骤的制备方法得到：
(S1)凝结芽孢杆菌纯菌株分离：泡菜研磨的浆料经过反复稀释、加热水浴，碳酸钙平板培养，挑取产生溶钙透明圈的单菌落，直到平板划线培养得到的菌落形态一致进行进一步筛选；
(S2)强抗逆性凝结芽孢杆菌菌株的筛选：进行极限选择性压力筛选，在不利于凝结芽孢杆菌生存的极限选择性压力条件下，在筛选组选择存活率的各单菌落；
(S3)：重复步骤(S2)的筛选，直倒在极限选择性压力条件下培养均未能提高存活率百分比，挑取在筛选组存活的各单菌落进行菌种保藏并编号；
(S4)：对(S3)的菌种进行摇瓶培养，选取产乳酸能力最强的菌株进行菌种保藏并编号；
(S5)：将步骤(S4)所得强抗逆性凝结芽孢杆菌菌株进行16SrDNA序列同源性分析验证后，进行菌种保藏。该菌种并送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏编号为CGMCCNo.21689。


6.根据权利要求5所述的复合益生菌，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌HALO178的制备方法包括以下步骤：
(S1)凝结芽孢杆菌纯菌株分离：取泡菜研磨匀浆，无菌生理盐水稀释，70-90℃水浴5-20min，碳酸钙平板培养24～36h，挑取产生溶钙透明圈的单菌落，所得单菌落反复进行步骤(S1)的无菌生理盐水稀释、水浴、碳酸钙平板培养、挑取单菌落，直到平板划线培养得到的菌落形态一致后，得到纯菌株使用MRS固体培养基进行斜面保藏；
(S2)强抗逆性凝结芽孢杆菌菌株的筛选：将步骤(S1)所得凝结芽孢杆菌菌株进行极限选择性...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘笑尘，李鑫，
申请(专利权)人：长沙和光生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43