CTLA-4抗体及其制备方法技术

本文公开了CTLA-4单克隆抗体以及该抗体的制备和用途，本发明专利技术CTLA-4抗体具有毒性更低和活性更佳的优点；另外，本发明专利技术CTLA-4抗体还具有低含量的高甘露糖糖型和/或低含量的唾液酸化糖型，有助于延长抗体的半衰期和/或降低免疫原性。免疫原性。免疫原性。

【技术实现步骤摘要】
1932)、CD47(Liu X，et al.(2015)，Nat Med.21(10)：1209-1215)、吲哚胺-2，3-双加氧酶(IDO)(Friberg M，et al.(2002)，Cancer.101：151-155)、CD94/NKG2A(Muntasell A，et al.(2017)，Curr Opin Immunol.45：73-81)、杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)(Tu MM，et al.(2016)，Front Immunol.7：116)、T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域(TIGIT)(Johnston RJ，et al.(2014)，Cancer Cell.26：923-937)。这些刺激性的受体和配体，即目前研究领域热论的“免疫检查点”，在免疫系统的自我调节中起到至关重要的作用，使免疫系统的功能保持在正常范围内而不至于过度活化。在癌症机体中，利用激动剂靶向刺激性受体或利用抑制剂阻断抑制性受体，就能调节免疫应答，使免疫系统识别和攻击肿瘤细胞，达到治疗的效果。对于上述免疫检查点，目前有一部分已开发出临床中或上市的治疗性药物(Elad S，et al.(2014)，Chin J Cancer.33(9)：434-444)，其中CTLA-4阻断剂就是第一个应用于临床癌症治疗的单克隆抗体药物。
[0005]目前较为人所知的CTLA-4单克隆抗体是百时美施贵宝公司的伊匹单抗(Ipilimumab，)，以及阿斯利康公司尚处于临床阶段的曲美母单抗(Tremelimumab)。它们的机理都是通过阻断CTLA-4与B7的结合，解放B7蛋白使其能跟CD28结合，从而增强T细胞的增殖反应。在临床前几种已建立的小鼠模型中阻断CTLA-4/B7相互作用，已经显示出对可移植肿瘤的排斥，包括结肠癌，前列腺癌，淋巴瘤和肾癌(KormanAJ，et al.(2006)，Adv Immunol.90：297-339)。然而，这种作用机制推广到人体上，仅对一小部分治疗患者提供了有限的临床益处。因此，人们认为应该存在与宿主依赖因子相关的未知机制(Romano E，et a1.(2015)，Proc Natl Acad Sci USA.112(19)：6140-6145)。

技术实现思路

[0006]基于此，有必要提供一种毒性更低、活性更佳的新型CTLA-4单克隆抗体药物。本专利技术的上述目的通过以下技术手段实现：
[0007]本专利技术提供一种低含量的高甘露糖糖型和/或低含量的唾液酸化糖型的抗CTLA-4抗体，有助于延长抗体的半衰期和/或降低免疫原性。在一些实施方案中，所述抗体为ADCC增强的抗CTLA-4抗体，用于靶向病患细胞或组织，增大药物的抗肿瘤效果。
[0008]具体地，一方面，本专利技术提供了针对CTLA-4的单克隆抗体，所述单克隆抗体包含
[0009](1)重链CDR1，其包含SEQ ID NO：12所示的序列，与所述序列具有至少80％、90％、优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选1个、2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，
[0010]重链CDR2，其包含SEQ ID NO：13所示的序列，与所述序列具有至少80％、90％、优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选1个、2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，
[0011]重链CDR3，其包含SEQ ID NO：14所示的序列，与所述序列具有至少80％、90％、优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选1个、2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，
[0012]轻链CDR1，其包含SEQ ID NO：15所示的序列，与所述序列具有至少80％、90％、优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选1个、2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，
[0013]轻链CDR2，其包含SEQ ID NO：16所示的序列，与所述序列具有至少80％、90％、优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选1个、2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，和
[0014]轻链CDR3，其包含SEQ ID NO：17所示的序列，与所述序列具有至少80％、90％、优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选1个、2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
[0015]或
[0016](2)重链可变区，其包含SEQ ID NO：18所示的序列，与所述序列具有至少80％，优选至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选1个、2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成，和
[0017]轻链可变区，其包含SEQ ID NO：19所示的序列，与所述序列具有至少80％，优选至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个(优选1个、2个或3个)保守氨基酸突变(优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，或由其组成；
[0018]所述单克隆抗体具有降低的岩藻糖基化水平。
[0019]在具体的实施方案中，所述单克隆抗体包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列，与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少80％，优选至少81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源性的序列，或由其组成；
[0020]所述轻链包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少80％，优选至少81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源性的序列，或由其组成。
[0021]在具体的实施方案中，所述重链由SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO：3的核苷酸序列具有至少80％，优选至少81％、82％、83％、84％、85％、86％、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.针对CTLA-4的单克隆抗体，所述单克隆抗体包含(1)重链CDR1，其包含SEQ ID NO：12所示的序列，或由其组成，重链CDR2，其包含SEQ ID NO：13所示的序列，或由其组成，重链CDR3，其包含SEQ ID NO：14所示的序列，或由其组成，轻链CDR1，其包含SEQ ID NO：15所示的序列，或由其组成，轻链CDR2，其包含SEQ ID NO：16所示的序列，或由其组成，和轻链CDR3，其包含SEQ ID NO：17所示的序列，或由其组成；或(2)重链可变区，其包含SEQ ID NO：18所示的序列，与所述序列具有至少80％、90％、优选91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个保守氨基酸突变的氨基酸序列，或由其组成，和轻链可变区，其包含SEQ ID NO：19所示的序列，与所述序列具有至少80％、90％、优选91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列，或与所述序列相比具有一个或多个保守氨基酸突变的氨基酸序列，或由其组成；其特征在于所述单克隆抗体Fc区的高甘露糖糖型总量＜5％和/或唾液酸化糖型总量＜3％。2.权利要求1的单克隆抗体，其包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列，与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少80％，至少81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源性的序列，或由其组成；所述轻链包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少80％，至少81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源性...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏紫琪，秦超，俞金泉，
申请(专利权)人：百奥泰生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：