一种检测氟氯氰菊酯的试纸条及方法技术

本发明专利技术公开了一种检测氟氯氰菊酯的试纸条及方法。该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有氟氯氰菊酯半抗原

【技术实现步骤摘要】
一种检测氟氯氰菊酯的试纸条及方法


[0001]本专利技术涉及一种检测氟氯氰菊酯的试纸条及方法，具体涉及一种用于检测氟氯氰菊酯的胶体金试纸条，其特别适用于果蔬中氟氯氰菊酯残留的检测。

技术介绍

[0002]氟氯氰菊酯(Cyfluthrin)是一种杀虫活性较高的拟除虫菊酯类杀虫剂，其对害虫的作用方式以触杀、胃毒作用为主，对多种鳞翅目害虫和某些地下害虫有良好的防效，被广泛应用于果蔬、茶叶和烟草中。但由于长期过量使用，其污染、残留所造成的环境问题已受到广泛关注。我国国家标准GB 2763规定了蔬菜及部分水果中氟氯氰菊酯的最大残留限量，因此建立相应农产品中氟氯氰菊酯的检测方法势在必行。
[0003]目前已报道的检测氟氯氰菊酯的方法主要是气相色谱法、气相色谱
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质谱法、高效液相色谱法、液相色谱
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质谱法等仪器方法。这些方法均须在实验室条件下操作，样品前处理繁琐费时，还需配备昂贵的仪器设备，检测成本较高、耗时长、操作复杂，在实际应用过程中有很大的限制性，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。因此，开发一种简单快速、适用于果蔬中氟氯氰菊酯残留的胶体金试纸条，可满足大量样品现场筛选和监控，能够更好地满足我国食品监管部门等开展检测工作。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种能够检测果蔬中氟氯氰菊酯残留的胶体金试纸条，并且提供一种高效、准确、简便、适于现场监控和大量样本筛查的检测方法。
[0005]本专利技术所提供的检测氟氯氰菊酯的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；所述反应膜上具有包被有氟氯氰菊酯半抗原
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载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线；所述结合物释放垫上喷涂有氟氯氰菊酯单克隆抗体
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胶体金标记物。
[0006]所述氟氯氰菊酯单克隆抗体是以氟氯氰菊酯半抗原
‑
载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。
[0007]所述氟氯氰菊酯半抗原
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载体蛋白偶联物由氟氯氰菊酯半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，所述氟氯氰菊酯半抗原是通过羟基二氯菊酸在吡啶中与二氯亚砜形成酰氯，再与(alpha S)
‑4‑
氟
‑
alpha
‑
羟基
‑3‑
苯氧基
‑
苯乙腈缩合成酯，然后与琥珀酸酐进行酯化反应得到，其分子结构式为：
[0008][0009]所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。
[0010]所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。
[0011]本专利技术的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：
[0012]1)制备喷涂有氟氯氰菊酯单克隆抗体
‑
胶体金标记物的结合物释放垫；
[0013]2)制备具有包被有氟氯氰菊酯半抗原
‑
载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；
[0014]3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。
[0015]具体地说，步骤包括：
[0016]1)通过羟基二氯菊酸在吡啶中与二氯亚砜形成酰氯，再与(alpha S)
‑4‑
氟
‑
alpha
‑
羟基
‑3‑
苯氧基
‑
苯乙腈缩合成酯，然后与琥珀酸酐进行酯化反应，制备氟氯氰菊酯半抗原；
[0017]2)将氟氯氰菊酯半抗原与载体蛋白偶联，制备氟氯氰菊酯半抗原
‑
载体蛋白偶联物；
[0018]3)用氟氯氰菊酯半抗原
‑
载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌氟氯氰菊酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
[0019]4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；
[0020]5)分别将氟氯氰菊酯半抗原
‑
载体蛋白偶联物和羊抗鼠抗抗体包被于反应膜的检测线(T)和质控线(C)上；
[0021]6)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；
[0022]7)将制备的氟氯氰菊酯单克隆抗体加入到制备的胶体金中，得到氟氯氰菊酯单克隆抗体
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胶体金标记物；
[0023]8)将氟氯氰菊酯单克隆抗体
‑
胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘1h后取出，置于干燥环境中保存备用；
[0024]9)将样品吸收垫用含0.5％牛血清白蛋白、pH为7.2、0.1mol/L的磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；
[0025]10)在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，结合物释放垫从起始端有1/3区域被样品吸收垫覆盖。最后切成3mm宽的小条，加塑料盒，真空包装，4～30℃条件下保存12个月。
[0026]本专利技术的另一个目的是提供一种应用上述试纸条检测果蔬中氟氯氰菊酯残留的
方法，它包括步骤：
[0027](1)样品前处理；
[0028](2)用试纸条进行检测；
[0029](3)分析检测结果。
[0030]本专利技术的氟氯氰菊酯快速检测试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，将氟氯氰菊酯单克隆抗体
‑
胶体金标记物固定于结合物释放垫上，样品中的氟氯氰菊酯在流动过程中与结合物释放垫上的氟氯氰菊酯单克隆抗体
‑
胶体金标记物结合，形成药物
‑
抗体
‑
胶体金标记物。样本中的药物与反应膜检测线上的氟氯氰菊酯半抗原
‑
载体蛋白偶联物竞争结合氟氯氰菊酯单克隆抗体
‑
胶体金标记物，根据检测线红色条带深浅来判断待测样品液中是否含有氟氯氰菊酯残留。
[0031]检测时，样品经处理后滴入试纸条卡孔内，当氟氯氰菊酯在样品中的浓度低于检测限或为零时，单克隆抗体
‑
胶体金标记物在层析过程中会与固定在反应膜上的氟氯氰菊酯半抗原
‑
载体蛋白偶联物结合，在检测线(T)和质控线(C)上各出现一条红色条带，且T线显色比C线显色深或与C线显色一致；如果氟氯氰菊酯在样品中的浓度等于或高于检测限，单克隆抗体
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胶体金标记物会与氟氯氰菊酯全部结合，从而在T线处因为竞争反应不会与氟氯氰菊酯半抗原
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载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带或比C线显色浅。如图3所示。
[0032]阴性：当质控线(C)显示出红色条带，检测线(T)同时也显本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测氟氯氰菊酯的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有氟氯氰菊酯半抗原
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载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有氟氯氰菊酯单克隆抗体
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胶体金标记物；所述氟氯氰菊酯单克隆抗体是以氟氯氰菊酯半抗原
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载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述氟氯氰菊酯半抗原
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载体蛋白偶联物由氟氯氰菊酯半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，其特征在于所述氟氯氰菊酯半抗原是通过羟基二氯菊酸在吡啶中与二氯亚砜形成酰氯，再与(alpha S)
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氟
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alpha
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羟基
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苯氧基
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苯乙腈...

【专利技术属性】
技术研发人员：万宇平，吴小胜，刘媛，赵义良，崔海峰，李云，赵正苗，田梅，王健，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：