一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液及其制备方法技术

本发明专利技术提出了一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液，包括血清白蛋白、动物IgG、蛋白稳定剂、金属离子交换剂、盐缓冲液、Tween 20、Proclin300和纯化水。本发明专利技术样品稀释液添加了蛋白稳定剂和金属离子交换剂，可以有效降低基质效应的干扰，去除非特异性吸附，加入了健康动物IgG，不但可对待测样本进行保护，而且可以模拟血清环境，降低血清血浆样本中的异嗜性抗体和类风湿因子的干扰，降低假阳性，提高了ELISA检测结果的准确性和重复性。ELISA检测结果的准确性和重复性。ELISA检测结果的准确性和重复性。

【技术实现步骤摘要】
一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液及其制备方法


[0001]本专利技术涉及联酶免疫检测领域，尤其涉及一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液及其制备方法。

技术介绍

[0002]ELISA(酶联免疫吸附试验)是对样本中可溶性目标蛋白进行定量的一种方法。样品稀释液作为ELISA试剂盒的核心组件之一，它的功能就是保证ELISA试剂盒的准确度。理论上样品稀释液的组分应该是除不含目标蛋白外其他组分与待检样本的组分完全相同，但实际情况是这是不可能的，特别是人的血清、血浆样本。
[0003]目前行业内使用的样品稀释液通用为PBST液，即0.5％BSA的PBS
‑
T溶液，此溶液的优点是生产成本低廉，缺点是仅有盐缓冲液而无法对样本待测物进行有效保护，且与血清环境有较大区别，基质效应明显，用于细胞培养上清、组织研磨液、组织裂解液等低蛋白浓度的样本类型的应用效果还是可以的，加标回收率通常在80％
‑
120％。但对于血清和血浆这样高蛋白、组分复杂的样本，加标回收率只有20％
‑
50％，严重影响检测结果的准确性和重复性。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提出了一种加标回收率高、检测结果准确性和重复性好的一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液及其制备方法。
[0005]本专利技术的技术方案是这样实现的：本专利技术提供了一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液，包括血清白蛋白、动物IgG、蛋白稳定剂、金属离子交换剂、盐缓冲液、Tween 20、Proclin300和纯化水。
[0006]在以上技术方案的基础上，优选的，按照质量百分比计算，所述样品稀释液包括2％
‑
5％血清白蛋白、0.1％
‑
0.3％动物IgG、5％
‑
8％蛋白稳定剂、0.3％
‑
1.5％金属离子交换剂、0.5％盐缓冲液、0.05％
‑
0.1％Tween 20和0.03％
‑
0.18％Proclin300，余量为纯化水。
[0007]在以上技术方案的基础上，优选的，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白。
[0008]在以上技术方案的基础上，优选的，所述动物IgG为健康动物阴性血清Protein AG纯化后制得。
[0009]在以上技术方案的基础上，优选的，所述健康动物为健康小鼠、健康兔和健康羊中的一种。
[0010]在以上技术方案的基础上，优选的，所述盐缓冲液为每升盐缓冲液中含12g无水磷酸二氢钠，9g氯化钠，溶剂为纯化水。
[0011]在以上技术方案的基础上，优选的，所述蛋白稳定剂为麦芽糖或精氨酸。
[0012]在以上技术方案的基础上，优选的，所述金属离子交换剂为咪唑或柠檬酸。
[0013]更进一步优选的，还包括一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液的制备方法，其
特征在于，包括如下步骤：
[0014]S1，称取12g无水磷酸二氢钠和9g氯化钠置于500
‑
700ml纯化水中，搅拌至完全溶解，得到盐缓冲液A；
[0015]S2，称取5
‑
8g金属离子交换剂和40
‑
60g蛋白稳定剂，依次加入盐缓冲液A中，搅拌3
‑
5min，溶解后得到溶液B；
[0016]S3，称取8
‑
13g血清白蛋白加入溶液B中，继续搅拌3
‑
5min，得到溶液C；
[0017]S4，向溶液C中加入1
‑
5mg动物IgG、0.5
‑
1.5ml Tween 20和1
‑
5ml Proclin300，搅拌至完全溶解，调节pH为7.4，最后加入纯化水定容至1L，制备得到ELISA用样品稀释液。
[0018]本专利技术的一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液及其制备方法相对于现有技术具有以下有益效果：
[0019](1)本专利技术添加了麦芽糖或精氨酸作为蛋白稳定剂，添加咪唑或柠檬酸作为离子交换剂，可以有效降低基质效应的干扰，去除非特异性吸附，提高血清和血浆样本检测结果的准确性和重复性。
[0020](2)采用本专利技术的样品稀释液，将血清和血浆样本稀释2
‑
10倍后，可降低样本基质效应的干扰，提高试剂盒的检测灵敏度。
[0021](3)本专利技术的样品稀释液，加入了健康动物IgG，不但可对待测样本进行保护，而且可以模拟血清环境，降低血清血浆样本中的异嗜性抗体和类风湿因子的干扰，降低假阳性，提高了血清和血浆样本ELISA检测结果的准确性。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为ELISA检测试剂盒采用本专利技术实施例一的稀释液，所绘制的标准曲线图；
[0024]图2为ELISA检测试剂盒采用本专利技术实施例二的稀释液，所绘制的标准曲线图；
[0025]图3为ELISA检测试剂盒采用本专利技术实施例三的稀释液，所绘制的标准曲线图；
[0026]图4为ELISA检测试剂盒采用对比例的稀释液，所绘制的标准曲线图。
具体实施方式
[0027]下面将结合本专利技术实施方式，对本专利技术实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式仅仅是本专利技术一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本专利技术中的实施方式，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]实施例一
[0029]一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液，按照质量百分比计算，包括2％牛血清白蛋白、0.1％动物IgG、5％麦芽糖、0.3％咪唑、0.5％盐缓冲液、0.05％Tween 20和0.03％Proclin300，余量为纯化水。
[0030]动物IgG为健康小鼠阴性血清ProteinAG纯化后制得；盐缓冲液为每升盐缓冲液中
含12g无水磷酸二氢钠，9g氯化钠，溶剂为纯化水。
[0031]一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液的制备方法，包括如下步骤：
[0032]S1，称取12g无水磷酸二氢钠和9g氯化钠置于500ml纯化水中，搅拌至完全溶解，得到盐缓冲液A；
[0033]S2，称取5g咪唑和40g麦芽糖，依次加入盐缓冲液A中，搅拌3min，溶解后得到溶液B；
[0034]S3，称取8g牛血清白蛋白加入溶液B中，继续搅拌3min，得到溶液C；
[0035]S4，向溶液C中加入1mg动物IgG、0.5ml Tween 20和1ml Proclin300，搅拌至完全溶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液，其特征在于，样品稀释液包括血清白蛋白、动物IgG、蛋白稳定剂、金属离子交换剂、盐缓冲液、Tween 20、Proclin300和纯化水。2.如权利要求1所述的一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液，其特征在于，按照质量百分比计算，所述样品稀释液包括2％
‑
5％血清白蛋白、0.1％
‑
0.3％动物IgG、5％
‑
8％蛋白稳定剂、0.3％
‑
1.5％金属离子交换剂、0.5％盐缓冲液、0.05％
‑
0.1％Tween 20和0.03％
‑
0.18％Proclin300，余量为纯化水。3.如权利要求1所述的一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液，其特征在于，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白。4.如权利要求1所述的一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液，其特征在于，所述动物IgG为健康动物阴性血清ProteinAG纯化后制得。5.如权利要求4所述的一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液，其特征在于，所述健康动物为健康小鼠、健康兔和健康羊中的一种。6.如权利要求1所述的一种用于ELISA检测试剂盒的样品稀释液，其特征在于，所述盐缓冲液为每升盐缓冲液中含12g...

【专利技术属性】
技术研发人员：董垚，张丽媛，
申请(专利权)人：武汉菲恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：