一种分泌钩吻素己单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种分泌钩吻素己单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。本发明专利技术中的杂交瘤细胞株MY

【技术实现步骤摘要】
一种分泌钩吻素己单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫检测
，具体涉及一种分泌钩吻素己单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]钩吻(Gelsemium elegans)是马钱科胡蔓藤属植物，全株剧毒，俗称断肠草，亦称之为大茶药。钩吻广泛分布在我国华南的福建、广东和广西的山区；此外，它在东南亚各国、印度和美国中南地区亦有分布。因钩吻毒性较大，民间主要将其外用，用于治疗皮肤类疾病；另外，钩吻具有驱虫效果，华南地区也将其用于兽医驱虫。现代药理学研究表明钩吻中含有丰富的生物碱，它们具有抗肿瘤、抗炎、镇痛和免疫调节等作用。由于钩吻属于剧毒植物，微量食用便能够导致中毒，严重者甚至死亡。钩吻的鲜花成明黄色，艳丽夺目，人们经常将其误认为金银花食用引发中毒。此外，钩吻还是一种有毒蜜源植物，在其盛花期，蜜蜂会采集其花蜜和花粉，将有毒生物碱迁移并富集在蜂蜜中形成有毒蜂蜜，人一旦食用该蜂蜜，便会发生蜜蜂中毒事件。目前，从钩吻中识别和鉴定出的生物碱种类高达120余种，它们具有较好的生理活性，依据化学结构的不同，主要将其分为6大类，分别为gelsedine型、gelsemine型、humantenine型、koumine型、sarpagine型和yohimbane型。其中gelsedine型的生物碱的毒性最强，以钩吻素己为代表性物质，而钩吻素己在小鼠中LD
50
为0.165 mg/kg B.W.，属于剧毒性化合物。由于钩吻中钩吻素己及其衍生物的含量较高，且具有强烈的毒性，足见它是引发钩吻中毒的关键化合物之一。因此可以通过检测样本中钩吻素己有无与含量用于保障食品安全和钩吻中毒后的诊断鉴别，这对规避中毒事件、挽救患者生命具有至关重要的作用。由此可见，蜂蜜、血浆和呕吐物等样本中钩吻生物碱的快速检测与含量测定尤为重要。
[0003]当前，样本中钩吻生物碱的含量检测主要依赖于仪器分析，如高效液相色谱、液相串联质谱等大型仪器设备，需要专业的人员，且耗时费力、费用较高，难以满足现场、快速、简单的需要。基于抗原抗体特异性结合开发的免疫分析方法具有简单、快速、易于操作等优点，目前已经广泛应用于食品安全、临床诊断等领域。免疫分析的方法的核心是抗体，一旦获得优质的抗体，可以多种免疫分析模式可供选择，构建不同的分析方法。目前，针对剧毒物质钩吻素己等钩吻生物碱的免疫分析方法鲜有报道，这严重限制了免疫快速检测方法在样本中钩吻生物碱分析应用。为了保障人们的生命安全，快速鉴别钩吻有毒样本、识别钩吻中毒等，亟需开发钩吻素己的免疫分析方法。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种分泌钩吻素己单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。
[0005]具体地，本专利技术经过长期试验，筛选出了一株具有高灵敏度和高特异性的分泌钩吻素己单克隆抗体的杂交瘤细胞株MY
‑
2，并将其提交相关的机构进行保藏，保藏编号为
CGMCC NO. 20797；分类命名为：BalB/C小鼠杂交瘤细胞株，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC；保藏时间是2020年10月12日；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；邮编为100101。
[0006]根据本专利技术所提供的杂交瘤细胞株MY
‑
2，本专利技术还提供了钩吻素己单克隆抗体，其由所述的杂交瘤细胞株MY
‑
2分泌获得。
[0007]作为优选，所述钩吻素己单克隆抗体的重、轻链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。
[0008]在一些实施方案中，所述单克隆抗体的制备方法如下：将杂交瘤细胞株MY
‑
2注射到液体石蜡预处理的小鼠腹腔内，采用体内诱生法制备腹水，辛酸
‑
硫酸铵法纯化得单克隆抗体。
[0009]本专利技术进一步提供一种用于检测钩吻素己的试剂、试纸条或试剂盒，其含有所述的钩吻素己单克隆抗体。
[0010]在一些实施方案中，所述的试纸条可以为免疫层析试纸条或胶体金免疫检测试纸条。
[0011]在一些实施方案中，所述的试剂盒可以为酶联免疫分析检测试剂盒。
[0012]本专利技术还提供所述的钩吻素己单克隆抗体或所述的试剂、试纸条或试剂盒在检测钩吻素己方面的应用。
[0013]具体地，本专利技术还提供一种检测钩吻素己的方法，包括：使用所述的钩吻素己单克隆抗体，或者使用所述的试剂、试纸条或试剂盒。
[0014]本专利技术的钩吻素己单克隆抗体的检测效果不受基质干扰，因此不仅可以用于对可能含有钩吻素己的食物（如蜂蜜等）或者的检测，还可以用于对患者血液或呕吐物样本的检测，以确定其是中毒原因是否是钩吻素己。
[0015]基于此特点，本专利技术还提供所述的钩吻素己单克隆抗体或所述的试剂、试纸条或试剂盒在检测有毒食物方面的应用，所述有毒食物中含有钩吻素己。
[0016]进一步的，本专利技术提供一种检测有毒食物的方法，所述有毒食物中含有钩吻素己，所述方法包括：使用所述的钩吻素己单克隆抗体，或者使用所述的试剂、试纸条或试剂盒。
[0017]基于上述技术方案，本专利技术至少具有以下有益效果：本专利技术中的杂交瘤细胞株MY
‑
2分泌的的单克隆抗体对钩吻素己具有良好的特异性和灵敏度(IC
50
值可达0.66 ng/mL)，可以实现对蜂蜜、血浆、呕吐物等样本中钩吻素己的含量检测。由于钩吻素己属于剧毒植物钩吻的特征性化合物，检测样本中钩吻素己的含量，对于保障蜂蜜质量安全、规避中毒事件、及时诊断钩吻中毒人员具有重大的实际应用价值。
附图说明
[0018]图1为本专利技术实施例中所使用的钩吻素己半抗原(HGE
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HS)的化学结构。
[0019]图2为本专利技术钩吻素己单克隆抗体对钩吻素己的抑制标准曲线。
具体实施方式
[0020]以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。
[0021]实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，
或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
[0022]实施例1：完全抗原的合成及动物免疫1、钩吻素己半抗原HGE
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HS的制备：在半抗原设计与合成中发现，钩吻素己化学结构中不含有可供间隔臂链接的羟基、羧基、氨基等位点，而钩吻素己的衍生物，14
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羟基钩吻素己较好的保留了钩吻素己的化学结构，且在碳14位上存在一个羟基基团，易于链接间隔臂。本专利技术故采用14
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羟基钩吻素己作为制备钩吻素己半抗原的材料，采用以下方法进行合成制备。
[0023]（1）用6.0 mL无水吡啶分别溶解14
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羟基钩吻素己(20 mg)与琥珀酸酐(10 mg)，将两种溶液混合，并置于油浴磁力搅拌器避光反应9 h (50℃，240 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分泌钩吻素己单克隆抗体的杂交瘤细胞株MY
‑
2，其保藏编号为CGMCC NO. 20797。2.钩吻素己单克隆抗体，其由权利要求1所述的杂交瘤细胞株MY
‑
2分泌获得。3.一种用于检测钩吻素己的试剂、试纸条或试剂盒，其含有权利要求2所述的钩吻素己单克隆抗体。4.权利要求2所述的钩吻素己单克隆抗体或权利要求3所述的试剂、试纸条或试剂盒在非诊断目的检测钩吻素己方面的应用。5.一种非诊断...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨术鹏，周金慧，李熠，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：