一种检测金橙Ⅱ药物的试纸条、制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种检测金橙Ⅱ药物的试纸条、制备方法及其应用，该试纸条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，其中，滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；免疫胶体金纸片上设有胶体金标记的抗金橙Ⅱ单克隆抗体，免疫硝酸纤维素膜上设有包被金橙

【技术实现步骤摘要】
一种检测金橙Ⅱ药物的试纸条、制备方法及其应用


[0001]属于食品安全检测领域，具体涉及一种检测金橙Ⅱ药物的试纸条、制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]金橙Ⅱ，又名酸性橙Ⅱ、二号橙、桔黄橙或酸性金黄Ⅱ，俗名金黄粉，化学名为2-萘酚偶氮对苯磺酸钠，是一种非生物合成着色剂，易溶于乙醇、乙腈等。是一种化工染料，主要用于皮革、纺织物染色，禁止作为食品添加剂使用。但其具有色泽鲜艳、着色稳定、价廉等特点，一些不法商贩将其用于药材生产与加工，严重危害了消费者健康。
[0003]金黄粉具有较强的毒性和致癌性，国内外有关规定均严禁用于食品着色。然而，近年来，广东、四川等地均有报道某些厂家在烧腊等食品中滥用这类染料，存在着严重的食品安全隐患。目前，金橙Ⅱ检验方法方法多为高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱、反相高效液相色谱法等。高效液相色谱及液质联用色谱等方法是最先进的现代分析手段，能够很好的分离检测金橙Ⅱ，并且达到一个很低的检测限，灵敏度非常高。采用标准品对照法，可以非常精确的检测出样本中金橙Ⅱ的含量。
[0004]另外，市面上还未发现有金橙Ⅱ的快检试剂盒，若采用上述实验方法，操作过程都比较复杂，实验时间长、实验成本高，且并不适用于现场检测。本专利技术方法在检测步骤和检测成本上都有着明显的优势。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种检测金橙Ⅱ药物的试纸条、制备方法及其应用，本专利技术中的检测试纸条及检测方法在检测步骤和检测成本上都有着明显的优势，适合于现场检测。
[0006]本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
[0007]本专利技术提出了一种检测金橙Ⅱ药物的试纸条，包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；免疫胶体金纸片上设有胶体金标记的抗金橙Ⅱ单克隆抗体，免疫硝酸纤维素膜上设有包被金橙
Ⅱ-
牛血清白蛋白复合物的检测线和包被羊抗兔IgG的质控线。
[0008]本专利技术还提出一种上述试纸条的制备方法，包括以下步骤：将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在衬底上，制得试纸条。
[0009]本专利技术还提出一种快速检测金橙Ⅱ药物的试剂盒，包括盒体和检测卡，该检测卡包括壳体和上述的试纸条。
[0010]本专利技术还提出一种利用上述试剂盒快速检测金橙Ⅱ药物的方法，包括以下步骤：
[0011]样品制备：称取样品适量，进行预处理；
[0012]标准品溶液制备：取金橙Ⅱ标准品适量，用二氯甲烷溶解；
[0013]待测液制备：向样品或标准品溶液中分别加入稀释液、提取液，充分振荡后离心，吸取离心后的上清液部分于试管中，吹干，再向吹干后的试管中加入复溶液，充分混匀；
[0014]检测：取待测液滴加入金标微孔中，分析检测结果。
[0015]本专利技术还提出了一种上述试剂盒在检测中药材、中药饮片及食品中残留的金橙Ⅱ药物中的应用。
[0016]本专利技术的有益效果是：
[0017]本专利技术提供了一种检测金橙Ⅱ药物的试纸条、制备方法及其应用，本专利技术中的试纸条通过免疫竞争抑制法来定性检测中药材、中药饮片及食品中出现的金橙Ⅱ成分，具有特异性强、灵敏性高、操作简单方便等优点。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0019]图1为金橙Ⅱ胶体金检测试纸条示意图。
[0020]附图标号：1-滤样纸；2-免疫胶体金纸片；3-硝酸纤维素膜；4-吸水纸。
具体实施方式
[0021]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0022]下面对本专利技术实施例提供的一种检测金橙Ⅱ药物的试纸条、制备方法及其应用进行具体说明。
[0023]本专利技术实施例提供了一种检测金橙Ⅱ药物的试纸条，包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；免疫胶体金纸片上设有胶体金标记的抗金橙Ⅱ单克隆抗体，免疫硝酸纤维素膜上设有包被金橙
Ⅱ-
牛血清白蛋白复合物的检测线和包被羊抗兔IgG的质控线。
[0024]本专利技术实施例所提供的试纸条的检测原理：将待检样本滴加于微孔试剂中，混匀后，将试纸条插入孵育后的微孔试剂中，待检样品液与微孔中的金标抗体结合后一起向免疫硝酸纤维素膜扩散；若待检样品液中金橙Ⅱ药物的含量高，则扩散过程中待检样品液中的金橙Ⅱ药物可与金标抗体相结合，进而完全封闭金标抗体上金橙Ⅱ药物的抗原结合点，阻止金标抗体与免疫硝酸纤维素膜上金橙Ⅱ药物半抗原-牛血清白蛋白复合结合，检测线不显色，而羊抗兔IgG则可与金标抗体结合，质控线显色；若待检样品液中金橙Ⅱ药物的含量低或无，则金标抗体上的抗原结合位点不能被封闭，进而金标抗体会与免疫硝酸纤维素膜上金橙Ⅱ药物半抗原-牛血清白蛋白结合，检测线显色，同时羊抗兔IgG也可与金标抗体结合，质控线显色。如果质控线不显色，则试纸失效。
[0025]本专利技术实施例还提供一种上述试纸条的制备方法，包括以下步骤：
[0026]将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在衬底上，制得试纸条。
[0027]在一些实施方式中，免疫胶体金纸片的制备包括以下步骤：
[0028]制备免疫胶体金溶液；用预处理液浸泡玻璃纤维纸，干燥后，再用免疫胶体金溶液喷涂预处理后的玻璃纤维纸，干燥，制得免疫胶体金纸片。
[0029]在一些实施方式中，免疫胶体金溶液的制备包括以下步骤：用喷金缓冲液稀释胶体金标记的抗金橙Ⅱ单克隆抗体，获得OD
540
值为1.9-2.1的免疫胶体金溶液，抗金橙Ⅱ单克隆抗体与胶体金结合的标记浓度为20-30μg/ml，胶体金的粒径为30-40nm，优选的，胶体金的粒径为35nm。
[0030]本专利技术实施例中的胶体金可以购自市售或者采用下述的两步还原法制备，胶体金的粒径为30-40nm，优选的，胶体金的粒径为35nm。采用本专利技术实施例中的两步还原法，得到胶体金分子呈大小均一的30nm球形颗粒，由于胶体金颗粒大小适中、整体均一，使其与单克隆抗体的结合效率更高、效果更稳定。
[0031]在一些实施方式中，喷金缓冲液包括以下质量百分比的成分：10～15wt％1.0M Tris液，0.2～0.3wt％NaOH，0.2～0.5wt％聚乙二醇30000，0.2～0.5wt％聚乙二醇6000，0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测金橙Ⅱ药物的试纸条，所述试纸条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于，所述滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于衬底上；所述免疫胶体金纸片上设有胶体金标记的抗金橙Ⅱ单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被金橙
Ⅱ-
牛血清白蛋白复合物的检测线和包被羊抗兔IgG的质控线。2.一种根据权利要求1所述的试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述滤样纸、所述免疫胶体金纸片、所述免疫硝酸纤维素膜、所述吸水纸依次粘贴在所述衬底上，制得所述试纸条。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述免疫胶体金纸片的制备包括以下步骤：制备免疫胶体金溶液；用预处理液浸泡玻璃纤维纸，干燥后，再用免疫胶体金溶液喷涂预处理后的玻璃纤维纸，干燥，制得所述免疫胶体金纸片。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述免疫胶体金溶液的制备包括以下步骤：用喷金缓冲液稀释胶体金标记的抗金橙Ⅱ单克隆抗体，获得OD
540
值为1.9-2.1的免疫胶体金溶液，所述抗金橙Ⅱ单克隆抗体与胶体金结合的标记浓度为20-30μg/ml，所述胶体金的粒径为30-40nm，优选的，胶体金的粒径为35nm。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述喷金缓冲液包括以下质量百分比的成分：10～15wt％1.0M Tris液，0.2～0.3wt％NaOH，0.2～0.5wt％聚乙二醇30000，0.2～0.5wt％聚乙二醇6000，0.1～0.2wt％牛血清白蛋白，0.1～0.3wt％蔗糖，0.3～0.4wt％酪蛋白，以及0.02～0.08wt％海藻糖，余量为水，且所述喷金缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：李丰，毓志超，江燕玲，文永贤，杨韵，
申请(专利权)人：广州智汇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：