检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条及制备方法技术

本发明专利技术公开一种检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条及制备方法。试纸条包括PVC板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、T线和C线，T线为检测线，C线为质控线；PVC板的一端布置有样品垫，PVC板的另一端布置有吸水垫，从样品垫到吸水垫方向上的PVC板上依次布置金标垫和硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上布置有T线和C线，试纸条用于检测土壤中重金属镉时，金标垫上包被胶体金标记的镉单克隆抗体，T线上包被镉离子抗原(Cd

【技术实现步骤摘要】
检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条及制备方法


[0001]本专利技术属于环境检测领域，具体涉及一种检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条及制备方法。
技术背景
[0002]镉广泛存在于自然界中，通常以硫镉矿形式存在。重金属镉是一种毒性强烈的元素，在1974年被联合国环境规划署定为重点污染物。土壤中的镉有水可溶性镉和水不可溶性镉，两者在一定条件下可相互转化，其中以离子态或结合态存在的镉能被作物吸收，对生物有危害性。随着工业发展，农用化学物质种类和数量的增加，重金属污染的土壤面积逐年增大。土壤环境中重金属污染越来越严重，并通过食物链对食品安全构成威胁，进入人体会危害人类生命健康。当重金属镉进入人体后能引发中毒反应，急性中毒表现如恶心、流涎、呕吐、腹痛、腹泻、继而引发中枢神经中毒症状严重者导致虚脱死亡。慢性中毒使肾功能遭到破坏，引起肠胃炎和贫血等症状，骨骼中积累过多镉易引发癌症。2018年颁布的《土壤环境质量农用地土壤污染分线管控标准(试行)》中污染物镉的限量标准为0.3～0.8mg/kg。
[0003]传统的重金属镉离子检测方法主要有紫外风光分度法(UV)，火焰原子吸收法(FASS)、石墨炉原子吸收法(GF
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AAS)、电感耦合等离子体质谱法(ICP
‑
MS)和阳极溶出伏安法(ASV)、电感耦合等离子体原子发射光谱法以及各种方法的连用。尽管这些方法准确度高，灵敏度高，但设备昂贵、费时费力、需要专业技术人员操作，并且难以实现快速现场检测。急需建立一种能够快速、稳定的检测样品镉离子的方法。目前国内外不少报道，重金属镉的ELISA具有显著提高检测效率和检测灵敏度的能力。尽管与其他方法相比大大缩短了检测时间，需要配合仪器使用，简便性与实用性较差，无法满足快速现场检测。因此开发一种灵敏度高、操作简单的定量或半定量的快速检测重金属镉离子的试剂盒具有较大的市场意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条及制备方法，该检测试纸条具有半定量检测、检测时间短、特异性好，成本低等优点。
[0005]本专利技术的技术方案是：
[0006]一、一种检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条
[0007]试纸条包括PVC板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、T线和C线，C线为质控线，T线为检测线；PVC板的一端布置有样品垫，作为待检样品的区域，，PVC板的另一端布置有吸水垫，作为手持部分，从样品垫到吸水垫方向上的PVC板上依次布置金标垫和硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上布置有T线和C线，靠近吸水垫一端的硝酸纤维素膜上布置有C线，靠近金标垫一端的硝酸纤维素膜上布置有T线；所述的试纸条用于检测土壤中重金属镉时，金标垫上包被胶体金标记的镉单克隆抗体，硝酸纤维素膜上的T线上包被镉离子抗原；C线上包被山羊抗小鼠IgG抗体，样品垫上滴加待测液。金标垫采用玻璃纤维膜制备。
[0008]所述胶体金标记的镉单克隆抗体的浓度为0.05～0.1mg/mL，金标垫上包被胶体金标记的镉单克隆抗体的量为1～2μl/cm。
[0009]所述金标垫上的胶体金的直径为20～40nm。
[0010]所述的金标垫采用玻璃纤维膜制备。
[0011]所述T线检测线靠近金标垫，C线质控线靠近吸水垫，检测线和质控线的间隔为0.6cm。
[0012]所述镉离子抗原的浓度为0.1～1mg/mL，T线上包被镉离子抗原的量为1～2μl/cm。
[0013]所述山羊抗小鼠IgG抗体的浓度为0.4～1mg/mL，C线上包被山羊抗小鼠IgG抗体的量为1～2μl/cm。
[0014]所述的待测液的处理方法为：采用样品提取液对土壤进行提取后，再使用样品稀释液对提取的土壤进行稀释后获得待测液，即待检测土壤液。
[0015]所述的样品提取液为0.3mol/L～1mol/L的硝酸溶液；样品稀释液包括0.01mol/L～0.05mol/L的乙二胺四乙酸(EDTA)、0.5mol/L的氢氧化钠(NaOH)、0.01mol/L～0.05mol/L的PBST和水。
[0016]二、一种检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条的制备方法
[0017]方法包括以下具体步骤：
[0018]S1：制备镉离子抗原和山羊抗小鼠IgG抗体后，在硝酸纤维素膜上的T线和C线上分别固定包被镉离子抗原和山羊抗小鼠IgG抗体，形成检测区和对照区；
[0019]S2：将镉单克隆抗体用胶体金进行标记后，喷涂在金标垫上；镉单克隆抗体具有与镉离子结合的特异性位点；
[0020]S3：在PVC板的一端黏贴样品垫、从粘贴样品垫一端的PVC板到PVC板另一端上依次粘贴金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫后得到所述的试纸条。
[0021]本专利技术的有益效果：
[0022]本专利技术利用抗原抗体特异性结合的原理，制备出能够检测土壤中重金属镉的免疫层析试纸条，本专利技术的胶体金免疫层析试纸条具有可携带、现场检测、快速、灵敏、稳定、特异性等优点，能够对土壤中重金属镉进行半定量检测，且能满足较低的检测需求。
附图说明
[0023]图1为本专利技术胶体金免疫层析试纸条的结构示意图；
[0024]图2为本专利技术胶体金免疫层析试纸条标准品检测示意图；
[0025]图3为本专利技术胶体金免疫层析试纸条特异性检测示意图；
[0026]图4为本专利技术胶体金免疫层析试纸条实际样品检测示意图；
[0027]图5为本专利技术胶体金免疫层析试纸条标准检测卡示意图。
[0028]图中，1加样处、2T线(质控线)、3C线(检测线)、4样品垫、5金标垫、6硝酸纤维素膜、7吸水垫、8PVC板。
具体实施方式
[0029]以下通过附图和具体实施例来对本专利技术做更详尽的说明，但本专利技术不局限于此，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以做出若干改
进和润饰，这些改进和润饰也视为本专利技术的保护范围之内。
[0030]实施例1
[0031]1)镉离子抗原的制备：
[0032]本研究采用异硫氰酸酯法，使用磷酸盐缓冲溶液配置20mg/mL牛血清蛋白(BSA)，使用二甲基亚砜配置10mg 1
‑
(4
‑
异硫氰苄基)乙烯基二胺
‑
N,N,N',N'
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四乙酸(IEDTA)，将IEDTA与镉(1：1摩尔比)混合反应，形成半抗原镉络合物(Cd
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IEDTA)，再将Cd
‑
IEDTA络合物地加入BSA中，获得镉离子抗原(Cd
‑
IEDTA
‑
BSA)，将溶液在4℃条件下搅拌24小时，并用透析袋透析未反应的低分子量试剂。
[0033]2)镉离子免疫抗原的制备：
[0034]本研究采用异硫氰酸酯法，使用磷酸盐缓冲溶液配置20mg/mL钥孔血蓝蛋白(KLH)，使用二甲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条，试纸条包括PVC板(8)、样品垫(4)、金标垫(5)、硝酸纤维素膜(6)、吸水垫(7)、T线(2)和C线(3)，C线(3)为质控线，T线(2)为检测线；PVC板(8)的一端布置有样品垫(4)，PVC板(8)的另一端布置有吸水垫(7)，从样品垫(4)到吸水垫(7)方向上的PVC板(8)上依次布置金标垫(5)和硝酸纤维素膜(6)，硝酸纤维素膜(6)上布置有T线(2)和C线(3)，其特征在于：所述的试纸条用于检测土壤中重金属镉时，金标垫(5)上包被胶体金标记的镉单克隆抗体，T线(2)上包被镉离子抗原；C线(3)上包被山羊抗小鼠IgG抗体，样品垫(4)上滴加待测液。2.根据权利要求1所述的一种检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述胶体金标记的镉单克隆抗体的浓度为0.05～0.1mg/mL，金标垫(5)上包被量为1～2μl/cm。3.根据权利要求1所述的一种检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述金标垫(5)上的胶体金的直径为20～40nm。4.根据权利要求1所述的一种检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述T线(2)靠近金标垫(5)，C线(3)靠近吸水垫(7)。5.根据权利要求1所述的一种检测土壤中重金属镉的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述镉离子抗原的浓度为0.1～1mg/mL，T线(2)上包被量为1～2μl/cm。6.根据权利要求1所述的一种检测土壤中重金属镉的...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐霞红，权浩然，罗旭彪，涂新满，何开雨，王柳，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：