处理方法、分析装置和表面处理液制造方法及图纸

本发明专利技术涉及处理方法、分析装置和表面处理液。本发明专利技术的课题在于消除因血红蛋白吸附在液相色谱的流路的内表面而产生的峰的展宽，提高峰间的分辨率。利用溶解有表面处理剂的液体对分析血液样本中的血红蛋白的液相色谱的流路进行表面处理，所述表面处理剂具有两个以上的在一个磷(P)原子上分别直接键合有羟基(

【技术实现步骤摘要】
处理方法、分析装置和表面处理液


[0001]本专利技术涉及基于液相色谱的血红蛋白分析中的流路的处理方法和血红蛋白的分析装置、以及流路的表面处理液。

技术介绍

[0002]对于以液相色谱为原理的分析装置而言，通常对配管、构成部件要求高耐压性，因此，主要由不锈钢的金属制构件构成。例如，如专利文献1中所公开的那样，配管和试样的进样阀、柱的壳体以及设置在柱的导入口处的金属制过滤器为金属制部件。特别地，如专利文献2所示，过滤器大多为不锈钢制过滤器。
[0003]如专利文献3所示，为了精度良好地测定作为糖尿病的指标的稳定型HbA1c，使用次氮基三(亚甲基膦酸)等作为将不稳定型HbA1c解离为HbA0和葡萄糖的解离剂。
[0004]现有技术文献
[0005]专利文献
[0006]专利文献1：日本实开平6
‑
7060号公报
[0007]专利文献2：日本专利第2827649号公报
[0008]专利文献3：日本特开平6
‑
331629号公报

技术实现思路

[0009]专利技术所要解决的问题
[0010]在基于高效液相色谱的血红蛋白测定方法中，有时产生血红蛋白的各级分的被检测到的峰的宽度扩展的现象。某个峰的宽度扩展时，与下一个出现的峰融合而使峰间的边界变得不明确，难以得到良好的分辨率。即，由于峰的宽度扩展而与下一个峰重叠，边界变得不明确。例如，像血红蛋白中的HbA2、HbS那样，由于血红蛋白与柱之间的疏水相互作用、由血红蛋白的电荷与柱的载体的电荷产生的相互作用而容易吸附到柱上的血红蛋白，峰的宽度变宽，无法充分地与相邻的峰分离。
[0011]本专利技术的处理方法的课题在于，消除因血红蛋白吸附在液相色谱的测定流路的内表面而产生的峰的展宽，提高峰间的分辨率。
[0012]用于解决问题的方法
[0013]本专利技术的处理方法中，利用溶解有表面处理剂的液体对分析血液样本中的血红蛋白的液相色谱的流路进行表面处理，所述表面处理剂具有两个以上的在一个磷(P)原子上分别直接键合有羟基(
‑
OH)和氧代基(＝O)的化学结构并且分子量为200以下。
[0014]专利技术效果
[0015]根据本专利技术的处理方法，能够缩窄通过液相色谱得到的色谱图的血红蛋白峰的宽度，提高峰间的分辨率。
附图说明
[0016]图1为表示作为实施本专利技术的实施方式的处理方法的分析装置的高效液相色谱分析系统的概要的示意图。
[0017]图2为实施例的血红蛋白分析图。
[0018]图3为比较例的血红蛋白分析图。
[0019]图4为用于说明两个峰的分离度的虚拟血红蛋白分析图。
[0020]图5为亚甲基二膦酸的解离平衡反应。
[0021]图6为焦磷酸的解离平衡反应。
具体实施方式
[0022]血红蛋白具有复杂的立体结构，因此，电荷性且疏水性的吸附作用强，容易与测定流路的配管和检测器等所使用的金属表面、特别是铁原子结合。另外，在血红蛋白分析时，有时相邻的峰彼此融合等而不能得到良好的分辨率。推测其原因在于，在样本被导入分析装置中并经由柱从检测器通过的过程中，血液样本中的血红蛋白与测定流路中的含铁构件接触并被吸附，使检测峰的宽度扩大。
[0023]在此，由于柱要求耐压性，因此难以用树脂替代，必然使用不锈钢这样的含铁金属。另外，关于配管，正在推进用聚醚醚酮(PEEK)这样的树脂的替代，但检测器中不能用树脂替代，存在铁原子露出于内表面的部分。
[0024]因此，在本实施方式的处理方法中，通过利用溶解有作为具有后述化学结构的物质的表面处理剂的液体(以下也称为表面处理液)对液相色谱的分析装置的流路的内表面进行表面处理，可以阻碍流路中的铁与血红蛋白的结合，由此，可以消除峰的宽度变宽的现象。
[0025]即，表面处理剂具有如下化学结构：在溶解于液体中的表面处理剂1分子中，离子化的羟基(
‑
O
‑
)和氧代基(＝O)直接键合于两个以上的磷原子各原子上。换言之，表面处理剂也可以说是在磷原子上直接键合有酸性质子解离后的羟基(
‑
O
‑
)和氧代基(＝O)的化合物、即含氧酸。这些两个以上的离子化的羟基与流路的内表面的金属原子、特别是铁原子结合，形成螯合物。即，可以认为，1分子中的键合于不同磷原子上的带负电荷的羟基通过电相互作用与同一个带正电荷的铁原子结合。因此，在液相色谱的分析装置的流路中浸渍溶解有表面处理剂的液体时，表面处理剂与铁结合，以覆盖露出于流路的内表面的铁部分的表面。另外认为，与经由一个羟基与铁原子结合的化合物相比，利用两个羟基与铁原子结合的化合物更加牢固地吸附在铁原子上。因此，处于与流路的内表面的铁结合的状态的表面处理剂不易与流经流路的血红蛋白置换，不易从流路的内表面脱落。因此，可以避免血红蛋白与金属直接接触。而且，表面处理剂是分子量为200以下的小分子，羟基和氧代基的分子量相对于表面处理剂的分子量的比例大。由于羟基和氧代基的亲水性高，因此表面处理剂显示出高亲水性。因此，疏水吸附作用强的血红蛋白不易吸附在包覆铁的表面处理剂上。因此认为，通过利用表面处理液浸渍样本所流经的流路，可以缩窄血红蛋白的峰的宽度。
[0026]在此，在表面处理剂的上述化学结构中，优选在一个磷(P)原子上键合有另一个羟基(
‑
OH)。即，表面处理剂优选具有两个以上的在一个磷原子上分别直接键合有两个羟基和一个氧代基(＝O)的化学结构。这样，认为通过使表面处理剂在1分子中具有至少4个羟基，
能够更高效且高频率地进行与铁原子的螯合，进一步抑制峰的展宽。另外，认为通过使表面处理剂在1分子中具有至少4个羟基，表面处理剂的亲水性变高，可以阻碍血红蛋白吸附在与流路的金属部分结合的表面处理剂上。另外，优选表面处理剂不含有例如苯基或烷基这样的疏水性高的官能团。通过使用不含疏水性高的官能团的表面处理剂，疏水吸附作用强的血红蛋白不易吸附在包覆铁的表面处理剂上。另外，优选表面处理剂不含有例如羧基或磺基这样的酸解离常数比羟基小的官能团。通过使用不含有酸解离常数比羟基小的官能团的表面处理剂，电荷吸附作用强的血红蛋白不易吸附在包覆铁的表面处理剂上。作为这样的表面处理剂，可以使用由下述化学式1所示的结构式表示的亚甲基二膦酸(分子量176)、1,2
‑
亚乙基二膦酸(分子量190.03)、由下述化学式2所示的结构式表示的焦磷酸(分子量177.98)。其中，最优选亚甲基二膦酸作为表面处理剂。需要说明的是，连接表面处理剂所具有的两个以上的磷(P)原子的原子的种类没有限定，例如可以是碳(C)、氮(N)、氧(O)，也可以经由多种原子连接。另外，连接表面处理剂所具有的两个以上磷(P)原子的原子数量也没有限定。
[0027][化学式1][0028][0029][化学式2][0030][0031]利用表面处理液进行表面处理的流路是样本所流经的流路。具体而言，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种处理方法，其中，利用溶解有表面处理剂的液体对分析血液样本中的血红蛋白的液相色谱的流路进行表面处理，所述表面处理剂具有两个以上的在一个磷原子P上分别直接键合有羟基
‑
OH和氧代基＝O的化学结构并且分子量为200以下。2.如权利要求1所述的处理方法，其中，所述表面处理剂的所述化学结构中，在所述一个磷原子P上键合有另一个羟基
‑
OH。3.如权利要求1或权利要求2所述的处理方法，其中，所述表面处理剂为亚甲基二膦酸。4.如权利要求1～权利要求3中任一项所述的处理方法，其中，溶解有所述表面处理剂的液体的pH为比所述表面处理剂通过解离出酸性质子而形成具有两个在一个磷原子P上分别直接键合有酸性质子解离后的羟基
‑
O
‑
和氧代基＝O的化学结构的结构时的pKa大的值。5.如权利要求1～权利要求4中任一项所述的处理方法，其中，所述表面处理在血液样本的血红蛋白分析之前进行。6.如权利要求1～权利要求5中任一项所述的处理方法，其中，所述表面处理与血液样本的血红蛋白分析同时进行。7.一种分析装置，其为基...

【专利技术属性】
技术研发人员：中山雄介，
申请(专利权)人：爱科来株式会社，
类型：发明
国别省市：