抗菌肽BIMix及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗菌肽BIMix及其应用，属于生物技术领域，所述抗菌肽包含29个氨基酸残基，属于α

【技术实现步骤摘要】
抗菌肽BIMix及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种抗菌肽BIMix及其应用。

技术介绍

[0002]自抗生素大规模使用以来，细菌耐药不断地向多重化与复杂化迅猛发展，其中包括毒力很强的致病菌如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureu s)，它是一种能够引起多种化脓性感染的病原菌，因具有较高的临床分离率和突出的耐药性而被人们广泛关注，其中以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin
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resistant Staphylococcus aureus,MRSA)为最典型代表，在治疗MRSA感染时,临床上常选用万古霉素作为主要的药物，然而细菌对万古霉素的敏感性逐渐降低，并且由于受到生物膜系统的阻碍，这类药物很难穿透到靶向器官和组织的细胞中发挥作用。
[0003]细菌生物被膜作为细菌诱导产生高度耐药性的主要方式，并普遍伴随着临床感染发生的全过程。细菌生物被膜的形成是细菌对抗环境压力而表现出的一种通过自身分泌蛋白，游离核酸和多糖物质而形成防御屏障的生理行为，可以协助细菌对抗大多数抗菌药物，是造成细菌耐药的重要原因之一，因细菌生物被膜(Biofilm,BF)形成而引发的顽固性感染和高度耐药问题，已愈发不容忽视。据报道，成熟被膜菌可耐受的最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concent ration,MIC)浓度是浮游菌的10～1000倍，可见，只要生物被膜不被清除，对药物高度耐受的细菌便会长期存在，引起的感染也就迁延不愈。
[0004]由于生物被膜可以保护细菌在恶劣环境中生存，常规的抗生素和杀菌剂不能穿透胞外基质，导致细菌对抗生素和杀菌剂敏感性下降，抗菌肽作为有机体中广泛分布的抗菌活性物质，因不易诱导细菌产生耐受性、生物相容性好等优点而被广泛应用于细菌感染的预防与治疗。在过去的几十年中，研究者们尝试过不同的策略提高抗菌肽作为治疗用药的有效性，如专利号为CN202010507155.X的中国专利技术专利公开了一种天然抗菌肽，该抗菌肽与柠檬酸按一定比例混合后可在体外抑制大肠杆菌，上述抗菌肽需与EDTA或柠檬酸钠配合使用才能达到较好的杀菌效果，难以直接对细菌进行杀灭，专利号为CN201910510193.8的中国专利技术，以金黄色葡萄球菌的agr系统调节分泌的自诱导抗菌肽为基础改造设计的抗菌肽S2对金黄色葡萄球菌表现出杀灭作用，上述现有技术中的抗菌肽均未公开抗菌肽抑制细菌生物被膜的形成，因此有必要提供一种新型抗菌肽，以缓解细菌耐药性的发生与发展。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种抗菌肽BIMix及其应用，目的在于解决常规抗生素药物的不足之处，有效缓解细菌耐药性的问题。
[0006]本专利技术解决其技术问题采用的技术方案如下：
[0007]一种抗菌肽BIMix，所述抗菌肽BIMix的氨基酸序列为：GLKVIRVKIRQFKRQLKRIKFVRIKNRKP,如SEQ ID NO.1所示。
[0008]优选的，所述抗菌肽BIMix包含29个氨基酸残基，属于α
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螺旋型抗菌肽。
[0009]优选的，所述抗菌肽BIMix的N端富集L(Leu)、V(Val)、I(Ile)等强疏水性氨基酸，C端以K(Lys)及R(Arg)交替形成正电性结合区域。
[0010]上述抗菌肽BIMix的应用，用于杀灭细菌并抑制细菌生物被膜的形成。
[0011]优选的，所述细菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)、大肠杆菌(E.coli)。
[0012]一种抗菌药物，含有上述抗菌肽BIMix。
[0013]本专利技术的有益效果为：本专利技术提供设计的抗菌肽BIMix属于α
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螺旋型抗菌肽，稳定性好、合成方便，通过抗菌肽数据库(DRAMP、DBAASP、DAPD)检索后未发现有与所述抗菌肽BIMix相同的多肽，该抗菌肽BIMix属于新型抗菌肽。所述抗菌肽BIMix能单独作用直接杀灭细菌，包括对金黄色葡萄球菌、耐药的金黄色葡萄球菌及大肠杆菌都有较强的杀灭作用，并且所述抗菌肽BIMix能够显著抑制细菌生物被膜的形成，因此本专利技术的抗菌肽BIMix可作为新型抗菌药物使用，具有广阔的应用前景。
附图说明
[0014]图1是抗菌肽BIMix体外杀菌(金黄色葡萄球菌)效果图。
[0015]图2是抗菌肽BIMix体外杀菌(大肠杆菌)效果图。
[0016]图3是透射电镜下抗菌肽BIMix与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC33591作用后细胞形态变化示意图。
[0017]图4是透射电镜下抗菌肽BIMix与甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC29213作用后细胞形态变化示意图。
[0018]图5是透射电镜下抗菌肽BIMix与大肠杆菌BL21(DE3)作用后细胞形态变化示意图。
[0019]图6是透射电镜下抗菌肽BIMix与大肠杆菌DH5α作用后细胞形态变化示意图。
[0020]图7是抗菌肽BIMix对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌标准菌株的时间
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杀菌曲线图。
[0021]图8是抗菌肽BIMix对金黄色葡萄球菌临床分离菌株的时间
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杀菌曲线图。
[0022]图9是不同温度处理后抗菌肽BIMix体外杀菌活性图，其中：A为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC33591，B为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC29213，C为金黄色葡萄球菌临床分离菌株WLD11，D为金黄色葡萄球菌临床分离菌株WLD10，E为金黄色葡萄球菌临床分离菌株JY21，F为金黄色葡萄球菌临床分离菌株JY45。
[0023]图10是抗菌肽BIMix热稳定性菌落计数试验。
[0024]图11是抗菌肽BIMix对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC33591生物被膜形成的影响。
[0025]图12是抗菌肽BIMix对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC33591生物被膜的抑制情况。
[0026]图13是抗菌肽BIMix对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC29213生物被膜形成的影响。
[0027]图14是抗菌肽BIMix对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC29213生物被膜的抑制情况。
BL21(DE3)及E.coli DH5α)均稀释至1
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105cfu/mL，在96孔板中每孔加入100μL上述菌液，在金黄色葡萄球菌中添加抗菌肽BIMix溶液至终浓度分别为0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5μM，而大肠杆菌中添加的抗菌肽BIMix终浓度增至7.5μM进行试验，将96孔板置于37℃温箱中孵育，观察孔内液体浑浊情况，以完全能抑制细菌生长的浓度为MIC值。
[0037](2)最小杀菌浓度(MBC)的测定
[0038]将培养本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽BIMix，其特征在于：所述抗菌肽BIMix的氨基酸序列为：GLKVIRVKIRQFKRQLKRIKFVRIKNRKP，如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的抗菌肽BIMix，其特征在于：所述抗菌肽BIMix包含29个氨基酸残基，属于α
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螺旋型抗菌肽。3.如权利要求1所述的抗菌肽BIMix，其特征在于：所述抗菌肽BIMix的N端富集L(Leu)、V(Val)、I(Ile)等强疏水性氨基酸，C...

【专利技术属性】
技术研发人员：王桂琴，马强，马靓，李娜，毛彦妮，康馨匀，王鑫，
申请(专利权)人：宁夏大学，
类型：发明
国别省市：