摇动培养促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基及方法技术

本发明专利技术提出了促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基及方法。所述培养基包括：基础培养基；血小板生成素；重组人干细胞因子；白介素

【技术实现步骤摘要】
摇动培养促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基及方法


[0001]本专利技术涉及生物工程领域。具体地，本专利技术涉及摇动培养促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基及方法。

技术介绍

[0002]血小板是血液中的有形成分，具有黏附、聚集和释放的功能，参与止血、维持血管壁完整、凝血和炎症反应，在疾病发展过程中扮演重要角色。多种原因可导致血小板减少，如肿瘤、再生障碍性贫血、血小板减少性紫瘫等，而血小板输注常作为辅助支持治疗的手段。造血干/祖细胞具有自我更新和多向分化潜能，体外模拟或部分模拟体内的造血过程能够使其定向诱导分化为巨核系细胞，可作为治疗血小板性疾病的新途径，以满足临床上对血小板的迫切需求。
[0003]由于脐带血中含有大量不成熟、免疫功低、增殖能力强的造血干细胞，采集对供者无害、无伦理、易于获得等可作为造血干细胞重要组织来源。
[0004]然而，目前的促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的体系还存在增殖慢、诱导分化效率低等问题。因此，仍需要研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出了一种促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基及方法，利用该培养基可以有效促进造血干细胞向巨核系细胞诱导分化，提高分化效率、巨核系细胞的得率和活性，具有广泛的应用前景。
[0006]为此，在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基。根据本专利技术的实施例，所述培养基包括：基础培养基；血小板生成素；重组人干细胞因子；白介素
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3；白介素
‑
6；泊洛沙姆188；以及芳香烃受体拮抗剂。
[0007]根据本专利技术实施例的培养基中，芳香烃受体拮抗剂(SR1)和泊洛沙姆188(P188)联用可以促进造血干细胞增值和巨核系细胞的诱导分化，由此，在含有血小板生成素(TPO)、重组人干细胞因子(SCF)、白介素
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3(IL
‑
3)、白介素
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6(IL
‑
6)的基础培养基中复配P188和SR1，可以有效促进造血干细胞的扩增并诱导分化为巨核系细胞，提高分化效率、巨核系细胞的得率和活性。
[0008]根据本专利技术的实施例，上述促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基还可以具有下列附加技术特征：
[0009]根据本专利技术的实施例，所述血小板生成素的浓度为10～200ng/mL，优选30～70ng/mL；所述重组人干细胞因子的浓度为10～200ng/mL，优选30～70ng/mL；所述白介素
‑
3的浓度为5～60ng/mL，优选10～30ng/mL；所述白介素
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6的浓度为10～150ng/mL，优选30～70ng/mL；所述泊洛沙姆188的浓度为0.02～3mg/mL，优选0.5～1.5mg/mL；所述芳香烃受体拮抗剂
的浓度为0.2～10μM，优选0.5～1.5μM。
[0010]根据本专利技术的实施例，所述基础培养基选自stemspan无血清培养基。
[0011]在本专利技术的另一方面，本专利技术提出了一种促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：将单个核细胞接种于初始培养基中进行培养，以便获得巨核系细胞；所述初始培养基选自前面所述培养基。利用根据本专利技术实施例的方法培养所述单个核细胞，能够有效促进造血干细胞向巨核系细胞诱导分化，操作简单、成本低、诱导分化效率高。
[0012]根据本专利技术的实施例，所述培养是在35～39℃及3～7体积％CO2下进行10～17天，优选12～14天。
[0013]根据本专利技术的实施例，在培养期间的第5～9天时弃去部分培养基，再补加新鲜培养基，优选5～7天；所述新鲜培养基与所述初始培养基的组分(种类)相同，所述新鲜培养基中泊洛沙姆188和芳香烃受体拮抗剂的浓度与初始培养基中对应的浓度相同，其余各组分为初始培养基中对应的各组分浓度的0.5～4倍。
[0014]根据本专利技术的实施例，所述培养是在G
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Rex培养装置中摇床进行。
[0015]根据本专利技术的实施例，所述摇床的转速为70～120rpm。
[0016]根据本专利技术的实施例，所述单个核细胞选自脐带血单个核细胞。
[0017]根据本专利技术的实施例，所述脐带血单个核细胞是通过下列方式获得的：将脐带血与羟乙基淀粉混合，静置，收集上清液，将所述上清液离心，收集细胞沉淀；所述细胞沉淀重悬于生理盐水中，添加淋巴细胞分离液，离心，收集细胞沉淀，获得脐血单个核细胞。
[0018]根据本专利技术的实施例，所述脐带血单个核细胞的接种量为1
×
105个/cm2～10
×
105个/cm2。
[0019]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0020]本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
[0021]图1显示了根据本专利技术一个实施例的体外诱导的巨核系细胞数随诱导时间的变化图；
[0022]图2显示了根据本专利技术一个实施例的体外诱导的巨核系细胞数随诱导时间的变化图，其中A：st36PSR1静置组；B：st36PSR1摇动组；C：st36PSR1+GM
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CSF+IL
‑
11静置组；D：st36PSR1+GM
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CSF+IL
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11摇动组；
[0023]图3显示了根据本专利技术一个实施例的体外诱导12天巨核系细胞表型检测情况示意图，其中A：st36PSR1静置组；B：st36PSR1摇动组；C：st36PSR1+GM
‑
CSF+IL
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11静置组；D：st36PSR1+GM
‑
CSF+IL
‑
11摇动组。
具体实施方式
[0024]下面详细描述本专利技术的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0025]需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本专利技术的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
[0026]本专利技术提出了促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基、促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的方法，下面将分别对其进行详细描述。
[0027]促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基
[0028]在本专利技术的一个方面，本专利技术提出一种促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基。根据本专利技术的实施例，该培养基包括：基础培养基；血小板生成素；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的培养基，其特征在于，包括：基础培养基；血小板生成素；重组人干细胞因子；白介素
‑
3；白介素
‑
6；泊洛沙姆188；以及芳香烃受体拮抗剂。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述血小板生成素的浓度为10～200ng/mL，优选30～70ng/mL；所述重组人干细胞因子的浓度为10～200ng/mL，优选30～70ng/mL；所述白介素
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3的浓度为5～60ng/mL，优选10～30ng/mL；所述白介素
‑
6的浓度为10～150ng/mL，优选30～70ng/mL；所述泊洛沙姆188的浓度为0.02～3mg/mL，优选0.5～1.5mg/mL；所述芳香烃受体拮抗剂的浓度为0.2～10μM，优选0.5～1.5μM；任选地，所述基础培养基选自stemspan无血清培养基。3.一种促进造血干细胞诱导分化为巨核系细胞的方法，其特征在于，包括：将单个核细胞接种于初始培养基中进行培养，以便获得巨核系细胞；所述初始培养基选自权利要求1或2所述培养基。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述培养是在35～3...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴雪涛，岳文，陈琳，李艳华，习佳飞，姚海雷，刘晓丹，李雪，吕洋，范增，何丽娟，谢小燕，张博文，南雪，林玉环，
申请(专利权)人：华南生物医药研究院，
类型：发明
国别省市：